Name: 激光捕获胶质瘤分区域的微切，用于肿瘤内异质性、肿瘤流和入侵的空间和分子表征 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-04-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: 学习激光捕获显微切割技术，用于胶质瘤分区域分析，揭示肿瘤内异质性及侵袭的分子机制。该方法结合RNA测序，可精准分离肿瘤细胞群，为神经肿瘤学研究提供高保真样本。

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本研究工作得到了美国国立卫生研究院（NIH/NINDS）资助：R37-NS094804、R01-NS105556、R21-NS107894（授予M.G.C.）；（NIH/NINDS）R01-NS076991、R01-NS096756、R01-NS082311（授予P.R.L.）；（NIH/NIBI）R01-EB022563；（NIH/NCI）U01CA224160；密歇根大学神经外科系、Rogel癌症中心、ChadTough基金会和Leah's Happy Hearts基金会（资助M.G.C.和P.R.L.）；RNA生物医学资助F046166（授予M.G.C.）；美国国立卫生研究院UL1 TR002240（密歇根临床与健康研究研究所，MICHR），博士后转化学者项目（PTSP）资助，项目F049768（授予A.C.）；密歇根大学Forbes癌症研究所，防盲研究公司（Research to Prevent Blindness, Inc.，RPB）授予的医师科学家奖，美国国立卫生研究院NEI资助R01 EY022633（授予A.K.），以及RPB向眼科与视觉科学系提供的无限制资助。本研究使用了视力研究核心设施（P30 EY007003）和癌症中心研究核心设施（P30 CA046592）。A.K.获得了A. Alfred Taubman医学研究所颁发的William Davidson新兴学者奖支持。

<ol><li>Reifenberger, G., Wirsching, H. G., Knobbe-Thomsen, C. B., Weller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+molecular+genetics+of+gliomas+-+implications+for+classification+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Advances in the molecular genetics of gliomas - implications for classification and therapy.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 14 (7), 434-452 (2017).</li>
<li>Espina, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-capture+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Laser-capture microdissection.</a> Nature Protocols. 1 (2), 586-603 (2006).</li>
<li>Rabien, A., Kristiansen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+Microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Tissue Microdissection.</a> Methods in Molecular Biology. 1381, 39-52 (2016).</li>
<li>Lovatt, D., Bell, T., Eberwine, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-neuron+isolation+for+RNA+analysis+using+pipette+capture+and+laser+capture+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Single-neuron isolation for RNA analysis using pipette capture and laser capture microdissection.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2015 (1), (2015).</li>
<li>Erickson, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+RT-PCR+gene+expression+analysis+of+laser+microdissected+tissue+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Quantitative RT-PCR gene expression analysis of laser microdissected tissue samples.</a> Nature Protocols. 4 (6), 902-922 (2009).</li>
<li>Cheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-assisted+microdissection+in+translational+research%3A+theory%2C+technical+considerations%2C+and+future+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Immunohistochemistry+%26+Molecular+Morphology%22%5BJournal%5D)">Laser-assisted microdissection in translational research: theory, technical considerations, and future applications.</a> Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 21 (1), 31-47 (2013).</li>
<li>Butler, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+high-quality+RNA+from+laser+capture+microdissected+human+and+rodent+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histotechnology%22%5BJournal%5D)">Recovery of high-quality RNA from laser capture microdissected human and rodent pancreas.</a> Journal of Histotechnology. 39 (2), 59-65 (2016).</li>
<li>Clement-Ziza, M., Munnich, A., Lyonnet, S., Jaubert, F., Besmond, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilization+of+RNA+during+laser+capture+microdissection+by+performing+experiments+under+argon+atmosphere+or+using+ethanol+as+a+solvent+in+staining+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Stabilization of RNA during laser capture microdissection by performing experiments under argon atmosphere or using ethanol as a solvent in staining solutions.</a> RNA. 14 (12), 2698-2704 (2008).</li>
<li>van Dijk, M. C., Rombout, P. D., Dijkman, H. B., Ruiter, D. J., Bernsen, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+resolution+by+mounting+of+tissue+sections+for+laser+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Improved resolution by mounting of tissue sections for laser microdissection.</a> Molecular Pathology. 56 (4), 240-243 (2003).</li>
<li>Núñez, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IDH1-R132H+acts+as+a+tumor+suppressor+in+glioma+via+epigenetic+up-regulation+of+the+DNA+damage+response%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">IDH1-R132H acts as a tumor suppressor in glioma via epigenetic up-regulation of the DNA damage response.</a> Science Translational Medicine. 11 (479), (2019).</li>
<li>Calinescu, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transposon+mediated+integration+of+plasmid+DNA+into+the+subventricular+zone+of+neonatal+mice+to+generate+novel+models+of+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Transposon mediated integration of plasmid DNA into the subventricular zone of neonatal mice to generate novel models of glioblastoma.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), (2015).</li>
<li>Koschmann, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATRX+loss+promotes+tumor+growth+and+impairs+nonhomologous+end+joining+DNA+repair+in+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">ATRX loss promotes tumor growth and impairs nonhomologous end joining DNA repair in glioma.</a> Science Translational Medicine. 8 (328), (2016).</li>
<li>Brat, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive%2C+Integrative+Genomic+Analysis+of+Diffuse+Lower-Grade+Gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comprehensive, Integrative Genomic Analysis of Diffuse Lower-Grade Gliomas.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (26), 2481-2498 (2015).</li>
<li>Datta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection%3A+Big+data+from+small+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Histology+and+Histopathology%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection: Big data from small samples.</a> Histology and Histopathology. 30 (11), 1255-1269 (2015).</li>
<li>Lein, E., Borm, L. E., Linnarsson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+promise+of+spatial+transcriptomics+for+neuroscience+in+the+era+of+molecular+cell+typing%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The promise of spatial transcriptomics for neuroscience in the era of molecular cell typing.</a> Science. 358 (6359), 64-69 (2017).</li>
<li>Gagner, J. P., Zagzag, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+Glioblastoma+Tissue+Heterogeneity+with+Laser+Capture+Microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Probing Glioblastoma Tissue Heterogeneity with Laser Capture Microdissection.</a> Methods in Molecular Biology. 1741, 209-220 (2018).</li>
</ol>

本文所有作者均声明不存在潜在的利益冲突。

阐明胶质瘤异质性和侵袭背后的分子机制对于发现新的治疗靶点至关重要13。在本论文中，我们描述了一种详细且经过优化的方法，用于通过激光显微切割（LMD）结合转录组分析，研究胶质瘤异质性和侵袭的分子特征。
激光捕获显微切割（LMD）可用于识别肿瘤内不同区域或单个细胞，从而获得特定样本，以进一步分析维持肿瘤空间背景的分子模式14。与其他用于分析实体瘤空间转录组的方法相比，该技术具有可靠性高、成本低的优点15。我们利用LMD分析了基因工程小鼠肿瘤模型或颅内可植入模型中的胶质瘤异质性及侵袭性。这些模型能够重现人类胶质瘤的关键特征，从而可用于研究胶质瘤的异质性与侵袭过程10,12。
保持高质量的肿瘤组织形态和RNA完整性是激光显微切割（LMD）技术的限制因素之一。为了改善组织形态，我...

胶质瘤是中枢神经系统最具侵袭性的原发性肿瘤，具有高度侵袭性和异质性1。对肿瘤细胞和分子组分的分析将揭示新的治疗靶点。
在目前可用的多种方法中，冷冻脑肿瘤组织的激光显微切割（LMD）是一种经济可靠的技术，可实现从肿瘤组织中分离特定解剖区域或特定细胞群体，以研究其分子特征2,3。LMD 可用于分析选定的单个细胞或多细胞结构的 mRNA 基因表达谱4,5。通过 LMD 可深入探究肿瘤进展过程中发生的分子事件的机制。为获得最佳的组织形态学光学分辨率和 RNA 质量，需优化肿瘤组织的处理方法6。尽管多聚甲醛固定最适用于形态学分析，但在此条件下 RNA 质量会受到影响并发生降解，导致 RNA-seq 分析的 RNA 质量较差。使用冷冻组织切片可避免冰晶形成，而冰晶可能破坏细胞膜并在细胞内形成孔洞，因此仍是进行 RNA-Seq 分析的最佳选择7。
本文介绍了一种优化的切片固定与染色方法，用于处理小鼠脑肿瘤冷冻组织以进行激光显微切割（LMD）。为防止组织中形成冰晶，我们使用30%蔗糖溶液对小鼠进行灌注。该溶液可破坏极性水分子之间的相互作用，从而抑制冰晶的形成，保持组织形态完整性。组织染色对于区分并获取肿瘤内特定细胞群体或解剖结构上不同的区域至关重要。为维持RNA完整性，必须使用无害染料对组织进行固定和染色。已有研究表明，使用苏木精/伊红（H&amp;#38;E）染色会破坏RNA完整性8。我们采用乙醇、4%焦宁紫（Cresyl violet）和0.5%伊红Y（eosin Y）溶液对目标组织进行固定和染色。焦宁紫是一种嗜酸性染料，可将细胞核染成深蓝色；伊红Y为嗜碱性染料，可染色细胞的碱性组分，从而区分细胞质与其他细胞结构8。这两种染料均可溶于乙醇，且不会降低RNA质量。为避免组织损伤并保持细胞结构的高光学分辨率，我们在进行LMD前对组织切片进行了封片处理9。

<table><tbody><tr><td>Accutase 细胞解离溶液</td><td>Biolegend</td><td>423201</td><td></td></tr><tr><td>无动物源性重组人 EGF</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>抗生素-抗真菌剂（100X）</td><td>Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>B-27 添加剂（50X），无血清</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Buffer RLT</td><td>Qiagen</td><td>79216</td><td></td></tr><tr><td>Corning PCR 管</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS6530</td><td></td></tr><tr><td>乙酸焦油紫</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C5042</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 - 改良 Eagle 培养基：F-12 营养混合物</td><td>Gibco</td><td>11330057</td><td></td></tr><tr><td>伊红 Y</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E4009</td><td></td></tr><tr><td>HiSeq 4000</td><td>Illumina</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>激光显微切割（LMD）系统</td><td>Leica</td><td>LMD7000</td><td></td></tr><tr><td>N-2 添加剂（100X）</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>Normocin - 抗微生物试剂</td><td>Invivogen</td><td>ant-nr-1</td><td></td></tr><tr><td>一次性可剥离包埋模具</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>70182</td><td></td></tr><tr><td>PEN 膜玻璃载片（2 &amp;micro;m）</td><td>Lieca</td><td>1150518</td><td></td></tr><tr><td>Pinpoint 溶液</td><td>Zymo Research</td><td>D3001-1</td><td></td></tr><tr><td>重组人碱性 FGF</td><td>Peprotech</td><td>100-18B-1MG</td><td></td></tr><tr><td>研究用冷冻切片机</td><td>Leica</td><td>CM3050s</td><td></td></tr><tr><td>RNA酶清除剂 RNaseZap</td><td>Fisher Scientific</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy Plus Micro 试剂盒</td><td>Qiagen</td><td>74034</td><td></td></tr><tr><td>SMARTer 链特异性总 RNA 测序试剂盒 v2 - 微量输入哺乳动物</td><td>Takara Bio</td><td>634411</td><td></td></tr><tr><td>组织包埋剂 Tissue-Plus O.C.T. 化合物</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td></td></tr></tbody></table>

激光捕获显微切割胶质瘤亚区域用于肿瘤内异质性、肿瘤微流及侵袭的空间与分子特征分析

Laser Capture Microdissection of Glioma Subregions for Spatial and Molecular Characterization of Intratumoral Heterogeneity, Oncostreams, and Invasion

胶质瘤是一种具有侵袭性和异质性的原发性脑肿瘤。假栅栏样结构、微血管增生、间充质转化和坏死等特定的组织学模式构成了高级别胶质瘤组织学异质性的特征。本实验室已证实，富含间充质样细胞的高密度区域（称为肿瘤间质流，oncostreams）的存在与肿瘤恶性程度相关。我们开发了一种独特的方法，用于解析胶质瘤生长和侵袭的潜在机制。本文中，我们描述了一种综合性实验方案，该方案结合激光显微切割（LMD）与RNA测序技术，用于分析肿瘤内异质性多细胞结构（即间充质区域或肿瘤侵袭区域）中mRNA的差异表达。该方法能够良好地保持组织形态学结构和RNA完整性。我们对灌注、冷冻、包埋、切片和染色等步骤进行了优化，以维持组织形态并获得高质量的激光显微切割样本。结果表明，使用30%蔗糖对荷胶质瘤小鼠进行灌注，可获得良好的组织形态和RNA质量。此外，采用4%焦宁紫（Cresyl violet）和0.5%伊红（eosin）对肿瘤切片染色，可在保持RNA完整性的前提下实现良好的细胞核和细胞质染色效果。所描述的方法具有高灵敏度和高度可重复性，可用于研究多种肿瘤模型中的肿瘤形态学特征。综上所述，我们介绍了一套完整的LMD操作流程，该流程可在保持组织形态和RNA质量的基础上，用于后续测序分析，以研究实体瘤内部异质性多细胞结构的分子特征。

本实验室利用睡眠美人转座酶系统（图1A）构建了基因工程小鼠模型（GEMMs）。该系统将特定的遗传修饰整合至新生小鼠神经前体细胞的基因组中。这些经过修饰的前体细胞可自发形成内源性胶质瘤。用于诱导肿瘤形成的质粒序列包括：（1）pT2C-LucPGK-SB100X，用于表达睡眠美人转座子及荧光素酶；（2）pT2-NRASSV12，用于表达NRAS；（3）pT2-shp53-GFP4，用于敲低p53并表达GFP蛋白；（4）pT2-shATRx-GFP4，用于敲低ATRX。质粒注射至出生后1天的小鼠侧脑室，操作步骤如前所述11。通过活体生物发光成像系统监测质粒摄取及肿瘤形成情况。当荷瘤小鼠出现肿瘤负荷体征时，实施安乐死。所获肿瘤组织用于建立神经球培养体系，或直接冷冻保存以用于显微切割（LMD）处理（图1A）。
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-p...

激光显微切割（LMD）是一种灵敏且高度可重复的技术，可用于揭示介导胶质瘤异质性和侵袭性的分子通路。本文中，我们描述了一种优化的实验方案，通过激光显微切割从胶质瘤组织中分离特定区域，并随后进行转录组学分析。

胶质瘤是一类以侵袭性和异质性为特征的原发性脑肿瘤。特定的组织学模式，如假栅栏状排列，……

本方案采用激光显微切割结合RNA测序技术，分析肿瘤内异质性区域（如间充质细胞富集区域或肿瘤侵袭区域）的差异性mRNA表达。该方法经过优化，可有效保持组织形态学质量和RNA完整性，有助于获取高质量的激光显微切割样本。该技术具有高灵敏度和高度可重复性。该技术可用于研究多种肿瘤模型中的肿瘤形态学及异质性。对冷冻脑肿瘤组织进行激光显微切割是一种经济、可靠的分离肿瘤组织中特定解剖区域细胞群的方法，可用于分析其分子特征。激光显微切割可用于深入探究肿瘤进展过程中发生的分子事件的机制，并可能揭示新的治疗靶点。小鼠体内肿瘤负荷的活体生物发光信号达到每秒1×10⁶至1×10⁷个光子。将经安乐死的荷瘤小鼠的循环系统用含氧台氏液冲洗，直至肝脏和肺部血液完全清除。随后继续用含30%蔗糖的台氏液灌注动物15分钟。为评估灌注效果，需确认在循环结束时颈部、尾部和腿部均已变得僵硬。随后按照标准方案取出脑组织，并将脑组织在新鲜的30%蔗糖溶液中保存过夜。为进行冷冻保存，取一个容器装入低温的异戊烷（2-甲基丁烷），并将该容器置于盛有液氮的更大容器中。在溶剂冷却的同时，将脑组织放在滤纸上吸干，然后将脑组织放入已标记的冷冻模具中。小心地将约五毫升的低温恒冷箱切片包埋剂（optimal temperature cutting medium）加至冷冻模具中央，并将脑组织按所需方向放入模具中。使用洁净的镊子，迅速将冷冻模具放入预冷的异戊烷（2-甲基丁烷）中，浸泡 30 至 40 秒。待切割介质凝固后，将 Cryomold 转移至干冰上，并用铝箔包裹 Cryomold 及速冻脑组织，于 -80 摄氏度保存。为获取冷冻脑肿瘤组织切片，首先将冷冻切片机的温度设定在 -20 至 -24 摄氏度之间，并将样品块放入冷冻切片机腔室中平衡 30 至 60 分钟。在样品平衡期间，使用 100% 乙醇清洁腔室和刀片架，并用 RNase 去除溶液喷洒切片刷。当样本准备就绪后，取出模具，并使用新鲜的切片介质将冷冻组织块固定在冷冻切片机的样品盘上。将组织块放入样品盘固定槽中，并与刀片对齐。使用无RNase的毛刷之一，小心地将脑组织展平并卷直在切削面上，切取厚度为10 µm的切片。为将脑组织切片贴附到载玻片上，将标记好的无RNase PEN玻璃载玻片的带正电一侧平稳地压在组织切片上，并将载玻片放入腔室内的储存盒中。当所有载玻片收集完毕后，将储存盒置于-80摄氏度环境中。在进行激光显微切割前，为溶解切片包埋介质，需将载玻片依次浸入梯度下降的乙醇溶液中各30秒，随后用结晶紫溶液染色20秒，再浸入0.5%伊红Y溶液中5秒。在伊红Y孵育结束时，使用滤纸将载玻片吸干，并依次通过浓度递增的乙醇溶液进行脱水。在60秒的乙醇浸洗后，将载玻片放入二甲苯容器中冲洗3分钟。随后，将载玻片置于无RNase的表面上，室温干燥10秒，然后使用以无RNase水配制的封片剂进行封片。10 到 20 秒后，将载玻片转移至显微镜显微切割平台。进行激光捕获显微切割时，应先开启电源，再开启激光。接着，打开计算机中的显微镜控制器，并启动激光捕获显微切割软件。在显微镜控制面板中，选择 10 倍放大倍数。在激光控制下，设置组织切割的激光参数，选择激光频率为 120 赫兹，激光电流为 100%。为实现精确的激光显微切割，将速度设为 10，孔径设为 10 微米，然后将功率设为 53。加载组织收集器，用于在切片后捕获组织，然后点击第二个“卸载”按钮。将空收集器替换为无DNase和Rnase的0.5毫升PCR平头管，每管中含30微升裂解缓冲液。将收集器放回仪器中，然后点击“继续”以进行下一步操作。将处理好的样本装入显微镜，然后在激光显微切割软件中点击“Unload”。将样本向上推至载物片支架上，并将支架放置于载物台上。点击“Continue”继续操作，在“Cut Shapes”窗口中选择“Draw Cut”。使用显微镜控制装置找到目标区域，并在感兴趣区域周围绘制轮廓。然后选择目标收集管，点击“开始切割”以进行组织显微切割。当所有感兴趣区域均完成切割后，将收集管从支架转移至干冰中，直至进行后续处理。为了获得形态学和RNA完整性更佳的组织，评估了多种灌注方法。为了分离感兴趣区域，需要用对RNA无害的染料对组织进行染色。对荷瘤小鼠依次灌注Tyrode溶液和30%蔗糖，随后在30%蔗糖中过夜孵育，可有效保持小鼠组织的形态结构和RNA完整性。尽管多聚甲醛组织固定可获得高质量的组织形态，但会负面影响RNA的完整性。其他方法如使用台氏液孵育，或台氏液加30%蔗糖溶液孵育，虽不影响RNA质量，但组织形态的分辨率有所降低。若组织未使用封片介质封片，切片会脱水，导致形态恶化；而将组织样本用溶于水的15%封片介质封片，则可维持高质量的组织形态。激光捕获显微切割显微成像可实现对肿瘤组织的切割选择。该感兴趣区域的选择继而允许对每个组织样本内的特定区域进行分离，以进行RNA完整性分析。保持高质量的肿瘤组织形态和RNA完整性至关重要。使用Tyrode溶液和30%蔗糖灌注并用30%蔗糖在4℃过夜保存，可显著改善激光显微切割（LMD）所需的组织形态。快速的平滑肌瘤固定、染色及使用GAN溶液封片是保持RNA质量并防止组织产生裂纹的关键步骤。我们建议每块组织区域切取至少2.5倍于10的6次方平方微米的总肿瘤面积，以获得足量的RNA用于RNA质量控制和转录组分析。LMD 能够分析调控胶质瘤异质性和侵袭性的分子信号通路，这可能揭示在临床前胶质瘤模型中未来转化研究的潜在新靶点。

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激光捕获胶质瘤分区域的微切，用于肿瘤内异质性、肿瘤流和入侵的空间和分子表征

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激光显微切割：一种从三维类器官培养模型中分离侵袭性结直肠癌细胞的技术

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活体成像斑马鱼脑内侵袭性胶质母细胞瘤细胞中微管的动态变化

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可重复的缺氧条件下磁性纳米颗粒介导类球体定位的三维胶质母细胞瘤迁移实验

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