从植物提取物和分数中识别新型抗菌和抗生物膜分子的系统方法，以防止牙科蛀牙

所展示的协议用于正确筛选和分析天然产品中的生物活性候选物，以控制口服生物膜。它也可以适应其他生物膜研究领域的应用。这种最淀粉筛选和分析的方法使得同时去除生物活性成分成为可能。

牙科蛀牙是一种生物膜饮食衍生，高度流行，慢性疾病。该协议可以帮助识别天然产品，以控制生物膜，因此，牙科蛀牙。首先用水酒精混合物准备提取溶剂。

您对每毫升提取溶剂的浓度进行 50 到 100 毫克的采样，并在微管中执行 15 分钟的超声波辅助提取。重复提取三次。每次提取步骤后，将样品离心以去除固体残留物并去除超纳坦。

将每个提取步骤中的超纳丁混合并过滤它们。保存用于化学分析和生物分析的别名。对于分馏，用初始萃取溶剂稀释粗提取物样品，获得每毫升100毫克的溶液。

然后，将一毫升样品转移到一个带一克吸附剂的预制固相萃取盒中，容量为六毫升。执行分馏，使用每个提取LUN的大约三个死卷，并通过LUN组成收集一个分数。保存阿里引用用于化学分析和生物分析。

在真空、氮流或冻干下去除溶剂，并登记重量和产量。用最好的溶剂重组干物质。使用文本手稿中的公式计算库存溶液的溶剂浓度。

在血液中重新激活S.mutans UA 159的微生物株，并在液体培养介质中培养它。使用相同的文化介质对初始文化进行一到二十次稀释，并孵化到达到中日志生长阶段。在 TYEG 中与定义人群一起准备抗微生物检测和 TYE 与 1% 蔗糖进行生物膜检测的接种。

对于抗微生物活性，定义样本的浓度以供分析，并将其添加到 96 井板中。如文本手稿所述，在每个盘子中包括一组控件。使用 TYEG，将体积调整到 100 微升，接种 100 微升微生物培养物，并在 5% 的二氧化碳下在 37 摄氏度下孵育板 24 小时。

通过对油井的目视检查，根据浊度分析细菌生长。在复制品中为特定的琼脂板中接种所需稀释的别名，并孵育板。孵化后，执行殖民地计数。

在微管中称重羟基甲酸酯珠，并将其消毒。然后洗珠子，用吸附缓冲液Ab.添加500微升唾液到微管中形成唾液膜，在37摄氏度下孵育，每分钟24次旋转，持续40分钟。取出唾液超纳坦，用 Ab 洗珠三次，为下游检测做好准备。

将500微升样品或控制器加入每个含有唾液颗粒珠子的微管中，并以每分钟24次旋转和37摄氏度孵育30分钟。用 Ab.添加 500 微升微生物培养物到每个微管中三次清洗珠子，并在类似条件下孵育一小时。然后用 Ab 缓冲器清洗未绑定的细胞三次。

用一毫升 Ab 缓冲器重新悬念每个样品，在 7 瓦处重新悬念 30 秒。连续稀释每个悬架的点名，十倍，并把它们镀在特定的琼脂板上。在37摄氏度下以5%的二氧化碳孵育板48小时，并计算菌落。

对于数据分析，将生物测定原始数据输入电子表格，并计算每个治疗的微生物生长抑制日志，以及微生物生长抑制日志百分比与控制相比。校正读数的光学密度，并计算生物质抑制的百分比。此处显示了在三个品种的 C.sylvestris 提取物（即西尔维斯特里、中间和通用语）中对克莱罗丹型二恶英和甘油酸的化学筛选量的化学剖析。

在对原始数据进行分析后，四个摘录显示出良好的响应。这四个提取物的色谱数据显示了克莱罗丹型二恶烷和糖化黄酮类化合物的同时存在。此外，它们还包括相同的生物群系和品种。

此处显示了经过处理的浮布细胞的 CFU、已处理生物膜的生物量百分比和处理生物膜的百分比 CFU。没有粗提取物显著影响粘附在唾液颗粒上的S.mutans细胞的去除。S.mutans细胞与葡萄糖基质的粘附被三种粗提取物削弱。

由于每个植物物种都需要优化和特定的化学分析方法，因此必须从以前的报告中选择最佳溶剂分数和分析方法，或由实验设计定义。关键是要准备配方与最活跃的粗提取物和分数，并在复杂的模型上测试它们，以防止生物膜和腔的发展。