2022年3月1日
该协议可用于对自生 的Caenorhabditis 线虫进行大规模的生态调查。该方法的主要优点是有效地组织和分析与从自然界收集的线虫相关的生态和分子数据。
该协议可用于简化从自然界中分离和鉴定Caenorhabditis线虫,并记录与线虫自然环境相关的重要生态和环境数据。该技术的主要优点是其可扩展性和准确性,这是通过利用移动数据收集平台,基于云的数据库和标准化数据处理功能实现的。首先,确定一个位置来调查线虫Caenorhabditis。
要创建支点项目,请使用免费教育协议在线创建一个支点帐户,并添加线虫现场采样应用程序。然后添加线虫隔离应用程序。将一组QR码标签打印为C标签以跟踪集合,将S标签打印为跟踪线虫隔离。
将C标签贴在Ziploc塑料袋上进行包装。保留一套S标签,以便在实验室中使用。从支点移动应用程序的下拉菜单中选择线虫场采样,然后按 plus 在项目中开始新记录。
拍摄基材的照片。点击C标签字段,然后选择扫描。使用移动设备摄像头扫描收集袋上的条形码,然后点按完成。
点击基板字段并选择基板类型。使用非接触式温度计测量基板的表面温度,并在基板温度场中记录该值。还要测量和记录环境温度和湿度。
通过点击屏幕左上角的保存来保存并在支点中录制。通过将收集袋倒置为手套来收集一汤匙没有棍子或其他硬块的基材,然后密封袋子。对于每个 Ziploc 袋子,请注意袋子上的 C 标签,并将匹配的 C 标签贴在标有 OP50 细菌的 10 厘米板的盖子上。
使用干净的塑料勺将一汤匙样品从每个收集袋转移到C板中。在"支点"应用程序上,从应用程序菜单中选择线虫隔离。然后通过点击右下角的加号图标来创建新的隔离记录。
点击选择按钮以查找与样品关联的C标签。点击搜索图标。然后点击扫描图标以扫描C标签QR码。
用解剖显微镜在C板上寻找线虫。点击样品场上的蠕虫以记录样品上线虫的存在。如果没有线虫存在,请对C板进行parafilm并将其丢弃在生物危害箱中。
如果存在线虫,从C板中分离出最多五个线虫,并将每个线虫转移到自己的S板。接下来,点击"S 标记的板"字段以输入用于此隔离的 S 板。点击右下角的加号。
点击S-Label,然后单击扫描以打开设备相机,然后扫描S-plate上的S-Label QR码。一旦隔离记录正确添加了所有信息,点击右上角的保存按钮,然后用分离的线虫对S板进行parafilm,并将它们放在指定用于容纳带有线虫的S板的区域。登录支点网站,选择线虫隔离应用。
单击导出程序以下载包含线虫隔离s_labeled_plates的 zip 文件。csv 文件。导航到野生分离基因分型模板谷歌工作表并复制谷歌工作表。
将从线虫隔离复制的S标签放在s_labeled_plates。csv 列到基因分型表中。隔离后48小时检查S板上是否有增殖动物。
如果S板有增殖动物,请在基因分型表的增殖48列中输入一个,然后将S板移动到标有48小时增殖框一的框中。在隔离后168小时再次检查隔离后48小时未增殖的S板。如果S板现在正在增殖,请在基因分型表上的增殖168列中输入一个,然后将S板移动到标有168小时增殖盒一的盒子中。
在Google表格中过滤基因型,使其仅将S标签包含在一个要裂解的增殖框中,然后选择通过裂解节点的S-Label列。为每个要裂解的增殖箱打印裂解工作表。准备12个孔条管用于裂解样品。
打开一个条形管的盖子,并用重复的移液器向每个盖子加入八微升的裂解缓冲液。从源板中选取三到五只动物到裂解工作表上指示的盖子位置。重复多达八个条形管,并将条形管放入零下80摄氏度的冰箱中。
取出成套的条形管,并在热循环仪中运行裂解程序。然后将裂解物储存在零下80摄氏度长达一周。从零下80摄氏度的冰箱中取出条形管,并在冰上解冻裂解材料。
当裂解材料解冻时,在冰上的单独管中制备ITS2和SSU预混液。使用低容量多通道移液管将两微升裂解物加入PCR板中的适当孔中。使用适当的热循环仪程序运行PCR,并在基因分型表中记录哪些S标签产生ITS2或SSU PCR产物。
对于每个 ITS2 阳性样品,使用剩余的 ITS2 PCR 产物进行 Sanger 测序,并从测序平台获取每个 S-Label 的 seq 输出文件。在 Web 浏览器中导航到 NBCI BLAST 网站以开始 BLAST 搜索。对于 BLAST 到 Caenorhabditis 物种的 S 板序列,请在物种 ID 列中输入顶部 BLAST 命中的完整属和物种名称。
按照Caenorhabditis命名惯例,使用唯一名称命名菌株,并在菌株名称列中输入菌株名称。要处理数据,请导航到支点网站并从支点数据库导出原始项目数据。打开一个新的 R 脚本,并按照 easyfulcrum 小插图中的说明处理集合数据。
在NBCI BLAST中,S-Label S-05554的结果表明,最受打击的是Caenorhabditis briggsae。此外,一些分离的线虫需要额外的努力来进行基因分型。例如,在第一次裂解尝试后,大约2%的分离物无法用SSU PCR引物组扩增,必须依靠以确保裂解材料适合使用ITS2引物组扩增。
按照这一程序,研究人员可以探索与野生线虫分离物相关的生态和环境数据,以确定最有可能藏匿特定线虫物种的位置和基质特征。
该协议概述了在自然环境中对秀丽隐杆线虫进行大规模调查的方法。它强调高效的数据收集和组织,以促进生态和分子分析。
Scalable ecological survey methods for Caenorhabditis nematodes enable robust discovery biology by linking genotype, phenotype, and environmental context. Integrating mobile data capture, cloud databases, and standardized analytics supports high-throughput, reproducible collection of wild isolates for functional genomics and comparative studies. This capability strengthens early discovery pipelines by expanding access to genetically diverse, ecologically relevant model systems.
This method bridges field ecology and laboratory genomics, supporting workflows from early discovery through preclinical model development.