探针电喷雾电离质谱分析的样品制备

因此，这是一种独特的常压质谱技术，特别适用于体外和体内生物样本的分析。由于该技术通常无需对样本进行特殊预处理（如细胞分选、组分分离和浓缩），因此能够在最小损失生物组分的情况下分析样本，尤其适用于那些含量极微的成分。该技术使您能够通过质谱法直接在数分钟内分析原始组织材料。

快速性不会影响系统的稳健性，这是该技术的固有主要优势。您只需准备二氧化硅、10 毫克组织样本和 10 微升增殖剂，并将它们放入一次性 cartridge 中即可。

将其设置到PESI-MS仪器上，几分钟内即可获得结果。通过选择合适的质谱仪，可注释出分子的身份信息。首先，从冰箱中取出肝或肾组织。

在软木板上，使用解剖刀或刀片将组织样本切成大约 2×2×2 毫米的大小。或者，使用穿刺器打孔取样，并将柱状组织修整至 2 毫米长。如果组织被血液污染，需用预冷的磷酸盐缓冲液短暂清洗。

取约10毫克剪切或打孔取得的样品，放入塑料微量离心管中，加入100微升50%乙醇。使用微型研杵将样品匀浆。然后用移液器吸取10微升匀浆液，加入质谱仪 cartridge 的样品孔中。

将样品管放入直探针电离质谱仪的电离室中，并安装将用于样品电离的不锈钢针探针。牢固关闭电离室盖，以自动激活安全装置。单击启动图标启动板载计算机，通过屏幕上的控制面板进行分析，对针探针施加 2.3 千伏电压以产生电喷雾，并确保针探针的频率为 3 赫兹。

等待30秒，待测量完成后。每次测量完一个样品后，将 cartridge 和针头丢弃至生物危害物处理装置中。为分析质谱，打开与质谱仪配套的软件。

在软件的数据文件浏览器窗口中，单击 L-C-D 文件。在质谱窗口中选择并单击一个峰，以自动生成提取离子色谱图（E-I-C）。检查总离子流图（T-I-C）和提取离子色谱图（E-I-C），然后单击平均质谱图图标，以选择生成质谱图的时间窗口范围。

导出质谱文本数据。为分析体液，吸取最多10微升血清样本，并将其加入一个1.5毫升的微量离心管中。向管中加入190微升50%乙醇，然后在室温下涡旋振荡两分钟。

为了完全去除所有红细胞，将液体在4°C条件下以15,000 ×g离心1至5分钟。取10 µL上清液加入到卡盒的孔中，并按照之前的方法在质谱仪上进行检测。本方案展示了针对固体样品、液体样品以及活体动物的PESI-MS样品制备方法。

人肾细胞癌显示出中性脂质的特征性峰。在人肾细胞癌组织的质谱中，在质荷比为900处存在相对较强的峰，而在周围非癌组织中未发现这些峰。这些峰主要代表三酰基甘油。

在正常肝组织中获得的数据示例，展示了慢性肝炎和肝硬化患者中的肿瘤病变。使用PESI-MS分析了三名个体的人血清，个体间的质谱模式存在明显差异。对于静脉注射至小鼠尾静脉的5-FdU的代谢变化，已在肝脏原位实现了对5-FdU钠加合物的快速且灵敏的检测。

由于针尖相对于组织位置的深度在电离过程中起着至关重要的作用，并直接影响数据采集的成功与否，因此务必遵循相关操作说明。您可通过查阅商业数据库来鉴定分子种类。这是阐明疾病分子机制的一种方法。

许多研究人员对应用该技术预测疾病的发展及其预后产生了兴趣，尤其是使用Ricket活检时。请注意不要被探针扎伤。

使用一种专门用于从机器上取下针头的仪器即可轻松避免这种情况。