Name: 小鼠皮肤移植 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-01-16T10:34:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: 学习小鼠皮肤移植技术，使用BALB/c至C57BL/6同种异体模型研究宿主T细胞对MHC差异供体抗原的免疫反应。该方法为评估移植物排斥反应和免疫耐受诱导策略提供了标准实验平台。

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美国国立卫生研究院免疫学培训基金 T32 AI 60573（KRG）和美国国立卫生研究院基金 GM 41514（MDC）

实验开始前：
<ul>
<li>获得IACUC批准</li>
<li>对手术器械和棉签进行灭菌</li>
</ul>
一、收获供体组织
<ol>
<li>按照机构的标准操作程序实施供体小鼠安乐死</li>
<li>用酒精将耳根部的毛发润湿</li>
<li>从耳根处剪下耳朵，获取供体皮肤</li>
<li>将组织置于冰上的培养皿中</li>
<li>分离耳组织：用鼠齿镊夹住耳根处组织的腹侧和背侧，轻轻拉开组织；将背侧组织（内表面朝下）漂浮在冰上的磷酸盐缓冲液（PBS）中；弃去富含胶原的腹侧瓣膜</li>
</ol>
二、准备移植受体
<ol>
<li>使用批准的程序对小鼠进行麻醉</li>
<li>给予镇痛药以缓解术后疼痛（例如，腹腔注射 0.05–0.1 mg/g 布托啡诺）</li>
<li>将小鼠置于侧卧位</li>
<li>进行足趾夹捏以确认动物已充分镇静</li>
<li>用酒精润湿毛发并剃除胸部毛发</li>
<li>用酒精棉片擦拭区域使之清洁</li>
</ol>
三、皮肤移植
<ol>
<li>做约 1 cm 的切口：用鼠齿镊提起皮肤，并在镊子下方约 0.25–0.5 cm 处剪开</li>
<li>将供体皮肤从 PBS 中取出，放置于移植床表面（耳部皮肤的内侧面朝向移植床），并用无菌棉签吸除多余的 PBS</li>
<li>仔细修剪多余的供体皮肤，使移植物平整地贴合于移植床内（确保移植物边缘未向内卷曲，且未覆盖到受体躯干皮肤上）</li>
<li>用无菌绷带包裹受体动物（将非粘性纱布部分覆盖于皮肤移植物上）</li>
<li>确保绷带不过紧（观察动物呼吸情况），且四肢可自由活动</li>
<li>用一根 2-0 丝线缝合固定绷带</li>
<li>将动物置于清洁的笼子中（在加热灯下保温，直至动物从麻醉中充分恢复）</li>
<li>每天监测受体 1–2 次，观察是否有痛苦迹象，并根据需要给予镇痛药物以缓解疼痛</li>
</ol>
四、敷料移除（移植后6-7天）
<ol>
<li>使用批准的程序对小鼠进行麻醉</li>
<li>剪开并移除丝线缝合线</li>
<li>使用钝头剪刀小心剪开敷料（确保不损伤移植物），并轻柔取出</li>
<li>将小鼠放回清洁的笼子中</li>
<li>在移除敷料后约8小时检查移植物是否有结痂或收缩迹象。若出现上述情况，可能表明移植物未能成功血管化，应视为技术失败</li>
<li>每日监测排斥反应的迹象（通常定义为供体组织出现约80%的坏死）</li>
<li>同种异体皮肤移植通常在术后第8至12天发生排斥</li>
</ol>
五、实用提示
<ol>
<li>在耳基部附近采集供体组织可实现：1）最大化移植物尺寸，以及 2）提供不规则的腹侧悬垂部分，便于后续分割</li>
<li>为受体剃毛时务必使用新的剃刀刀片</li>
<li>若需通过腹腔注射给予镇痛剂，应在移植手术前给药，以减少术后操作（降低移植物被破坏的风险）</li>
<li>如条件允许，在敷设绷带前应脱去手套。手套容易粘连绷带，导致敷设困难</li>
<li>在绷带末端缝合一针可减少过早脱落的风险</li>
<li>缠绕绷带时应尽可能紧密，但在打结前必须评估动物呼吸情况。若绷带过紧，动物将停止呼吸；若过松，动物会自行拆除</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

如本视频文章所示，皮肤移植模型是一种快速且简便的监测同种异体T细胞反应的方法。同种异体皮肤移植具有广泛的应用，已被用于评估多种免疫抑制剂和耐受诱导方案的效果，同时也被用于研究各种阻断抗体的生物学效应。

<table><tbody><tr><td>显微解剖镊（弯型）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td></td></tr><tr><td>鼠齿镊（1×2齿，直型）</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td>n=2</td></tr><tr><td>斜视剪（钝头）</td><td>Fine Science Tools</td><td>14074-11</td><td></td></tr><tr><td>虹膜镊（弯型）</td><td>Fine Science Tools</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>弹簧剪（角度型）</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>哈尔西微持针器</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>10 cm 培养皿</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Cellgro</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>布托啡诺盐酸盐（Bupernex）</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>517201</td><td></td></tr><tr><td>胰岛素注射器（29 号针头）</td><td>Monoject</td><td>8881 600145</td><td></td></tr><tr><td>棉签</td><td>Solon Manufacturing Company</td><td>362</td><td></td></tr><tr><td>单刃剃须刀片（#9）</td><td>Smith &amp; Nephew Inc.</td><td>67-0238</td><td></td></tr><tr><td>丝线缝合线（2-0；PS-2）</td><td>Ethicon Inc.</td><td>583H</td><td></td></tr></tbody></table>

小鼠皮肤移植

Murine Skin Transplantation

作为最严格且技术难度最低的模型之一，皮肤移植是检测宿主T细胞对MHC差异性供体抗原反应的标准方法。本视频文章旨在通过小鼠模型，为观众提供皮肤移植的逐步可视化演示。该实验方案分为五个主要部分：1）获取供体皮肤；2）准备受体以进行移植；3）皮肤移植操作；4）拆除敷料并监测移植物排斥反应；5）实用技巧提示。熟练掌握后，整个操作过程应在10分钟内完成。

同种异体皮肤移植是检测宿主T细胞对MHC不同的供体抗原反应的标准模型。本视频文章以可视化方式演示了进行BALB/c--&gt;C57BL/6皮肤移植的每一步操作过程。

作为最严格且技术难度最低的模型之一，皮肤移植是检测宿主T细胞对……反应的标准方法

欢迎来到Michael Kalen博士的实验室。我是Kim Gard。今天我们将演示一种皮肤移植模型，该模型采用同种异体BC与黑六品系组合，是组织移植物排斥反应中最严格且技术难度最低的模型之一。皮肤移植是一种用于检测同种异体免疫反应的标准技术，常用于评估各种耐受诱导策略的效果。现在我们开始。该操作首先从BAB品系供体小鼠身上取皮。首先，按照IACUC标准操作程序对供体实施安乐死。接着，用酒精将耳基部的毛发润湿，尽可能靠近基部切除耳朵并获取皮肤，然后将其置于冰上。随后，将每只耳朵的组织切开，弃去富含胶原的腹侧瓣膜，将组织漂浮于冰上。现在供体皮肤已准备好进行移植。移植操作首先使用批准的方法对受体动物进行麻醉。当受体动物达到充分麻醉状态后，将其从麻醉舱中取出，并通过腹腔注射给予布托啡诺（bup）以缓解疼痛。将受体动物置于侧卧位，并通过夹捏脚趾确认动物已完全麻醉。用酒精擦拭湿润的毛发并剃除。待受体动物毛发彻底剃净后，做约一至两厘米的切口。将供体扫描图像置于切口上方，并用无菌棉签清除多余液体。现在仔细修剪掉多余的供体皮肤包裹物、动物组织和绷带。通过评估呼吸情况来确认绷带不过紧，然后检查双臂是否可自由活动。现在用单针缝合固定绷带。将小鼠放入铺有垫料并带有加热灯的清洁笼具中，直至其在术后最初几天内完全恢复。术后应每天数次观察动物是否有痛苦或不适的迹象，并根据需要给予布托啡诺镇痛。术后五到七天，移除绷带。我将演示移植后第六天受体小鼠的绷带拆除过程。待小鼠完全麻醉后，先拆除缝线，然后使用钝头剪刀剪开绷带并轻轻取下，注意不要扰动移植部位。将动物放回清洁的笼子中，并每天监测排斥反应的迹象。根据所选择的小鼠品系组合，大多数皮肤移植会在术后第8至12天被排斥，通常以坏死面积达到80%作为排斥标准。此小鼠为术后第8天，接受了双侧移植。左侧为对照组同基因型 Black Six 移植，不会发生排斥反应。右侧为将被排斥的同种异体 BAB/c 移植。此处为另一例正处于排斥过程中的移植样本。最后，另一种皮肤移植几乎被完全排斥。因此，这三个例子展示了皮肤移植排斥反应动力学的正常变异。在前面的实验中，我们向您展示了如何进行镜像皮肤移植。该模型是一种快速简便的监测同种异体反应的方法，具有广泛的应用范围。例如，皮肤移植可用于评估各种免疫抑制剂、阻断抗体以及耐受诱导方案的效果。以上就是全部内容。感谢观看，祝您的实验顺利。

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科研

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Biology

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