光学相干断层扫描在视网膜病变小鼠模型中的应用

光学相干断层扫描广泛应用于不同视网膜疾病的临床诊断，但在小鼠模型中应用仍具有挑战性。该协议描述了如何管理动物的OCT技术。这项技术可以应用于不同眼球大小的动物。

它可实现非侵入性、高分辨率和实时视网膜横截面成像，以及视网膜厚度的定量测量。OCT 通过识别病变特征（例如病变的位置、范围、形状和大小）以及所有可疑的视网膜异常（例如视网膜新生血管形成）来帮助诊断视网膜病变。该方案适用于动物研究或眼底疾病，包括视网膜疾病。

在开始该过程之前，请做好准备并逐步遵循协议。在动物麻醉时进行实验。经过一些练习，应该能够获得高质量的OCT图像。

首先，打开计算机并启动软件。单击测试程序按钮，完成测试程序。然后，打开恒温器并将其预热至 37 摄氏度。

程序测试完成后，启动 OCT 模块过程。创建一个新主题并填写鼠标信息。然后，预热电热毯并用手术毛巾盖住。

将麻醉的鼠标放在电热毯平台上，并立即用医用透明质酸钠凝胶涂上双眼。接下来，将100D隐形眼镜放在小鼠角膜上，凹面接触角膜表面上的透明质酸钠凝胶。然后，将鼠标放在cSLO设备的小型恒温动物平台上。

用镊子调整隐形眼镜的角度，使瞳孔保持在镜片的中心。微调头部的调整，使眼睛面向正前方。单击OCT按钮，选择鼠标模块，然后启动cSLO程序。

然后，使用操作杆将预设镜片慢慢移向隐形眼镜。进一步调整以对齐前后极的图像，将其集中在视神经头上。接下来，启动 OCT 程序并上下单击进度条，直到出现 OCT 图像。

调整 0 到 20 之间的最小范围和 40 到 60 之间的最大范围。然后，调整预设的镜头距离和位置方向，直到获得理想的OCT图像。通过移动cSLO中的标准线来选择扫描位置。

然后，单击平均值以叠加cSLO和OCT图像信号，然后单击拍摄按钮以获取SLO OCT图像。实验结束后，取下100D隐形眼镜并应用左氧氟沙星眼凝胶以保护角膜。对于视网膜分层矫正，请单击OCT界面上的负载检查，然后从弹出窗口中调出OCT图像。

然后，双击媒体容器中的图像以将其显示在屏幕上。接下来，单击层检测以完成视网膜上的自动分层。在准备进行分析的图层两侧选择分界线后，单击编辑图层以调整间距和限制范围。

然后，通过移动红色圆圈来修改线条。要测量视网膜层厚度，请单击测量标记按钮并选择要分析的图层的分界线，以在OCT图像上显示图层的边界。然后，选择"与图层连接"并在移动时保持连接。

接下来，选择要显示结果的区域，并在OCT图像上单击要分析的位置以显示测量线。单击下一列进行后续测量并显示先前的数据。要测量整个视网膜厚度，请在右上角列表中选择第一行和第七行。

然后，从视边缘的视网膜结构外观，在水平尺上以200微米间隔测量四个值。C57BL / 6小鼠的OCT图像显示具有清晰界限的各种视网膜层。相比之下，Vldlr敲除小鼠表现出异常的高反射病变。

OCT图像在Vldlr敲除小鼠的视网膜表面上显示一些中间反射带。这些条带粘附在视网膜血管上，与不完全玻璃体脱离的OCT特征一致。1例高反射病变出现在视网膜下间隙并扩散到外核层，但没有突破外丛状层。

该病变的OCT外观与病理发现一致。病理切片显示新生血管突破视网膜色素上皮层、感光器内外段和外限制膜，侵入外核层，但不侵犯外层丛状层。另一条位于视网膜下间隙的高反射病变带不累及外核层。

与病理发现一致，这种视网膜下新生血管没有突破外部限制膜。比较两组后极颞、鼻、上、下方向右眼视网膜厚度，发现Vldlr敲除小鼠视网膜厚度明显低于C57BL/6J小鼠。执行方案时，将100D隐形眼镜正确放置在角膜上，然后调整图像位置。

选择扫描位置并在拍摄前叠加图像。按照这个程序，前节OCT是可行的，需要改变预设晶状体和角膜之间的距离。它可以显示角膜、前房、虹膜、睫状体和晶状体。

该技术为小动物模型中的视网膜病变研究提供了重要工具，促进了基础研究中视网膜病变的无创检测和测量。