完整的心包缺血性啮齿动物模型

该协议概述了在保留心包及其内容物的同时诱导小鼠心肌梗死的步骤。

这种方法将使我们能够评估心脏周围的心包腔及其内容物在心肌梗塞后心脏修复中的作用。与用于模拟心肌梗死的传统冠状动脉结扎方法相比，我们的方法保持完整的心包腔，允许确定内容物并跟踪其在心脏缺血性损伤后的作用。了解心包腔的贡献和心脏损伤反应将为针对心包改善心脏愈合的治疗策略提供重要的见解。

从麻醉后开始，约束小鼠的爪子并将其放在手术台上。按照手稿中所述准备小鼠进行手术后，使用商用呼吸机用2%异氟醚和100%氧气作为载气对小鼠进行通气。然后设定每分钟110次呼吸，潮气量250微升，呼气末正压为4毫米汞柱。

将鼠标在其右侧滚动 30%，以定位胸部的左侧以进行手术。然后在胸部皮肤上做一个两到三厘米的横向切口，以观察左侧的胸大肌。从中线向外切开一厘米的切口，用于切开大胸大胸和小胸肌。

在整个出血血管烧灼过程中避免过度出血。可视化第三和第四肋骨之间的肋间肌肉。在左肋间肌上做一个两厘米的切口，将空气引入胸腔，让心脏和肺从切口上脱落。

为了切开肋间而不出血，请暂时停止呼吸机并使用烧灼装置扩大开口。使用牵开器，缩回肋骨以暴露心脏。然后在体视显微镜下观察心包和下面的心脏。

轻轻地将镊子放在心包表面，以减少心包和潜在的心脏运动。通过追踪LAD冠状动脉在左附件下的出现，在视觉上地标它。使用微针驱动器，引导适当的缝合线穿过LAD下方的心包。

观察LAD和心包另一侧出现的缝合线。代表永久性结扎模型，绑合缝合线以限制通过冠状动脉的血流，使左心室前部的漂白可见。然后借助剪刀修剪多余的缝合线。

术后 72 小时每 12 小时皮下注射一次维持性镇痛药。将异氟醚降低到1%后，关闭异氟烷，同时保持氧气通气。一旦动物出现呼吸迹象，从嘴里取出 23 号气管插管并将小鼠放在恢复笼中以监测呼吸恢复。

让小鼠在笼子中恢复，将笼子的一部分放在加热垫上以提供外部热源。通过评估切口和动物不适来监测小鼠的健康状况，持续七天。如有必要，给予抗生素以在侵入性手术后成功恢复。

用氧气将鼠标保持在全身麻醉下后，将鼠标仰卧在加热的载物台平台上，并将爪子连接到心电图导联线上。然后擦伤胸部。使用换能器探头和接触凝胶采集心电图图像，并使用适当的软件进行分析。

无创心电图评估后，关闭异氟醚并将小鼠放回笼中。用10%福尔马林固定心脏至少24小时。使用直剃刀刀片穿过右心室、室间隔和左心室切割样本，确保切口穿过梗死区的中心。

然后石蜡包埋组织样品。然后将切割切片放置在安装盒中，以进一步嵌入石蜡，随后切成五微米厚的切片。将组织切片放置在载玻片上后，使用甲苯和分级酒精洗涤液用去离子水脱蜡。

然后补充水分。接下来，在室温下用苦味酸中用0.1%天狼星红染色切片两个小时。用0.5%乙酸清洗切片三分钟，然后用70%乙醇冲洗一分钟。

在安装以进行显微镜评估之前，使用与乙醇浓度增加和分级的洗涤相反的洗涤顺序使切片脱水。通过检查心脏的功能参数和结构特征，评估改良冠状动脉结扎术成功诱导心肌梗死的情况。对于功能，在心肌梗死后三到四周内通过超声心动图评估左心室射血分数降低。

组织学染色表明，功能变化伴有左心室壁的显着纤维化，这通过对梗死后四周心脏横截面的picrosirius红色染色纤维化进行定量进一步证实，心包或完整的心包冠状动脉结扎模型。将荧光珠标记方法与流式细胞术分析相结合，提供了一种跟踪驻留Gata6阳性心包巨噬细胞的方法。重要的是，在心脏或血液中几乎没有检测到标记。

心肌梗死后，可以通过流式细胞术和成像跟踪细胞的重新定位。显示了荧光珠标记的心包骨髓细胞的定量，伴或不伴有心肌梗死。需要注意防止在手术过程中无意中破坏或撕裂薄心包。

该方法可以与谱系追踪细胞或效应阻断相结合，这将允许跟踪和确定心包成分对梗死心脏愈合反应的影响。我们已经确定心包腔在受伤后保护心脏，这部分是由常驻心包巨噬细胞介导的。这种方法开辟了心血管疾病的新研究领域。