改善肾去神经支配缓解血管紧张素II.诱导的高血压

在这里，我们提出了由血管紧张素II输注诱导的高血压小鼠肾交感神经去神经支配（RDN）的方案。该程序可重复，方便，并允许研究RDN对高血压和心脏肥大的调节机制。

肾交感神经去神经支配是高血压的潜在治疗方法，已被许多临床试验证明。该技术去神经支配自由流动的肾神经，而不会造成肾动脉损伤。此外，它是一个简单、关键、可重复和标准化的模型。

演示该程序的是我实验室的实验室助理Ming Wang。首先用70%乙醇对手术台进行消毒，然后将加热垫温度调节到37摄氏度。手术前，对所有手术器械进行消毒，包括显微手术剪刀、细直钳、细弯钳、止血钳、无菌纱布和121摄氏度的称量纸30分钟。

麻醉14周大的雄性C57BKL / 6小鼠后，用剃须刀去除背部的毛发，然后在眼睛上涂抹兽医软膏以防止干燥。将鼠标放在背部位置的手术台上。用聚维酮碘擦拭剃光区域，然后用 70% 乙醇擦拭三片。

使用无菌手术刀刀片，在前腿肩胛骨上方垂直于耳朵后面的尾巴做一个一厘米的切口。接下来，使用无菌止血器在皮肤下建立皮下隧道，并为泵创建一个口袋。轻轻地将装满血管紧张素II的渗透泵插入口袋，确保有足够的自由空间缝合伤口，而不会拉伸皮肤。

用中断的6-0 Vicryl缝合线缝合肌肉，并用中断的4-0尼龙缝合线闭合皮肤。然后用聚维酮碘擦拭伤口部位。将所有手术器械放入灭菌器中10秒钟，并在手术之间更换无菌手套。

监视鼠标，直到它完全恢复。在第一周内每天至少两次密切监测和观察伤口愈合情况，随后每天一次，包括发红、肿胀和感染。如果小鼠在血管紧张素II输注期间死亡，请立即进行解剖。

在基线和血管紧张素II输注后每周测量血压，在有意识的小鼠中用尾袖体积描记法。血管紧张素II输注一周后，选择血压升高的小鼠并记录其体重。选择体重最低为24克的动物进行肾去神经支配手术。

接下来，用剃须刀去除麻醉小鼠腹部的毛发，然后将鼠标放在手术台上。保持腹部向上并用胶带固定四肢。用聚维酮碘消毒腹部皮肤，然后用70%乙醇擦拭三片。

做一个两厘米的腹侧中线腹部切口后，用浸泡在37摄氏度盐水中的纱布拉回肠道，露出左肾动脉。小心但直截了当地，使用弯曲的镊子将脂肪从肾动脉上解剖开。使用无菌锋利的剪刀，将称重纸切成与肾动脉大小相同的矩形。

一次切几张称量纸以保持形状相同。将称量纸浸入 10% 苯酚乙醇溶液中至少 30 秒。覆盖左肾动脉表面，用称重纸包裹血管两分钟。

使用纱布保护周围组织，避免称量纸接触肾脏和肠道。对右肾动脉重复相同的程序。手术后，将肌肉重新定位到初始位置，并以中断的缝合模式用6-0 Vicryl缝合线关闭腹膜，然后用中断的4-0尼龙缝合线闭合皮肤。

监测所有小鼠，直到完全恢复。在血管紧张素II输注后一周观察到收缩压显着升高。肾交感神经去神经支配（RDN）血管紧张素II组在RDN手术后21天与假血管紧张素II组相比，收缩压显着降低。

在RDN手术后两周，假手术组和RDN组之间没有观察到显着差异。苏木精和肾交感神经和肾动脉的伊红染色见此处。4组未见肾动脉内膜增厚。

与假细胞组、碎片化和裂缝核相比，两个RDN组均观察到神经内组织的消化和肿胀。神经束免疫组织化学显示，RDN组和RDN血管紧张素II.组酪氨酸羟化酶表达均低于假神经束组。与神经支配肾相比，正常血压和高血压组去神经支配肾中去神经支配肾的肾皮质去甲肾上腺素含量显着降低。

马森染色显示，各组腹主动脉内膜介质无显著增加。此处显示了不同组中心肌的代表性图像。RDN治疗通过减少间质纤维化和心肌细胞大小来改善血管紧张素II.输注诱导的心脏肥大。

在手术过程中，不要将苯酚接触除肾动脉以外的周围组织，因为它可能导致肠梗阻、腹部感染和肾动脉狭窄。该方法可以建立标准化的RDN模型，以帮助研究控制高血压的机制。该技术的未来应用有助于扩大强调高血压和心脏肥大过程的途径。