January 12th, 2022
在这里,我们描述了一种使用光学相干断层扫描的 体内 成像技术,以促进小鼠视网膜病变的诊断和定量测量。
光学相干断层扫描广泛应用于不同视网膜疾病的临床诊断,但在小鼠模型中应用仍具有挑战性。该协议描述了如何管理动物的OCT技术。这项技术可以应用于不同眼球大小的动物。
它可实现非侵入性、高分辨率和实时视网膜横截面成像,以及视网膜厚度的定量测量。OCT 通过识别病变特征(例如病变的位置、范围、形状和大小)以及所有可疑的视网膜异常(例如视网膜新生血管形成)来帮助诊断视网膜病变。该方案适用于动物研究或眼底疾病,包括视网膜疾病。
在开始该过程之前,请做好准备并逐步遵循协议。在动物麻醉时进行实验。经过一些练习,应该能够获得高质量的OCT图像。
首先,打开计算机并启动软件。单击测试程序按钮,完成测试程序。然后,打开恒温器并将其预热至 37 摄氏度。
程序测试完成后,启动 OCT 模块过程。创建一个新主题并填写鼠标信息。然后,预热电热毯并用手术毛巾盖住。
将麻醉的鼠标放在电热毯平台上,并立即用医用透明质酸钠凝胶涂上双眼。接下来,将100D隐形眼镜放在小鼠角膜上,凹面接触角膜表面上的透明质酸钠凝胶。然后,将鼠标放在cSLO设备的小型恒温动物平台上。
用镊子调整隐形眼镜的角度,使瞳孔保持在镜片的中心。微调头部的调整,使眼睛面向正前方。单击OCT按钮,选择鼠标模块,然后启动cSLO程序。
然后,使用操作杆将预设镜片慢慢移向隐形眼镜。进一步调整以对齐前后极的图像,将其集中在视神经头上。接下来,启动 OCT 程序并上下单击进度条,直到出现 OCT 图像。
调整 0 到 20 之间的最小范围和 40 到 60 之间的最大范围。然后,调整预设的镜头距离和位置方向,直到获得理想的OCT图像。通过移动cSLO中的标准线来选择扫描位置。
然后,单击平均值以叠加cSLO和OCT图像信号,然后单击拍摄按钮以获取SLO OCT图像。实验结束后,取下100D隐形眼镜并应用左氧氟沙星眼凝胶以保护角膜。对于视网膜分层矫正,请单击OCT界面上的负载检查,然后从弹出窗口中调出OCT图像。
然后,双击媒体容器中的图像以将其显示在屏幕上。接下来,单击层检测以完成视网膜上的自动分层。在准备进行分析的图层两侧选择分界线后,单击编辑图层以调整间距和限制范围。
然后,通过移动红色圆圈来修改线条。要测量视网膜层厚度,请单击测量标记按钮并选择要分析的图层的分界线,以在OCT图像上显示图层的边界。然后,选择"与图层连接"并在移动时保持连接。
接下来,选择要显示结果的区域,并在OCT图像上单击要分析的位置以显示测量线。单击下一列进行后续测量并显示先前的数据。要测量整个视网膜厚度,请在右上角列表中选择第一行和第七行。
然后,从视边缘的视网膜结构外观,在水平尺上以200微米间隔测量四个值。C57BL / 6小鼠的OCT图像显示具有清晰界限的各种视网膜层。相比之下,Vldlr敲除小鼠表现出异常的高反射病变。
OCT图像在Vldlr敲除小鼠的视网膜表面上显示一些中间反射带。这些条带粘附在视网膜血管上,与不完全玻璃体脱离的OCT特征一致。1例高反射病变出现在视网膜下间隙并扩散到外核层,但没有突破外丛状层。
该病变的OCT外观与病理发现一致。病理切片显示新生血管突破视网膜色素上皮层、感光器内外段和外限制膜,侵入外核层,但不侵犯外层丛状层。另一条位于视网膜下间隙的高反射病变带不累及外核层。
与病理发现一致,这种视网膜下新生血管没有突破外部限制膜。比较两组后极颞、鼻、上、下方向右眼视网膜厚度,发现Vldlr敲除小鼠视网膜厚度明显低于C57BL/6J小鼠。执行方案时,将100D隐形眼镜正确放置在角膜上,然后调整图像位置。
选择扫描位置并在拍摄前叠加图像。按照这个程序,前节OCT是可行的,需要改变预设晶状体和角膜之间的距离。它可以显示角膜、前房、虹膜、睫状体和晶状体。
该技术为小动物模型中的视网膜病变研究提供了重要工具,促进了基础研究中视网膜病变的无创检测和测量。
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本文介绍了一种使用光学相干断层扫描(OCT)对小鼠进行视网膜病变诊断和定量测量的体内成像技术。该协议概述了在动物模型中使用OCT的管理,实现了视网膜的无创和高分辨率成像。
Noninvasive, high-resolution retinal imaging in mouse models using optical coherence tomography (OCT) enables quantitative assessment of retinopathy, supporting early-stage target validation and mechanistic de-risking in ophthalmic drug discovery. The ability to measure retinal thickness and detect neovascularization in vivo enhances predictive confidence and translational continuity from preclinical models to clinical endpoints. This capability is critical for portfolio decisions in retinal disease programs where robust, reproducible biomarkers are required.
OCT-based retinal imaging integrates into the discovery-to-preclinical continuum by enabling hypothesis testing, quantitative phenotyping, and translational biomarker development in mouse models of retinopathy.