使用荧光宏镜检查,通过"完整小鼠头骨"进行脑脊液传输的 Vivo 成像

这项新技术用于实时中观成像荧光CSF痕迹通过活鼠的完整头骨可用于评估淋巴运输。主要优点是，这种技术能够以其他成像方式的一小部分成本对体内内颅内示踪剂进行动态测量。将头板放在 cisterna 磁石管上所需的程序简单且具有微创性，但需要正确操作。

需要直观地演示此方法的关键步骤，以最大限度地提高图像质量，并实现不同小鼠和实验组之间的可重复比较。在确认脚趾捏湿颈部和头部与无菌水，并剃湿的毛皮反应不足后。用酒精拭子擦拭裸露的皮肤，去除任何残留的头发，将鼠标放在温度控制垫顶部的立体定向框架中。

将软膏涂抹在动物的眼睛上，用氯环己丁拭子清洁裸露的皮肤。2分钟后，用酒精擦拭去除氯己丁，并涂抹碘溶液。当iodone干燥注射皮下镇痛到头骨和颈部的顶部。

从覆盖腹皮的颈部部分开始，在覆盖的皮肤上进行中线切割，继续向轨道内线持续。横向将切口延伸至边界，其中时间肌肉插入头骨，并去除模糊切口的所有皮肤，以暴露正面骨骼和面骨。用无菌盐水灌溉头骨，并使用棉签清洁表面，直到没有碎屑和头发。

插入西斯特纳磁石罐后，将牙科水泥和氰丙烯酸酯混合物涂抹在边界周围头板的腹侧。将头板放在头骨上，使板的前部边框与鼻骨的后尖端对齐，后边框与侧骨的前部对齐，确保下垂缝合线相对于窗口居中并直。请务必确保头板已固定，并且不会妨碍 Cisterna 磁石罐的视场。

使用几滴胶水加速器固定头板的位置，用水泥混合物填充所有剩余的间隙。将 cisterna 磁格纳罐粘在头板上，并使用头板将鼠标放入固定位置的头部支架中。小心地将鼠标和连接到管上的输液泵放在推车上，以运送到宏观示波器上，然后将头架放在宏示波器的舞台上。

确保从注射器泵到 cisterna 磁石管的管路没有紧绷，并且没有扭结。观察粘膜的呼吸速率和粉红色着色，以确认良好的氧合。打开宏镜摄像头和发光二极管，然后启动实时模式。

调整成像场的放大倍率，使场顶部的鼻前缝合线和底部的羊皮缝合线可以清晰可视化。一旦将头部支架固定到大内窥镜阶段，将宏观镜聚焦在暴露的头骨上，直到焦平面位于日冕缝合线后部骨骼的侧侧。对于 CSF 示踪剂输液，将输液泵设置为适当的速率和体积，并设置每个通道的示踪剂的适当激励波长和曝光时间。

然后，在同时启动示踪剂输液和成像之前，检查宏镜上的触发功能是否正确。在成像过程中，鼻索前体、下垂、日冕和羊皮素缝合线很容易识别。一旦CSF示踪剂被注入西斯特纳磁石，示踪剂荧光首先在大型的亚布拉奇内德CSF池中观察到，在奥菲托前蓄水池和松树凹槽附近的四分米蓄水池，并最终围绕中脑动脉。

然后，CSF 示踪器沿着中脑动脉皮质皮皮分的血管空间进入大脑。创伤性脑损伤后CSF运输成像显示示踪剂最初在奥菲多前体蓄水池，但沿着皮质周围血管空间的淋巴流入在损伤的一侧被完全废除。体内图像的定量分析表明，与反边半球相比，伊皮拉特流入面积减少了近三分之一。

为了避免运动伪影和焦平面的变化，请记住正确固定头板和头板支架，并检查动物的麻醉水平。实验后，通过使用实际的该技术量化示踪剂穿透率，可以进一步验证实验后，以生理和微创的方式研究淋巴系统，并可以帮助解决未来有关CSF在健康和疾病中流体动力学的问题。