球状外生长作为前维沃分析分析涉及的路径的表皮上皮细胞激活

表皮上皮细胞的激活是肾脏球状疤痕组织发育的关键因素。使用这种方法，我们可以研究这种激活所涉及的细胞过程，并希望找到治疗方案来减缓甚至阻止疾病进展。我们技术的主要优点是，我们使用直接从孤立的球状细胞生长的原细胞。

释放肾脏后，如文本手稿中概述的，用手术钳握住肾脏，并使用另一对钳子拉出肾胶囊。在此之后，将肾脏放入六孔培养板的井中，每个孔包含两毫升的 HBSS，并放在冰上培养板上。首先，将肾脏转移到100毫米的培养皿中，用两个手术刀把它们切成大约一到两毫米的小碎片。

用HSS保持碎肾片湿润。接下来，将肾片放在 300 微米金属筛的顶部，并使用 20 毫升注射器的柱塞压压肾脏。在两者之间用HSS反复冲洗筛子，并使用血清移液器收集流经并转移到干净的培养皿中。

使用手术刀刮掉筛子底部的一切，并转移到收集的肾脏同质性。用 HBSS 通过 75 和 53 微米筛冲洗肾脏均质。然后，用HSSS洗洗两个筛子，以去除所有较小的结构。

通过用DMEM补充20%胎儿小腿血清清洗每个筛子的上表面，收集留在筛子中的肾脏结构和材料，将材料转移到六孔超低附着微孔板的孔中。将超低附件微孔板带到倒置的光学显微镜上，并使用 20 微升移液器采集单封装或斩首的 glomeruli。在移液器尖端中捕获单个球状物后，将新的 DMEM 介质添加到同一移液器尖端中，以达到 20 微升。

将用DMEM介质的单球体转移到24井细胞培养板的中心，在37摄氏度下用5%的二氧化碳孵育3小时，使球状体附着在井的中心。孵育后，球状体将附着在井的中心。仔细添加500微升内皮基底介质，辅以生长因子套件和额外的5%FBS和1%青霉素和链霉素到每个井。

培养在37摄氏度的单球与5%的二氧化碳6天。经过六天的孵化，使用数字倒置光显微镜拍摄图像并分析球状生长。使用图像分析软件，通过打开一个带比例线的图像文件来确定光洁的表面积。

在比例栏上绘制一条直线，然后单击"分析"，然后测量以确定以像素为单位的距离。要确定比例，请单击"分析并设置比例"，然后输入已知距离（以像素为单位）、已知距离和长度单位。完成后单击"确定"。

单击"分析和设置测量"。然后，检查"区域"和"显示标签"选项。完成后单击"确定"。

接下来，在球状生长周围绘制一个徒手选择。单击"分析"和"度量"以显示结果表，该表包含先前确定比例中增长的表面积。在这项研究中，从小鼠肾脏分离、培养和分析包状球状上皮细胞的遗传性上皮细胞生长。

代表性光显微镜图像显示，球状与小鼠肾脏分离后，在培养过程中不同时间点的球状生长。为了验证外生长细胞是表皮上皮细胞，被斩首的球状糖也被分离并培养六天。在这个潜伏期，被斩首的球蛋白没有细胞生长。

然后，针对不同的表皮上皮细胞标记、照片位点特定标记以及内皮细胞标记进行免疫荧光染色。结果证实，外生长的细胞，事实上，是表皮上皮细胞。与从野生型小鼠分离出的球状小鼠相比，CD44敲除小鼠的球状小鼠显示，生长的细胞数量减少，球状生长表面积也减少。

这表明CD44在表皮上皮细胞活化中具有重要作用。使用这种技术，它也可以研究对药物对单皮上皮细胞活化的影响。这可以通过用您选择的药物治疗孤立的球菌，并分析细胞生长和细胞迁移的差异。