Name: 获得全种子尺寸树脂部分的简单干截块方法及其应用 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-01-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: 学习使用LR White树脂包埋和干切片技术制备全种子尺寸切片，用于观察玉米籽粒中的细胞、淀粉粒和蛋白体形态。该方法可定量分析不同区域的形态参数，适用于种子发育生物学和品质研究。

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本研究由国家自然科学基金（32071927）、扬州大学人才项目以及江苏省高校优势学科建设工程资助。

1. 树脂包埋种子的制备（图1）
<ol>
	<li>将六粒玉米成熟籽粒置于10 mL 2.5%磷酸盐缓冲戊二醛（0.1 M，pH 7.2）中，在4 °C下固定48小时。研究人员可根据研究目的和组织类型选择其他固定液组合、固定液浓度及固定条件。</li>
	<li>取出籽粒，用锋利的双面刀片将其纵向或横向切成2–3 mm厚的切片，再置于10 mL 2.5%磷酸盐缓冲戊二醛（0.1 M，pH 7.2）中，继续固定48小时。</li>
	<li>用10 mL 0.1 M磷酸缓冲液（pH 7.2）清洗样品三次，每次30分钟。</li>
	<li>用10 mL乙醇水溶液逐步进行脱水处理，依次为30%、50%、70%、90%各一次，100%三次，每次30分钟。</li>
	<li>在4 °C条件下，用10 mL LR White树脂乙醇稀释液逐步渗透样品，浓度依次为25%、50%、75%各一次，100%两次，每次12小时。</li>
	<li>包埋前准备样品底座。向2 mL离心管中加入0.25 mL 100% LR White树脂，在60 °C下聚合48小时。</li>
	<li>将纯LR White树脂（0.5 mL）和已渗透的样品依次加入带有底座的离心管中，用解剖针将样品摆正，然后在60 °C烘箱中聚合48小时。</li>
</ol>
2. 用于制备整粒种子大小切片的干切法（图1）
<ol>
	<li>从离心管中取出包埋的样品，用锋利的刀片切去样品周围多余的树脂。</li>
	<li>将树脂块固定在超薄切片机（EM UC7）的样品夹上，用刀片切去样品表面及周围的多余树脂。</li>
	<li>使用玻璃刀精细修平样品表面，直至能够形成完整的切片。</li>
	<li>在切片前，于刀刃上方约2 mm处放置一个小铜钩，将样品切成2 µm厚的切片。铜钩的作用是防止切片向上卷曲。</li>
	<li>当切片变长时，将铜钩置于切片下方以支撑切片。</li>
	<li>在未处理的载玻片上加入100 µL水，用镊子小心地将完整且无破损的切片转移至水中。</li>
	<li>为展平皱褶的切片，将样品在50 °C的展片台上加热并干燥过夜。
	<ol>
		<li>若切片碎裂或撕裂，可将每次树脂浸透样品的时间从12 h延长至24 h或48 h。</li>
		<li>若切片出现与刀刃平行的条纹，请将样品块夹紧；若出现与刀刃垂直的条纹，请更换新刀片。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 切片的染色与观察
注意：为了观察细胞、淀粉粒和蛋白质体的组织结构与形态，应根据研究目的使用特定染色剂对切片进行染色。此处，我们分别使用荧光增白剂28、碘液和考马斯亮蓝R250对细胞壁、淀粉粒和蛋白质体进行染色。
<ol>
	<li>为观察细胞形态，将切片置于70 mL密闭玻璃染色瓶中，加入40 mL 0.1% (w/v) 荧光增白剂28水溶液，在45 °C下染色10分钟，然后用流水冲洗5分钟。使用配备CCD相机的荧光显微镜观察并拍照。</li>
	<li>为观察淀粉粒形态，将切片用40 µL碘溶液（含0.07% (w/v) I2 和0.14% (w/v) KI 的25% (v/v) 甘油溶液）染色1分钟，并用盖玻片覆盖含碘溶液的样品。使用配备CCD相机的光学显微镜观察并拍照。</li>
	<li>为观察蛋白体形态，将切片置于70 mL密闭玻璃染色瓶中，加入40 mL 10% (v/v) 乙酸溶液，在45 °C下浸泡10分钟，随后在45 °C下用40 mL 含1% (w/v) 考马斯亮蓝R250、25% (v/v) 异丙醇和10% (v/v) 乙酸的溶液染色15分钟。染色后的切片用流水洗涤5分钟，并干燥。使用配备CCD相机的光学显微镜观察并拍照。</li>
</ol>
4. 形态参数的定量分析
<ol>
	<li>使用形态学分析软件（Image-Pro Plus 6.0 软件），按照 Zhao 等人9 的实验步骤，对种子不同区域的细胞、淀粉颗粒和蛋白体的显微图像进行处理，并定量分析其面积、长/短轴及圆形度。</li>
</ol>

<ol><li>Cai, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+structure+and+spatial+distribution+in+endosperm+of+high-amylose+rice+starch+granules+with+different+morphologies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous structure and spatial distribution in endosperm of high-amylose rice starch granules with different morphologies.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (41), 10143-10152 (2014).</li>
<li>He, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+defective+effect+of+starch+branching+enzyme+IIb+from+weak+to+strong+induces+the+formation+of+biphasic+starch+granules+in+amylose-extender+maize+endosperm%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The defective effect of starch branching enzyme IIb from weak to strong induces the formation of biphasic starch granules in amylose-extender maize endosperm.</a> Plant Molecular Biology. 103 (3), 355-371 (2020).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradually+decreasing+starch+branching+enzyme+expression+is+responsible+for+the+formation+of+heterogeneous+starch+granules%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gradually decreasing starch branching enzyme expression is responsible for the formation of heterogeneous starch granules.</a> Plant Physiol. 176 (1), 582-595 (2018).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dek35+encodes+a+PPR+protein+that+affects+cis-splicing+of+mitochondrial+nad4+intron+1+and+seed+development+in+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant%22%5BJournal%5D)">Dek35 encodes a PPR protein that affects cis-splicing of mitochondrial nad4 intron 1 and seed development in maize.</a> Molecular Plant. 10 (3), 427-441 (2017).</li>
<li>Hu, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+structure+characteristics+to+form+ultrahigh+oil+content+in+rapeseed%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Seed structure characteristics to form ultrahigh oil content in rapeseed.</a> PLoS One. 8 (4), 62099(2013).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maize+VKS1+regulates+mitosis+and+cytokinesis+during+early+endosperm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Maize VKS1 regulates mitosis and cytokinesis during early endosperm development.</a> Plant Cell. 31 (6), 1238-1256 (2019).</li>
<li>Xu, A., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+comparison+and+applications+of+different+sections+in+investigating+the+microstructure+and+histochemistry+of+cereal+kernels%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">Comprehensive comparison and applications of different sections in investigating the microstructure and histochemistry of cereal kernels.</a> Plant Methods. 16, 8(2020).</li>
<li>Zhao, L., Pan, T., Cai, C., Wang, J., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+whole+sections+of+mature+cereal+seeds+to+visualize+the+morphology+of+endosperm+cell+and+starch+and+the+distribution+of+storage+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cereal+Science%22%5BJournal%5D)">Application of whole sections of mature cereal seeds to visualize the morphology of endosperm cell and starch and the distribution of storage protein.</a> Journal of Cereal Science. 71, 19-27 (2016).</li>
<li>Zhao, L., Cai, C., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+image+processing+method+for+investigating+the+morphology+of+cereal+endosperm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+%26+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">An image processing method for investigating the morphology of cereal endosperm cells.</a> Biotech & Histochemistry. 95 (4), 249-261 (2020).</li>
<li>Borisjuk, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+architecture+shapes+embryo+metabolism+in+oilseed+rape%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Seed architecture shapes embryo metabolism in oilseed rape.</a> The Plant Cell. 25 (5), 1625-1640 (2013).</li>
<li>Lott, J. N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+bodies+in+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Nordic+Journal+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Protein bodies in seeds.</a> Nordic Journal of Botany. 1, 421-432 (1981).</li>
<li>Jing, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+endosperm+cells+and+starch+granules+in+common+wheat%5BTitle%5D)+AND+%22Cereal+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Development of endosperm cells and starch granules in common wheat.</a> Cereal Research Communications. 42 (3), 514-524 (2014).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

种子是食品、饲料和工业原料最重要的可再生资源，富含淀粉和蛋白质等贮藏物质。细胞的形态与数量以及贮藏物质的含量和构型均影响种子的重量和品质7,12。尽管体视学和图像分析技术可用于测量组织区域内细胞的大小和数量，但这些技术在许多实验室中仍较为缺乏。石蜡切片和树脂切片仅能提供二维（2D）图像，无法用于分析细胞的真实大小和数量。然而，由于细胞在任意平面上被随机切割，通过统计至少三个不同组织区域切片中大量细胞（超过100个）的平均值，可反映细胞的二维形态参数（如长度、宽度和面积），而所选区域面积与平均细胞面积的比值则可反映细胞数量。因此，原位观察和分析种子不同区域中细胞及贮藏物质的形态具有重要意义。石蜡切片最适合制备整粒种子大小的切片，尤其适用于大粒种子7。然而，随着种子发育，细胞中充满贮藏物质，导致从发育后期种子和成熟种子中获得高质量的整粒种子大小切片极为困难。此外，石蜡切片过厚，难以清晰展示细胞形态，仅适用于研究种子的组织结构7。<...

植物种子含有淀粉和蛋白质等贮藏物质，为人类提供能量和营养。细胞及贮藏物质的形状、大小和数量决定了种子的重量和品质。种子不同区域的细胞和贮藏物质具有显著不同的形态，尤其对于一些因抑制淀粉分支酶IIb而具有高直链淀粉含量的谷类作物而言更是如此1,2,3。因此，研究种子不同区域中细胞和贮藏物质的形态具有重要意义。
石蜡切片是一种制备全种子尺寸切片的良好方法，能够展示种子的组织结构以及种子不同区域中贮藏物质的积累情况4,5,6。然而，石蜡切片通常厚度为6–8 µm，分辨率较低，因此很难清晰观察并定量分析细胞和贮藏物质的形态。树脂切片通常厚度为1–2 µm，分辨率高，非常适合用于观察和分析细胞及贮藏物质的形态7。但常规树脂切片方法在制备全种子尺寸切片方面存在困难，尤其是对于体积较大且淀粉含量较高的种子，因此无法实现对种子不同区域中细胞和贮藏物质形态的观察与分析。LR White树脂是一种丙烯酸树脂，具有低黏度和强渗透性，因而适用于种子树脂切片的制备，特别是适用于体积大、淀粉含量高的谷类成熟籽粒。此外，包埋在LR White树脂中的样品可方便地使用多种化学染料进行染色，从而在光学显微镜或荧光显微镜下清晰显示细胞和贮藏物质的形态7。在我们之前的研究论文中，已报道了一种用于制备包埋于LR White树脂中的谷类成熟籽粒全种子尺寸切片的干法切片技术。该方法也可用于制备发育中、萌发后及煮熟的谷类籽粒的全种子尺寸切片8。所获得的全种子尺寸切片在微观形态学观察与分析方面具有广泛应用，尤其适用于清晰观察并定量分析种子不同区域中细胞和贮藏物质形态的差异8,9。
该技术适用于希望利用光学显微镜观察组织微结构以及种子不同区域中细胞、淀粉粒和蛋白体的形态与大小的研究人员。通过对特异性染色的全籽粒大小切片进行成像，可使用形态学分析软件对种子不同区域中细胞、淀粉粒和蛋白体的形态参数进行定量测量。为展示该技术的适用性及全籽粒切片的应用效果，本研究考察了玉米和油菜的成熟种子，以及水稻的发育中、萌发和煮熟的籽粒。本实验方案包含四个步骤。此处以成熟玉米籽粒为例，因其体积大、淀粉含量高，是制备全籽粒大小切片最具挑战性的材料，用于逐步展示各操作流程。

<table><tbody><tr><td>乙酸</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>A501931</td><td></td></tr><tr><td>紧凑型玻璃染色缸（5位）</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>E678013</td><td></td></tr><tr><td>考马斯亮蓝R-250</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>A100472</td><td></td></tr><tr><td>盖玻片</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>F518211</td><td></td></tr><tr><td>双面刀片</td><td>吉列上海有限公司</td><td>74-S</td><td></td></tr><tr><td>无水乙醇</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>A500737</td><td></td></tr><tr><td>展片台</td><td>徕卡</td><td>HI1220</td><td></td></tr><tr><td>荧光显微镜</td><td>奥林巴斯</td><td>BX60</td><td></td></tr><tr><td>荧光增白剂28</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>910090</td><td></td></tr><tr><td>玻璃条</td><td>徕卡</td><td>840031</td><td></td></tr><tr><td>50% 戊二醛水溶液</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>A600875</td><td></td></tr><tr><td>甘油</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>A600232</td><td></td></tr><tr><td>碘</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>A500538</td><td></td></tr><tr><td>异丙醇</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>A507048</td><td></td></tr><tr><td>光学显微镜</td><td>奥林巴斯</td><td>BX53</td><td></td></tr><tr><td>LR White 树脂</td><td>Agar Scientific</td><td>AGR1281A</td><td></td></tr><tr><td>烘箱</td><td>上海精宏实验设备有限公司</td><td>9023A</td><td></td></tr><tr><td>碘化钾</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>A100512</td><td></td></tr><tr><td>载玻片</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>F518101</td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>F519022</td><td></td></tr><tr><td>十二水合磷酸氢二钠</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>A607793</td><td></td></tr><tr><td>二水合磷酸二氢钠</td><td>生工生物（上海）有限公司</td><td>A502805</td><td></td></tr><tr><td>超薄切片机</td><td>徕卡</td><td>EM UC7</td><td></td></tr></tbody></table>

一种简易的干切法获取整粒种子大小的树脂切片及其应用

A Simple Dry Sectioning Method for Obtaining Whole-Seed-Sized Resin Section and Its Applications

细胞、淀粉粒&#160;和蛋白体在种子中的形态、大小和数量决定了种子的重量和品质。它们在种子不同区域之间存在显著差异。为了清晰观察细胞、淀粉粒和蛋白体的形态，并准确地对其形态参数进行定量分析，需要制备贯穿整个种子尺寸的切片。尽管全种子尺寸的石蜡切片可用于研究种子中贮藏物质的积累情况，但由于切片较厚，分辨率较低，难以对细胞和贮藏物质的形态参数进行定量分析。树脂薄切片具有高分辨率，但常规树脂切片方法不适用于制备体积较大、淀粉含量高的成熟种子的全种子尺寸切片。本研究介绍了一种简便的干法切片技术，用于制备全种子尺寸的树脂切片。该技术可用于制备发育中、成熟、萌发及煮熟的种子在LR White树脂包埋后的横切和纵切全种子尺寸切片，即使对于淀粉含量高、体积大的种子也同样适用。全种子尺寸切片可用荧光增白剂28、碘和考马斯亮蓝R250分别特异性染色，以清晰显示细胞、淀粉粒和蛋白体的形态。所获得的图像还可进行定量分析，以展示种子不同区域中细胞、淀粉粒和蛋白体的形态参数。

一种简便的干法切片技术以获得全种子尺寸的切片 
我们建立了一种简便的干法切片方法，用于制备包埋在LR-white树脂中的种子的全种子尺寸切片（图1）。该方法可制备厚度为2 µm的横切和纵切全种子尺寸切片（图2-5，补充图1-4）。例如，油菜的成熟种子可进行横切和纵切（图2）。对于谷类作物，其成熟籽粒富含淀粉粒，因此制备全种子尺寸切片非常困难。采用本技术，也可成功制备大体积的成熟玉米籽粒的横切和纵切全种子尺寸切片（图4，补充图1）。此外，水稻的发育中籽粒（补充图2）、萌发籽粒（补充图3）以及煮熟籽粒（补充图4）均可利用该方法进行研究。</...

该技术可快速、简便地制备整粒种子大小的树脂切片，用于观察和分析种子不同区域的细胞、淀粉粒和蛋白体。

种子中细胞的形态、大小和数量，以及淀粉粒和蛋白体，决定了种子的重量和品质。它们是……

籽粒中细胞、淀粉粒和蛋白体的形态学特征及其质量决定了种子的重量和品质。本研究采用LR White树脂包埋完整籽粒，建立了一种简单的整粒干燥吸附方法。我们选择LR White树脂作为包埋介质主要基于两个原因。首先，它具有低黏度和强渗透性，因此在制备大体积、高淀粉含量的谷物成熟籽粒等坚硬种子切片时表现出良好的适用性。其次，包埋于LR White树脂中的样品可轻易使用多种化学染料进行染色，从而在荧光显微镜下清晰地显示样品的形态结构。制备的切片可进行特异性染色，清晰呈现整粒籽粒中细胞、淀粉粒和蛋白体的分布，同时可对形态学参数进行定量分析。该方法包含多个研究步骤。此处，我们以体积较大、高淀粉含量的成熟玉米籽粒为样品，逐步展示操作流程。首先，将籽粒剪入一个简单的瓶子中。加入约10毫米的2.5%磷酸盐缓冲戊二醛，调节pH至7.2，置于4摄氏度环境中固定48小时。随后取出这些样品，将其纵向或横向切成2至3毫米厚的切片。需要使用锋利的双面刀片。然后将样品再固定 48 小时。接下来，用约 10 毫米即 0.1 M 磷酸盐缓冲液（pH 7.2）洗涤样品三次，每次 30 分钟。为逐步水合样品，首先将样品浸入约10毫米的30%乙醇水溶液中30分钟，随后依次浸入10毫米的50%、70%、90%乙醇溶液各一次，再浸入100%乙醇溶液三次。为逐步渗透样品，需在4摄氏度条件下，每次用12小时，依次用10毫米的LR White树脂溶液与乙醇按25%、50%、75%浓度稀释的溶液各处理一次，再用100% LR White树脂溶液处理两次。包埋前，我们需要为样品制备底座。向2毫升离心管中加入250微升纯LR White树脂，并在6摄氏度下聚合48小时。接着，依次加入500微升纯LR White树脂，并将带有底座的样品浸入离心管中。用解剖针将样品摆正后，将树脂置于6摄氏度的烘箱中反应48小时。从离心管中取出包埋的样品块，使用锋利的刀片切除样品周围的多余树脂。将树脂块放入切片机的样品夹中，用刀片削去样品表面及周围的过量树脂。最后使用玻璃刀对样品表面进行精细修整，直至能够形成完整的切片。现在开始准备切取厚度为两微米的优质切片。切片前，在刀刃上方约两毫米处放置一根细小的铜丝，以防止切片卷曲。当切片逐渐延长时，在切片下方插入铜丝以提供支撑。接下来，将100微升水滴加到未凸起的载玻片上，并用镊子小心地将完整且无破损的切片转移至水中。在50摄氏度下加热并干燥，以展平皱褶的切片。最后，需要注意两个重要提示。首先，如果切片出现碎裂或撕裂，请延长样本的每次树脂浸透时间。其次，如果切片上出现与刀刃平行的条纹，请将样本块夹紧；如果切片上出现与刀刃垂直的条纹，请更换新刀片。为了观察细胞、淀粉粒和蛋白质体的形态，我们可以分别使用荧光增白剂28、碘液和考马斯亮蓝R250对切片进行染色。对于其他特定染色方法，应根据研究方案确定。此处以碘液染色淀粉粒为例。加入 40 微升碘溶液以浸没切片，将切片置于染色缸中一分钟，然后用盖玻片覆盖样品。并用吸水纸吸去其周围多余的试剂溶液。立即在配备CCTV摄像头的光学显微镜下观察并拍摄样品。我们可以利用形态学分析软件对拍摄的图像进行处理和定量分析，测定籽粒不同区域的细胞、淀粉粒和蛋白体的面积、长轴或短轴以及圆度等参数。我们建立了一种简单的干法切片技术，用于在LR White树脂中保留完整籽粒大小的切片。该方法可制备整个籽粒的横切面和纵切面，厚度为两微米。例如，可对成熟油菜籽的完整种子进行横切和纵切。体积较大的成熟玉米完整籽粒的切片也可成功制备。此外，发育中的籽粒、煮熟的籽粒以及萌发的籽粒也可利用该方法进行研究。制备好的完整籽粒切片具有以下应用。首先，可以利用完整籽粒的切片来观察种子的组织结构。例如，用藏红染色的油菜胚整体切片可以清晰地显示其胚根、子叶、内层和外层结构。完整籽粒的切片还可用于观察和分析细胞形态。例如，用荧光增白剂28染色的油菜胚横切片可特异性地显示细胞中的油脂。整个胚胎任意区域细胞的显微形态均可在高倍镜下显示。利用形态学分析软件可对薄壁细胞的形态参数进行定量分析，并揭示胚胎不同区域之间存在的某些差异。经荧光增白剂28染色的玉米全胚乳横切面也可呈现细胞形态，且在胚乳不同区域，细胞的形态参数亦存在差异。可用碘液对完整籽粒进行染色，以显示其淀粉粒的形态。例如，经碘液染色的玉米籽粒横切面和纵切面均可清晰展示淀粉粒的形态。在胚乳细胞的不同区域中，淀粉粒在形态、大小和数量上均表现出显著差异。因此，对淀粉粒形态参数的定量分析表明，胚乳不同区域间的淀粉粒存在显著差异。这些切片可用于观察和分析蛋白质体的形态。例如，淀粉蛋白可使用考马斯亮蓝R250染成蓝色。在低倍镜下可以观察到油菜胚整体中淀粉蛋白的空间分布，而在高倍镜下则可清晰展示其显微结构。此外，还可对所选区域内蛋白体的数量误差指数和形态参数进行定量分析。该技术首次实现了对发育中和成熟种子完整籽粒树脂切片的简便制备。通过该方法可对完整籽粒的组织结构进行切片观察，进而研究完整籽粒不同区域的细胞、淀粉粒以及蛋白体的形态特征。所获得的图像可进行定量分析，以展示细胞、淀粉颗粒和蛋白质体的形态参数，并进一步比较整粒种子不同区域之间的差异。

a-simple-dry-sectioning-method-for-obtaining-whole-seed-sized-resin

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

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结晶纤维素是植物细胞壁的重要组成成分。然而，在细胞分辨率下对其进行定量在技术上具有挑战性。本文中，我们报道了利用偏振光技术结合根部横切片，以获取具有时空分辨率的细胞壁组分信息。...

高分辨率定量分析结晶纤维素的积累 拟南芥 监测组织特异性细胞壁修饰的根部方法

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一种用于透射电子显微镜下获取微生物连续超薄切片的方法

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用于解读菌根异养植物组织中真菌定植及种子共生萌发的显微技术

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