Name: 氢-铀交换质谱仪（HDX-MS）平台，用于研究肽生物合成酶 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 32 s
Description: 学习使用氢-氘交换质谱技术（HDX-MS）研究肽生物合成酶的构象动态。该方法可在近天然条件下分析蛋白质动力学，无需标记，为理解酶功能机制提供重要见解。

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本工作得到了加拿大自然科学与工程研究理事会、魁北克省自然与技术研究基金会、加拿大创新基金会以及麦吉尔大学启动资金的支持。

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<li>Lau, A. M. C., Ahdash, Z., Martens, C., Politis, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deuteros%3A+software+for+rapid+analysis+and+visualization+of+data+from+differential+hydrogen+deuterium+exchange-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Deuteros: software for rapid analysis and visualization of data from differential hydrogen deuterium exchange-mass spectrometry.</a> Bioinformatics. 35 (7), 3171-3173 (2019).</li>
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<li>Rob, T., Gill, P. K., Golemi-Kotra, D., Wilson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+electrospray+ms-coupled+microfluidic+device+for+sub-second+hydrogen%2Fdeuterium+exchange+pulse-labelling+reveals+allosteric+effects+in+enzyme+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">An electrospray ms-coupled microfluidic device for sub-second hydrogen/deuterium exchange pulse-labelling reveals allosteric effects in enzyme inhibition.</a> Lab on a Chip. 13, 2528-2532 (2013).</li>
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我们没有需要披露的内容。

本方案中介绍的氢氘交换质谱（HDX-MS）工作流程为绘制蛋白质中结构动态元件的空间分布，以及研究这些动态在外界扰动（如配体结合、酶突变等）下的变化提供了极为稳健的平台。相较于其他常用于研究构象动态的结构生物学方法，HDX-MS具有若干显著优势。最突出的是，所需蛋白样品量极少。采用本文所述的工作流程，1 mL浓度为1 µM的蛋白样品即可满足三次重复实验，每次实验包含5个氢氘交换时间点。此外，该方法对目标蛋白的分子量几乎没有限制，蛋白复合物同样适用于HDX-MS分析。其实际限制仅在于胃蛋白酶消化产生的肽段在色谱分离中的分辨能力，以及在质荷比（m/z）和离子迁移率维度上的分辨能力。因此，对于许多蛋白质或蛋白复合物，HDX-MS可提供有关蛋白-蛋白相互作用界面、配体结合位点、构象动态及别构网络的宝贵信息。最后，氢氘交换反应在温和、接近天然的条件下进行，无需对蛋白进行位点特异性标记或工程化改造，有助于保持蛋白的天然活性。该方法的主要局限性（就其对目标蛋白提供的机制性信息而言）在于，肽段水平的HDX数据本身空间分辨率较低。因此，此类数据足以推断二级结构是否发生变化，但要全面解读结构扰动的机制性影响，仍需借助更高分辨率的结构技术（如核磁共振、冷冻电镜...

蛋白质是具有结构动态性的分子，可在从飞秒级化学键振动到整个蛋白质结构域重排（可能持续数秒）的时间尺度上采样不同的构象1。这些构象波动通常是酶/蛋白质功能的关键组成部分。例如，配体结合诱导的构象变化对于调节酶功能往往至关重要，其作用机制包括：有序排列催化反应所需的活性位点残基、在连续动力学机制中定义底物结合位点、屏蔽反应中间体免受环境影响，或通过别构网络调节酶的功能。最近的研究还表明，构象动力学在进化过程中可能具有保守性，且保守的分子运动受到扰动时，可能与底物特异性的改变以及新酶功能的出现相关2,3。
近年来，氢氘交换质谱法（HDX-MS）迅速发展成为一种强大的技术，可用于研究蛋白质构象变化如何响应配体结合或诱变等扰动4,5,6,7。在典型的HDX-MS实验中（图1），将目标蛋白质置于用D2O配制的缓冲液中，从而触发溶剂可交换的质子被氘取代。肽键中酰胺基团的交换速率强烈依赖于pH值、局部氨基酸序列以及酰胺所处的局部结构环境8。参与氢键相互作用的酰胺（如存在于α-螺旋和β-折叠中的酰胺）比暴露于溶剂中的无规卷曲区域的酰胺交换更慢。因此，氘摄取程度反映了酶的结构特征。对于具有构象动态性或在配体结合时发生结构转变的酶，预期会产生可测量的HDX响应。
结构化酰胺缓慢交换速率的机理基础如图25,8,9所示。为了发生氢氘交换（HDX），结构化区域必须首先瞬时采样一种去折叠构象，从而使催化HDX通过特定酸/碱化学机制的溶剂分子能够接触到可交换的酰胺质子。最终，实验中测得的HDX速率由化学交换速率（kchem）与折叠及去折叠速率（kopen 和 kclose）的相对大小决定5,8。根据这一简单的动力学模型，氘代摄取程度将反映底层的构象动力学特性（由 kopen 和 kclose 定义）。大多数HDX-MS实验采用“自下而上”（bottom-up）的工作流程：在完成交换反应后，目标蛋白质被消化为肽段，并通过质量增加来测量每个肽段的氘代摄取量7。通过这种方式，HDX-MS能够在肽段的局部空间尺度上定位酶构象动力学的扰动，使研究人员能够评估该扰动如何改变目标酶不同区域的动力学行为。
HDX-MS 方法在阐明蛋白质结构动力学方面的优势众多。首先，该方法仅需少量天然蛋白质即可开展实验，也可用于具有四级结构的蛋白质复合物体系10。只要自下而上的 HDX-MS 工作流程能够提供足够数量且可靠鉴定的肽段，覆盖目标蛋白质序列，那么用于检测的酶制剂甚至无需高度纯化11,12。此外，HDX-MS 可在接近天然条件下提供有关构象动力学的信息，且无需像单分子荧光研究那样进行位点特异性蛋白质标记13；同时，该方法对所研究蛋白质或蛋白质复合物的大小没有限制（而核磁共振[NMR]波谱学等方法则面临挑战）7,14。最后，时间分辨的 HDX-MS 方法可用于研究内在无序蛋白质，这类蛋白质难以通过X射线晶体学进行分析15,16,17,18。HDX-MS 的主要局限性在于其数据的空间分辨率较低。HDX-MS 数据有助于指出构象动力学发生变化的区域，并揭示耦合的构象变化，但通常难以深入阐明驱动这些变化的精确分子机制。近年来，电子捕获解离技术与蛋白质 HDX-MS 数据相结合的研究已展现出将氢氘交换位点定位至单个氨基酸残基的潜力19，但通常仍需后续的生物化学和结构研究来进一步明确 HDX-MS 数据所提出的结构模型。
以下详细介绍了一种氢氘交换质谱（HDX-MS）分析方法的建立流程20。下文所述的样品制备方案通常适用于在水相缓冲液中具有良好溶解性的任何蛋白质。对于需要在去垢剂或磷脂存在条件下进行分析的蛋白质，已有更专业的样品制备方法和HDX-MS工作流程可供参考21,22,23,24。HDX-MS数据采集的仪器参数是针对配备液相色谱系统的高分辨四极杆飞行时间质谱仪（quadrupole time-of-flight mass spectrometer）进行描述的。类似复杂程度和分辨率的数据也可在多种市售的液相色谱-质谱联用（LC-MS）系统上获得。本文还提供了使用商业化软件包进行数据处理的关键步骤。我们同时给出了与HDX-MS研究领域广泛认可的建议相一致的数据采集与分析指南12。所描述的实验方案用于研究HalM2的动态结构特性，HalM2是一种兰肽合成酶，可催化抗菌肽天然产物的多步成熟过程20。我们展示了HDX-MS如何揭示此前未被表征的底物结合位点及别构特性。近年来已有若干关于蛋白质HDX-MS的其他实验方案发表25,26。结合本研究内容，这些前期工作应为读者在实验设计方面提供一定的灵活性。

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;试剂&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>[glu-1]-fibrinopeptide B (Glu-Fib)</td><td>BioBasic</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>0.5 mL Amicon Ultracel 10k 离心过滤装置 (Millipore)</td><td>Milipore Sigma</td><td>UFC501096</td><td></td></tr><tr><td>乙腈</td><td>Fisher</td><td>A955-1</td><td></td></tr><tr><td>AMP-PNP</td><td>SIGMA</td><td>A2647-25MG</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>SIGMA</td><td>a2383-5G</td><td></td></tr><tr><td>D2O</td><td>ALDRICH</td><td>435767-100G</td><td></td></tr><tr><td>甲酸</td><td>Thermo Fisher</td><td>28905</td><td></td></tr><tr><td>盐酸胍</td><td>VWR</td><td>97063-764</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher</td><td>BP310-1</td><td></td></tr><tr><td>氯化镁</td><td>SiGMA-Aldrich</td><td>63068-250G</td><td></td></tr><tr><td>氯化钾</td><td>BioBasic</td><td>PB0440</td><td></td></tr><tr><td>磷酸钾</td><td>BioBasic</td><td>PB0445</td><td></td></tr><tr><td>TCEP 盐酸盐</td><td>TRC Canada</td><td>T012500</td><td>肽由请求合成</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;材料/设备名称&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;公司&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;目录编号&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;备注/说明&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;软件&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Deuteros</td><td>Andy M C Lau, et al</td><td>version 1.08</td><td></td></tr><tr><td>DynamX</td><td>Waters</td><td>version 3.0</td><td></td></tr><tr><td>MassLynx</td><td>Waters</td><td>version 4.1</td><td></td></tr><tr><td>Protein Lynx&lt;br/&gt; Global Server (PLGS)</td><td>Waters</td><td>version 3.0.3</td><td></td></tr><tr><td>PyMOL</td><td>Schr&amp;ouml;dinger</td><td>version 2.2.2</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;材料/设备名称&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;公司&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;目录编号&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;备注/说明&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;仪器与设备&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ACQUITY UPLC BEH C18 分析柱</td><td>Waters</td><td>186002346</td><td></td></tr><tr><td>ACQUITY UPLC BEH C8 VanGuard 保护柱</td><td>Waters</td><td>186003978</td><td></td></tr><tr><td>ACQUITY UPLC M-Class HDX 系统</td><td>Waters</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HDX Manager</td><td>Waters</td><td></td><td></td></tr><tr><td>微型pH电极</td><td>Thermo Fisher</td><td>13-620-291</td><td></td></tr><tr><td>Waters Enzymate BEH 柱或胃蛋白酶柱</td><td>Waters</td><td>186007233</td><td></td></tr><tr><td>Waters Synapt G2-Si</td><td>Waters</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

一种用于研究肽类生物合成酶的氢-氘交换质谱（hdx-ms）平台

A Hydrogen-Deuterium Exchange Mass Spectrometry (HDX-MS) Platform for Investigating Peptide Biosynthetic Enzymes

氢-氘交换质谱法（HDX-MS）是一种用于酶构象变化及酶-底物相互作用生物物理表征的强有力方法。HDX-MS 具有诸多优势，仅需消耗少量样品，可在接近天然条件的环境中进行，无需对酶或底物进行标记，并且能够提供空间分辨的酶构象动力学信息——即使对于大型酶分子和多蛋白复合物也同样适用。该方法通过将目标酶稀释至以 D2O 配制的缓冲液中启动，从而触发肽键酰胺基团中的氢（N-H）与氘（N-D）发生交换。在设定的交换时间点，取出反应等分试样并进行淬灭，随后将酶蛋白酶解为肽段，肽段通过超高效液相色谱（UPLC）分离，并由质谱（MS）记录各肽段因氢-氘交换引起的质量变化。每个肽段的氘摄取量高度依赖于其局部的氢键环境：位于酶分子高度动态区域的肽段氘交换速率非常快，而来自结构有序区域的肽段则交换缓慢。因此，HDX 速率可反映酶局部的构象动力学特征。在不同配体存在下，氘摄取水平的变化可用于绘制配体结合位点、鉴定别构网络，并阐明构象动力学在酶功能中的作用。本文中，我们展示了如何利用 HDX-MS 更深入地理解一类称为羊毛硫肽（lanthipeptides）的肽类天然产物的生物合成过程。羊毛硫肽是由基因编码的肽，经由大型、多功能且构象动态的酶在翻译后修饰生成，这类酶难以通过传统的结构生物学方法进行研究。HDX-MS 为探究此类酶的机制特性提供了一个理想且灵活的平台。

必须评估每组样品进样时蛋白酶解的质量以及实验流程的可重复性。因此，在进行氢氘交换质谱（HDX-MS）分析之前，必须首先建立针对目标蛋白的有效酶解条件、利用反相液相色谱和气相离子淌度分离肽段的条件，以及利用质谱（MS）检测肽段的条件。为此，应首先检测目标蛋白的参考样品（在无氘条件下采集）（第3节）。图3A−C中的色谱数据显示了HalM2类羊毛硫肽合成酶三种参考样品的总离子色谱图（TIC）。TIC是指在质谱扫描所包含的所有m/z值范围内，所有离子计数总和随时间的变化情况。图3D−F展示了TIC在3至8分钟区间内的放大视图。图3G−I所示的质谱图是对每个TIC在一小段时间区间内（5.0至5.1分钟）所有质谱图的累加结果。应特别关注图3中的以下特征。
首...

兰肽合成酶在肽类天然产物的生物合成过程中催化多步反应。本文介绍了一种连续的自下而上的氢氘交换质谱（HDX-MS）工作流程，可用于研究兰肽合成酶以及其他参与肽类天然产物生物合成的类似酶的构象动态。

一种用于研究肽类生物合成酶的氢-氘交换质谱（HDX-MS）平台

氢-氘交换质谱法（HDX-MS）是一种用于酶构象变化生物物理表征的强有力方法，以及……

该方案可提供有关蛋白质构象动态的特异性解析信息，有助于鉴定目标蛋白质中具有功能重要性的区域。该技术可在接近天然条件下探测蛋白质的构象动态。无需使用每反应纳摩尔量的材料进行蛋白质标记。首先，在500微升离心管中，制备目标蛋白质的未氘代参考样品，每个样品设三个重复。向每管中加入适当体积的淬灭缓冲液，将样品淬灭至pH计读数为2.5。将样品在液氮中速冻，随后于零下80摄氏度保存，直至进行分析。然后根据标准操作流程，采用自下而上的液相色谱-质谱联用技术对质子化酶参考样品进行分析。使用适当的蛋白质组学软件程序分析原始质谱数据。导航至“文库”和“蛋白质序列数据库”，以导入目标蛋白质的氨基酸序列。输入目标蛋白质序列的名称，并以 FASTA 格式导入蛋白质序列。在“文库”菜单下定义处理参数时，选择“电喷雾 MSE”作为数据采集类型。在“二价离子锁定质量”字段中，输入葡聚糖一纤维素非肽B二价离子的主电荷比785.8426，然后点击完成。为定义工作流程参数，请在搜索类型中选择电喷雾MSE。在“工作流程与数据库搜索查询”标题下，于数据库字段中选择之前创建的蛋白质数据库，并将主要消化试剂更改为非特异性消化。要清除固定修饰试剂字段，请在单击 Carbamidomethyl C 的同时按住 control 按钮。要指定输出目录，请选择“选项”、“自动化设置”和“Identify E”。然后勾选 apex 3D 和 peptide 3D 输出以及离子计数输出框，并指定所需的目录。要处理引用的样本数据，可右键单击微孔板以创建一个新的板。单击一个孔，然后拖动至另外三个孔，以高亮显示每个参考样本对应的孔。接着，右键单击并选择“添加原始数据”。在弹出的窗口中，浏览至包含三个参考文件的目录，并同时选中这三个文件。单击“下一步”，选择已定义的处理参数。再次单击“下一步”，选择已定义的工作流程参数。然后单击“完成”。当原始数据、处理参数和工作流程参数已分配给板上的每个孔后，这些孔将变为蓝色。选择这些孔，右键单击并选择“处理最新原始数据”。要跟踪数据处理进度，请点击窗口右下角。当没有待运行的任务时，表示处理已完成，微孔板中的孔将变为绿色。右键单击孔位，然后选择查看工作流程结果。每个引用的数据文件将打开一个单独的窗口。检查数据，确保参考样本数据中大部分质谱信号已成功匹配到目标蛋白经计算机模拟消化所预测的肽段。匹配的肽段将在输出谱图中显示为蓝色。双击“确定”筛选条件，并确认覆盖率大于99%。将蛋白质组学软件的输出结果导入氢氘交换数据处理软件，以进行进一步的阈值筛选。然后单击“数据”并导入 PLGS 结果。单击“添加”图标，导航至相应目录以选择已处理的数据文件。单击“下一步”，并将最少连续离子数设置为大于或等于 2。质量误差设置为五百万分之五。文件阈值设置为三，然后点击完成。为进行氢氘交换反应，将淬灭缓冲液分装至500 µL离心管中。短暂离心，将所有淬灭缓冲液转移至各管底部。将含有淬灭溶液的管子置于冰上。接下来，在另一个1.5毫升离心管中预先混合所有氘代反应组分。然后将反应混合物转移至25摄氏度控温水浴中孵育10分钟。向氘代反应组分中加入酶以启动交换反应。通过上下吹打充分混匀反应液。在适当的实验交换时间点，从每个氢氘交换反应中取出 50 微升等分试样。将反应液迅速且均匀地与一份预冷至冰温的淬灭缓冲液在各自的 500 微升离心管中混合。然后立即盖紧管盖，置于液氮中进行瞬时冷冻。将样品保存在零下80摄氏度，直至准备进行分析。解冻冷冻样品后，使用针对非氘代参考样品开发的相同自下而上的液相色谱-质谱工作流程分析氘代酶参考样品。收集完氘代样品的LCMS数据后，将数据导入先前创建的氢氘交换项目中进行数据处理。然后单击“新建状态”和“新建暴露时间”，分别定义与分析相关的生化状态和氘代暴露时间。单击“新建原始数据”以选择待分析的氢氘交换数据文件，并为导入的每个原始数据文件分配相应的交换时间和生化状态。为了分析和可视化数据，选择“肽段列表”中的第一个肽段，并从“视图”菜单中打开堆叠谱图。根据需要单击鼠标以分配或取消分配峰，确保已在数据中找到正确的同位素分布，并且每个同位素峰均已分配。要查看每个电荷态的峰归属，请切换堆叠谱图窗口顶部的电荷态。要在“视图”菜单中检查肽段氘代摄取值的标准偏差，请选择覆盖率图，该图将“肽段列表”中的每条肽段沿目标蛋白的氨基酸序列进行映射。根据相对标准偏差对肽段进行着色，并在图谱中目视查找相对标准偏差较高的异常肽段。在覆盖图中点击异常肽段，以在堆叠质谱图和数据查看窗口中加载目标肽段。在覆盖图中显示感兴趣的差异，右键点击图谱将差异数据导出为 CSV 文件。将差异数据、状态数据以及目标蛋白质的 PDB 文件导入 Deuteros。选择 99% 置信区间，启用总和并处理数据。然后在 pi mol 下选择导出摄取量（Export Uptake）并导出，以生成 PyMOL 脚本，将显著交换差异区域映射到 PyMOL 软件中目标蛋白质的 PDB 结构上。这三份Hal-M2 lambda肽合成酶参考样品的代表性总离子流色谱图显示了在质谱扫描所包含的所有质荷比值下，所有离子计数总和随时间的变化情况。总离子流色谱图的峰形和强度应相似，表明Hal-M2的蛋白酶解消化具有可重复性。在所有三个参考样品中具有相似的效率。在给定时间间隔内的质谱图也应相似，表明每个样品中存在相似的肽段，并且从C18柱中洗脱的时间也相似，从而提供了分析的可信度。在氘代交换样品中，大多数肽段的同位素分布应明显向更高的质荷比方向发生位移。例如，这些数据表明，在酸淬灭、胃蛋白酶消化以及液相色谱-质谱数据采集的整个过程中，大部分氘标记得以保留。在完成对酶的生化特性表征之后，便可生成此类具有代表性的氢氘交换质谱结果。为了说明Hal-A2前体肽与Hal-M2 AMP、PMP复合物的结合，必须以一致的方式进行氢-氘交换反应并淬灭反应。在确定检测到的多种肽段的氘交换值时，必须系统而严谨。氢氘交换质谱可提供肽段水平的信息及蛋白质构象的动态变化。任何氢氘交换的功能相关性均需针对 Meter Genesis 进行验证，并结合正交活性检测方法。

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Research

科研

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Biochemistry

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氢-铀交换质谱仪（HDX-MS）平台，用于研究肽生物合成酶

MALDI-TOF 质谱技术已成功用于监测蛋白激酶 Pak2...

酰胺氢/氘交换与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析Pak2激活

蛋白质构象与动力学对于理解蛋白质结构与功能之间的关系至关重要。氢交换结合高分辨率质谱法是一种多功能方法，可用于研究蛋白质的构象动力学，以及表征蛋白质-配体和蛋白质-蛋白质相互作用，包括结合界面和变构效应。...

利用氢交换质谱法分析蛋白质动力学

本文介绍了针对固态粉末中蛋白质的固态酰胺氢/氘交换质谱法（ssHDX-MS）和固态光解标记质谱法（ssPL-MS）的详细实验方案。这些方法可提供非晶态固态中蛋白质构象及其相互作用的高分辨率信息，可能对制剂设计具有重要意义。...

质谱技术在冻干粉末中研究蛋白质结构与相互作用的应用

构象柔性在蛋白质功能中起着关键作用。本文介绍了将时间分辨电喷雾电离质谱与氢-氘交换相结合，用于研究有序和无序蛋白质中驱动功能的快速结构变化。...

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生物体在其生命周期中面临的最具挑战性的应激条件之一是氧化剂的积累。在氧化应激过程中，细胞高度依赖分子伴侣。本文介绍了用于研究氧化还原调控的抗聚集活性的方法，以及利用氢氘交换质谱（HDX-MS）监测调控伴侣功能的结构变化的方法。...

利用氢氘交换质谱法定义Hsp33的氧化还原调控型分子伴侣活性并绘制其构象变化

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基于毛细管电泳的氢/氘交换结合自上而下质谱法用于蛋白质构象表征

单体α-突触核蛋白的结构集合影响其生理功能和理化性质。本方案描述了如何在生理条件下，对这种内在无序蛋白的单体进行毫秒级氢/氘交换质谱分析及后续数据处理，以获得其构象信息。...

毫秒级氢/氘交换质谱法用于生理条件下α-突触核蛋白结构动力学研究

本文介绍了蛋白质复合物的亲和纯化及其通过蓝色天然PAGE分离的实验方案，随后采用无标记定量质谱技术进行蛋白质相关性分析。该方法有助于将相互作用组解析为不同的蛋白质复合物。...

通过蓝色天然PAGE和蛋白质相关性分析解析亲和纯化蛋白质复合物

脂滴是多种病原体复制的重要细胞器，包括丙型肝炎病毒（HCV）。本文描述了一种用于分离脂滴并对其相关蛋白进行定量质谱分析的方法；该方法可用于多种实验条件，如病毒感染、环境应激或药物处理。...

脂滴分离用于定量质谱分析

本文针对基于蛋白质的水凝胶中调控三维结构的不同方法，从材料特性角度进行了评估。将大孔网络功能化修饰以细胞黏附肽，并利用两种不同的模式细胞系评估其在细胞培养中的可行性。...

用于细胞培养应用的蛋白基水凝胶结构的简便调控

学习使用氢-氘交换质谱技术（HDX-MS）研究肽生物合成酶的构象动态。该方法可在近天然条件下分析蛋白质动力学，无需标记，为理解酶功能机制提供重要见解。

一种用于研究肽类生物合成酶的氢-氘交换质谱（HDX-MS）平台

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