利用浊度和血栓弹力图进行互补性凝块表征

血栓弹力图和浊度测定是两种简单且独特的血凝块表征方法。这两种技术结合使用，可更全面地了解凝血变量如何影响血凝块的特性。与许多其他血凝块表征工具不同，这两种方法不仅能提供终点血凝块分析，还能动态监测随时间推移的纤维蛋白凝块形成过程。这些技术有助于开发一种生理相关的人工合成血凝块平台，从而为血栓患者的纤溶状态提供可靠的诊断依据。为监测血凝块浊度随时间的变化，可使用任何市售的分光光度计，其吸光度检测范围应为350至700纳米。

打开光谱仪并启动相应的分析软件。然后选择一号板，打开板设置选项卡。点击ABS和动力学选项，以监测随时间变化的动态吸光度。

在波长选项卡中选择 550 纳米，然后切换到时间选项卡，将总运行时间设置为 60 分钟，间隔为 30 秒，并通过高亮选中感兴趣的孔。用移液器将 140 微升 PBS 加入一个紫外透光的 96 孔板中的一个孔内。然后加入 10 微升凝血酶并混匀，立即加入 50 微升纤维蛋白原以启动凝血反应，并仅使用移液器的第一档上下吹打混合 5 次，注意避免产生气泡。

将培养板放入板架中，然后在软件中点击读取以开始浊度检测。检测完成后，获取浊度数据，并通过绘制随时间变化的吸光度曲线获得浊度变化曲线；通过取曲线中随时间变化的最大吸光度值确定最大浊度，再将最大浊度乘以 0.9 计算得到 90% 最大浊度。通过计算从凝块启动至达到 90% 最大浊度的时间，得出达到最大浊度所需的时间。

打开血栓弹力图（TEG）分析仪，等待温度稳定在37摄氏度后，启动TEG软件，并在ID部分创建实验名称。点击TEG标签，按照屏幕提示对所有通道执行eTest检测。所有检测完成后，将杠杆复位至加载位置。

在信息页面点击“完成”，并输入将要使用的通道的样品信息。将一个透明无涂层的TEG杯放入对应的通道中。将载体向上滑动至顶部，然后将杯底向扭力杆方向按压五次，以固定插销，随后降低载体，并将杯子向下压入底座直至发出咔嗒声。

用移液器将20微升凝血酶溶液加入TEG杯中，然后加入340微升纤维蛋白原启动凝血，得到总体积为360微升的凝血反应液。通过上下吹打5次混匀杯内液体。将装有样品的杯架推入仪器，移动杠杆至检测位置，然后在软件中点击“开始”以启动TEG检测。

读数完成后，提取参数，并通过绘制振幅随时间变化的曲线获得血栓弹力图（TEG） tracing 曲线。从软件中获取最大振幅（MA），其反映血凝块强度，以及达到最大振幅所需时间（TMA）。此处展示了不同纤维蛋白原水平下人和牛纤维蛋白凝块的代表性浊度曲线及TEG tracing 曲线。

示踪曲线显示，在凝块形成开始后经过一段滞后期，凝块浊度或凝块振幅随时间逐渐增加，并在凝块形成结束时趋于平稳。最大浊度和达到最大浊度的时间是从浊度曲线中获得的两个参数，而最大振幅和达到最大振幅的时间则来自血栓弹力图（TEG）。当凝血溶液中纤维蛋白原水平较高时，这四个数值均会增加。

最大浊度是一种反映凝块结构的光学指标，可指示纤维蛋白纤维的粗细程度和纤维蛋白网络的密度。而最大振幅则是一种机械性测量指标，反映凝块的绝对应变强度。这两个数值结合使用，可互补地提供关于凝块微观结构的深入信息。本实验流程展示了一种简化的凝血模型，用于研究主要影响纤维蛋白聚合过程的各种变量。

通过加入其他凝血因子，可对该模型进行定制化以研究其他参数。该凝血模型可方便地使用临床血浆样本进行修改，以监测在抗血栓药物存在情况下的血块形成与溶解过程。结果可为患者的治疗管理提供指导。