Name: 用于组织工程应用的尺寸控制和无乳化壳聚糖 -染料木酚微凝胶的制备 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 26 s
Description: 学习无乳化法制备壳聚糖-染料木酚微凝胶技术，用于组织工程和药物递送。该方法无需特殊设备，可精确控制尺寸，具有pH响应性溶胀和持续释放特性，适用于再生医学研究。

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本研究工作得到了美国国立卫生研究院下属的国家关节炎与肌肉骨骼和皮肤病研究所的支持，资助编号为 R03AR068087 和 R21AR071585，以及博伊彻基金会（#11219）对 MDK 的资助。CBE 得到了 NIH/NCATS 科罗拉多临床与转化科学奖（CTSA）资助号 TL1 TR001081 的支持。

所有动物实验程序均经科罗拉多大学丹佛分校机构动物护理和使用委员会批准。本研究采用6周龄雄性Sprague-Dawley大鼠。大鼠生长板损伤模型的建立参照先前发表的文献30。
1. 壳聚糖聚合物的制备
<ol>
	<li>从商业渠道获取纯化并经冷冻干燥的低分子量（LMW）壳聚糖（参见 材料表).</li>
	<li>加入495 mL双蒸水（ddH₂O）2将 O 和一个搅拌子加入 1 L 烧杯中。加入 5 g 壳聚糖（步骤 1.1），充分混合。 
	注意：壳聚糖在生理 pH 条件下的水溶液中仅微溶，因此在此步骤中壳聚糖不易溶解。</li>
	<li>向上述制备的壳聚糖溶液中加入5 mL冰醋酸。</li>
	<li>在50 °C水浴中，盖上表面皿，以300 rpm转速搅拌18小时。</li>
	<li>使用布氏烧瓶和漏斗，将壳聚糖溶液依次通过孔径逐渐减小的滤纸进行过滤：22 µm、8 µm 和 2.7 µm（参见 材料表).</li>
	<li>将过滤后的壳聚糖溶液加入纤维素透析管中（参见 材料表）并置于去离子水中透析2室温下孵育4天，期间更换ddH₂O2每天一次。 
	注意：使用超纯 ddH₂O2最后一次更换的水。</li>
	<li>将透析后的壳聚糖溶液转移至烧杯中，用1 M NaOH调节pH至8.0。</li>
	<li>将壳聚糖分装至离心管中，于4000 x g 室温下孵育5分钟。</li>
	<li>将上清液倒入废液处理系统，并用 ddH₂O 重新悬浮壳聚糖2O，重复2次。</li>
	<li>冷冻后冻干壳聚糖沉淀。
	<ol>
		<li>每天取出冻干产品并记录质量。 
		&#8203;注意：当冻干产物的质量不再发生变化时，表明产物已完全干燥，可于 -20 °C 保存至使用。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 壳聚糖水凝胶的制备
<ol>
	<li>向一个10 mL鲁尔锁型注射器中加入2 mL 6%乙酸和120 mg纯化壳聚糖（步骤1），制成6% w/v壳聚糖溶液。</li>
	<li>使用雌-雌鲁尔锁接头将一个鲁尔锁注射器连接到另一个相同的注射器上，来回混合溶液30秒，或直至壳聚糖在乙酸中完全溶解。</li>
	<li>交联前，可根据需要向壳聚糖溶液中添加任何治疗剂或生物活性物质。在本研究中，添加了200 ng的SDF-1a和TGF-b3（参见 材料表) 被加入到微凝胶中。 
	注意：SDF-1a 和 TGF-b3 是与生长板组织再生相关的生物活性因子。SDF-1a 可促进间充质干细胞向缺损部位迁移，而 TGF-b3 作为软骨诱导因子，可诱导这些干细胞向软骨细胞谱系分化。31.&#160; 
	注意：在注射器之间再次混合壳聚糖，以充分混入治疗剂。</li>
	<li>制备100 mM的京尼平交联剂储备液（参见 材料表) 于100%乙醇中。</li>
	<li>向含有壳聚糖的注射器中加入100 µL制备好的京尼平溶液（步骤2.4），再次在注射器之间来回混合30秒。</li>
	<li>将混合物从注射器中推注至35 mm培养皿上，用石蜡膜覆盖，在37 °C湿润环境中孵育过夜。 
	注意：溶液将变为深蓝色，表明壳聚糖与京尼平之间已发生交联反应，从而形成壳聚糖微凝胶。</li>
	<li>按照以下步骤过滤制备好的壳聚糖微凝胶。
	<ol>
		<li>用刮勺轻轻将水凝胶破碎成较小的碎片。 
		注意：组织块应足够小，以便转移至10 mL注射器的后端，直径约为1-2 cm。</li>
		<li>将所需孔径大小的滤器放入一支洁净的10 mL注射器后端。 
		注：微凝胶的典型尺寸范围为50-200 µm。</li>
		<li>将破碎的胶块转移至装有滤器的注射器中，加入6 mL ddH₂O2O. 
		&#8203;注意：壳聚糖凝胶在水相介质中会显著溶胀，因此凝胶体积将发生明显变化。</li>
		<li>连接注射器 通过 一个鲁尔锁接头连接至另一个洁净的10 mL注射器。</li>
		<li>用带有滤膜的注射器将凝胶与水的混合物推出，以制备指定最大直径的微凝胶。
		<ol>
			<li>第一次过滤后，打开装有滤膜的注射器后端，将混合物挤回该注射器中。</li>
			<li>更换注射器后端，再次将混合物用力通过滤器。</li>
			<li>重复过滤5-6次，或直至滤器阻力明显减小。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>冲洗并纯化过滤后的微凝胶。
	<ol>
		<li>将过滤后的凝胶混合物转移至一个50 mL锥形管中，用ddH₂O定容至20 mL2O，然后涡旋混合物以确保均匀分散。</li>
		<li>将微凝胶在 100 x g 室温下静置5分钟，倾出上层水相。</li>
		<li>将微凝胶重悬于10 mL 70%乙醇中，涡旋混匀，并置于紫外光下照射1小时以灭菌。</li>
		<li>将微凝胶在 1,000 x g 室温孵育5分钟，弃去乙醇，用ddH₂O洗涤3次2O.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 微凝胶的制备用于 体外 或 体内 应用
注意：本研究在大鼠模型中研究了生长板损伤中的软骨再生。详细信息请参见参考文献31。
<ol>
	<li>用等体积的ddH2O重悬微凝胶沉淀。&#160;微凝胶可在4 °C的ddH2O中悬浮保存长达1个月。若使用了生物活性物质，则微凝胶必须立即使用。</li>
	<li>参照先前发表的研究方法30在动物体内建立损伤部位。</li>
	<li>用生理盐水冲洗损伤部位，随后保持动物未处理状态（用于对照研究），或仅注射壳聚糖微凝胶，或注射负载生物活性物质的微凝胶（步骤3.2）。</li>
	<li>缝合动物伤口，并给予术后镇痛药物30。</li>
	<li>术后第7天或第28天，通过过量CO2处死大鼠，切除肢体并进行组织学分析，以评估损伤部位的组织修复情况31。</li>
</ol>

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<li>Hogg, R., Turek, M. L., Kaya, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+particle+shape+in+size+analysis+and+the+evaluation+of+comminution+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Particulate+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">The role of particle shape in size analysis and the evaluation of comminution processes.</a> Particulate Science and Technology. 22 (4), 355-366 (2004).</li>
<li>Raval, N., Maheshwari, R., Kalyane, D., Youngren-Ortiz, S. R., Chougule, M. B., Tekade, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+physicochemical+characterization+of+nanoparticles+in+pharmaceutical+product+development%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Fundamentals+of+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Importance of physicochemical characterization of nanoparticles in pharmaceutical product development.</a> Basic Fundamentals of Drug Delivery. , 369-400 (2019).</li>
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作者无任何利益冲突需要披露。

近年来，微凝胶因其在药物递送或细胞封装等多种用途上的高度适用性而受到广泛研究9。在组织工程领域，微尺度生物材料结构的制备简便性具有重要意义，因为它使研究人员能够在特定的尺寸和时间尺度上开发基于水凝胶的策略。然而，大多数制备壳聚糖微凝胶的方法需要昂贵的设备和试剂、乳液体系或具有细胞毒性的溶剂冲洗步骤，从而限制了其向临床应用的转化15,16,17,18,19,20。这些微凝胶在制备上具有显著的便利性，无需使用乳液技术或溶剂冲洗。此外，这些微凝胶保留了组织工程结构所需的理想特性，如pH依赖性溶胀与药物负载能力、可调控的降解行为以及治疗药物的持续释放。
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生长板，也称为骨骺板（physis），是位于长骨末端的软骨结构，负责儿童时期的骨骼生长。如果生长板受到损伤，可能会形成一种称为&#34;骨性桥接&#34;的修复组织，从而干扰正常生长，导致生长缺陷或成角畸形。流行病学数据显示，所有儿童骨骼损伤中有15%–30%与生长板相关。在这些损伤中，高达30%会发生骨性桥接的形成，使得生长板损伤及其相关治疗成为一个重要的临床问题1,2,3,4。当出现骨性桥接时，最常见的治疗方式是切除骨性桥接组织，并植入间隔材料，例如硅胶或脂肪组织5。然而，接受骨性桥接切除手术的患者往往预后不佳，因为目前尚无任何治疗方法能够完全修复受损的生长板6,7,8。鉴于这些局限性，迫切需要开发有效的治疗策略，以预防骨性桥接的形成，并促进健康骨骺软骨组织的再生。
水凝胶微粒（或称微凝胶）近年来因其可作为可注射支架并实现治疗药物的持续释放而受到关注9。由于其高度可调性和良好的生物相容性，微凝胶也非常适合用于生物活性因子或细胞的包封。微凝胶可由多种材料制成，包括聚乙二醇（PEG）等合成聚合物，以及海藻酸盐或壳聚糖等天然聚合物10,11,12。&#160;研究表明，壳聚糖在组织工程中具有多种有益作用，例如能够破坏革兰氏阴性菌的外膜，从而具备固有的抗菌活性13,14。此外，壳聚糖成本较低、可与细胞相互作用，并且因其分子结构中含有氨基而易于进行化学修饰。基于壳聚糖的微凝胶为药物递送和材料信号传导提供了一种有前景的生物材料策略，既可促进组织再生，又能防止细菌感染。然而，目前壳聚糖微凝胶的制备通常采用多种技术，这些方法往往需要特殊设备、乳液工艺或具有细胞毒性的溶剂冲洗步骤。例如，一些研究采用基于乳液的方法制备壳聚糖微凝胶，但这些方案需要使用溶剂冲洗和具有细胞毒性的交联剂，可能限制其在临床环境中的转化应用15,16。其他研究则采用微流控或电喷雾技术制备壳聚糖微凝胶，但这些方法需要专用设备、复杂的前期准备和专业培训17,18。壳聚糖微凝胶也常通过将交联剂逐滴加入壳聚糖溶液的方式制备；然而，该方法高度依赖于溶液黏度、聚合物浓度和滴加流速，难以精确控制微凝胶的粒径及其分散性19,20。相比之下，本文所述的微凝胶制备方法无需特殊设备或溶剂冲洗，因此几乎可在任何实验室或条件下进行制备。因此，这类微凝胶是一种高度相关的生物材料，可作为快速、低成本且易于生产的药物递送载体，适用于多种应用场景。
通过调控微凝胶的组成和材料特性，研究人员能够精确控制细胞微环境，从而以材料依赖的方式引导细胞行为。微凝胶可单独使用，也可与整体性生物材料系统结合，赋予特定功能，例如生物活性因子的长效释放，或对内源性或外源性细胞进行精确的空间信号调控。生物材料与微凝胶已成为治疗生长板损伤的有前景的策略。目前已有大量研究致力于开发基于海藻酸盐和壳聚糖的生物材料用于生长板损伤的治疗21,22,23,24,25。由于生长板骨化和骨骼延长具有动态的时间特性，骨桥形成机制尚未完全阐明。&#160;因此，已建立多种动物模型，以更深入地阐明软骨内骨化和骨桥形成的机制，例如大鼠、兔和绵羊模型26,27,28。其中一种模型为大鼠生长板损伤模型，该模型通过在大鼠胫骨上制造钻孔缺损，可稳定且可重复地形成骨桥，并模拟人类生长板三个区域的损伤情况29,30。已有多种基于生物材料的治疗策略通过该模型进行了测试。此外，研究人员已开发出两种不同的壳聚糖微凝胶制备方法，可作为可注射的生物材料系统，实现治疗药物的持续释放10,31。这些微凝胶已在大鼠骨骺损伤模型中应用，在释放SDF-1a和TGF-b3时表现出更优的软骨再生效果31。本实验方案中所述技术即为上述壳聚糖微凝胶的制备方法，其可广泛应用于多种组织工程领域。例如，近期研究已利用温敏性或磁响应性壳聚糖微凝胶实现肿瘤药物的可控递送32,33。

<table><tbody><tr><td>乙酸</td><td>SigmaAldrich</td><td>AX0073</td><td></td></tr><tr><td>BD 鲁尔锁注射器</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-16E</td><td></td></tr><tr><td>B&amp;uuml;chner 漏斗</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB966F</td><td>直径 100 mm</td></tr><tr><td>壳聚糖（低分子量）</td><td>SigmaAldrich</td><td>448869</td><td>脱乙酰度 75-80%</td></tr><tr><td>透析膜管</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-670-5C</td><td>截留分子量 3500</td></tr><tr><td>乙醇</td><td>SigmaAldrich</td><td>493538</td><td></td></tr><tr><td>京尼平</td><td>SigmaAldrich</td><td>G4796</td><td></td></tr><tr><td>Heracell 150i 培养箱</td><td>ThermoFisher</td><td>50116047</td><td></td></tr><tr><td>封口膜（Parafilm）</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-374-12</td><td></td></tr><tr><td>重组人 SDF-1α</td><td>Peprotech</td><td>300-28A</td><td></td></tr><tr><td>重组人 TGF-β3</td><td>Peprotech</td><td>100-36E</td><td></td></tr><tr><td>Whatman 540 型滤纸</td><td>SigmaAldrich</td><td>Z241547</td><td>孔径 8 mm</td></tr><tr><td>Whatman 541 型滤纸</td><td>SigmaAldrich</td><td>WHA1541055</td><td>孔径 22 mm</td></tr><tr><td>Whatman 542 型滤纸</td><td>SigmaAldrich</td><td>WHA1542185</td><td>孔径 2.7 mm</td></tr><tr><td>金属网筛</td><td>McMaster-Carr</td><td>9317T86</td><td>100 目筛网</td></tr></tbody></table>

用于组织工程的尺寸可控且无乳液的壳聚糖-京尼平微凝胶的制备

Fabrication of Size-Controlled and Emulsion-Free Chitosan-Genipin Microgels for Tissue Engineering Applications

壳聚糖微凝胶因其广泛的应用前景、低成本以及低免疫原性，在组织工程领域备受关注。然而，传统的壳聚糖微凝胶通常采用乳液法制备，该方法需要使用有机溶剂冲洗，而有机溶剂具有毒性且对环境有害。本实验方案介绍了一种快速、无细胞毒性、非乳液法的壳聚糖-京尼平微凝胶制备方法，无需有机溶剂冲洗步骤。文中所述微凝胶可实现精确的尺寸控制，具有生物分子持续释放的特性，因此在组织工程、生物材料及再生医学领域具有高度相关性。壳聚糖通过京尼平交联形成水凝胶网络，随后经注射器滤器挤出以生成微凝胶。微凝胶可通过过滤获得不同粒径范围，且表现出pH依赖性溶胀行为，并能随时间发生酶促降解。这些微凝胶已在大鼠生长板损伤模型中得到应用，实验证明其可促进软骨组织修复，并在体内28天时实现完全降解。in vivo 由于其成本低、操作便捷，且使用细胞相容性材料易于制备，此类壳聚糖微凝胶为组织工程提供了一项令人振奋且独特的技术。

壳聚糖微凝胶的成功制备依赖于京尼平与壳聚糖之间的交联反应，特别是壳聚糖聚合物链上的氨基参与该反应。与其他微凝胶制备技术相比，该方法无需使用乳液或溶剂洗涤，且可在廉价设备条件下快速、简便地完成。微凝胶成功制备的一个显著标志是壳聚糖与京尼平混合后，溶液颜色由乳白色明显转变为深蓝色。京尼平与含氨基化合物（如壳聚糖或其他蛋白质）之间的交联反应在文献中已有充分表征34。简而言之，该交联机制被认为是壳聚糖的氨基对京尼平进行亲核攻击的过程，其中京尼平作为二醛，形成稳定的缩合产物35。这些短链状的稳定缩合京尼平分子在壳聚糖聚合物之间充当交联桥。交联反应导致溶液变为深蓝色，这可能是由于亲核攻击引发开环反应后，中间产物发生氧自由基诱导的聚合与脱氢反应所致36。
微凝胶经过滤并重悬于1:1的水稀释液后，可便捷地应用于多种生物材料领域。近期已有研究报道，采用这种无乳液法合成的壳聚糖微凝胶促进生长板损伤后的软骨再生。微凝胶按本文所述方法制备，可保持空载状态，或负载S...

本方案描述了一种基于壳聚糖-京尼平的非乳液法微凝胶制备方法。这些微凝胶的尺寸可精确调控，并具有pH依赖性溶胀特性以及可降解性 体内,&#160;并可负载治疗分子，以持续的方式随时间逐渐释放，使其在组织工程应用中具有高度相关性。

壳聚糖微凝胶因其广泛的应用前景、低成本和低免疫原性，在组织工程领域备受关注。然而，……

本方案可方便地制备不含毒性溶剂的壳聚糖微凝胶，适用于多种组织工程和药物递送应用。该技术无需特殊设备或培训，也无需使用有毒乳液技术或溶剂冲洗步骤，因此具有高度生物相容性，易于转化至临床环境。我们已将此技术作为生物材料策略应用于生长板损伤的治疗。然而，我们认为该技术在其他再生医学应用中也将具有重要价值。该技术可应用于其他需要可注射、可生物降解、具有持续药物释放潜力的生物材料支架系统的再生医学领域。首先，将乙酸和纯化的壳聚糖加入一个10毫升鲁尔锁型注射器中，配制6%（质量/体积）的壳聚糖溶液。使用一个雌-雌鲁尔锁扣接头，将两个鲁尔锁扣注射器连接起来，然后来回推动溶液，直至壳聚糖完全溶解在乙酸中。接着，向含有壳聚糖的注射器中加入100微升的京尼平溶液，并在两个注射器之间来回混合30秒。随后将混合物从注射器中推出，滴入一个35毫米的培养皿中。用石蜡膜覆盖培养皿，并在37摄氏度、湿润的环境中孵育过夜。使用刮刀将水凝胶破碎成较小的碎片，然后将所需孔径大小的滤网放入一支洁净的10毫升注射器后端。将破碎的凝胶碎片转移至装有滤网的注射器中，并加入6毫升双蒸水。通过鲁尔锁接头将该注射器连接至另一支洁净的10毫升注射器。通过带有滤膜的注射器挤出凝胶和水的混合物，以制备微凝胶。第一次过滤后，打开含有滤膜的注射器，将混合物重新加回该注射器中，再次通过滤膜挤出混合物。现在，将过滤后的凝胶混合物转移至一个50毫升的锥形管中，并加入重蒸水，定容至20毫升。涡旋振荡溶液，使其形成均匀的溶液。在室温下，以100 × g离心5分钟，收集微凝胶。离心后，移除上层水相，并将微凝胶重悬于10毫升70%乙醇中，随后涡旋混匀微凝胶，并置于紫外光下照射1小时以进行灭菌。接着，在室温下以1000 × g离心5分钟。弃去乙醇，并用双蒸水洗涤3次。将微凝胶沉淀物重悬于等体积的双蒸水中。随着pH值的升高，微凝胶的溶胀程度降低，表现为Feret直径的变化。此外，微凝胶颗粒的大小取决于所用滤膜的孔径。200目筛网产生较小的颗粒，而100目筛网则产生较大的颗粒。微凝胶存在于损伤部位可促进软骨再生。阿利新蓝-苏木精染色显示，在损伤组织处注射的微凝胶可防止早期骨性瘢痕形成，而负载生物活性因子SDF-1α和TGF-β3的微凝胶则可促进软骨形成。确保将金属网滤膜正确放入注射器中，以实现有效的过滤。重复过滤数次以确保微凝胶尺寸分布均匀，这一点也非常重要。这些微凝胶可应用于多种组织工程领域，适用于需要具备治疗药物持续释放潜力的生物材料支架基质的场景。

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Research

科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

用于组织工程应用的尺寸控制和无乳化壳聚糖 -染料木酚微凝胶的制备

目前干细胞治疗面临的主要障碍之一是确定将这些细胞递送至宿主组织的最有效方法。在此，我们描述了一种基于壳聚糖的递送方法，该方法操作简便且效率高，同时能够维持脂肪来源干细胞的多向分化潜能。...

构建用于递送负载干细胞的壳聚糖微球的胶原水凝胶

采用生物打印机基于可牺牲模具制备出具有特定图案的水凝胶。首先用第二种水凝胶填充泊洛沙姆模具，随后将其洗脱，形成可被第三种水凝胶填充的孔隙结构。该方法利用泊洛沙姆快速洗脱和良好可打印性的特点，实现由生物聚合物构建复杂结构。...

打印热响应性反向模具以制备用于三维细胞培养的图案化双组分水凝胶

我们提出一种简便的方法，用于制备一种可生物降解、基于明胶且具有磁热响应性的药物释放平台。该平台通过将超顺磁性氧化铁纳米颗粒和聚（N-异丙基丙烯酰胺-共-丙烯酰胺）引入由京尼平交联的球形明胶微网络中，并结合交变磁场应用系统而实现。...

响应交变磁场的杂化明胶微凝胶用于可控药物释放

一种由含海藻酸盐微粒的聚(N-异丙基丙烯酰胺)-接枝-硫酸软骨素（PNIPAAm-g-CS）组成的可注射组织工程支架被制备出来。其黏附强度、溶胀性能及 体外...

用于组织工程的含海藻酸盐微粒的热致凝胶化聚(N-异丙基丙烯酰胺)-接枝-硫酸软骨素复合材料的合成

游离溶液毛细管电泳是一种快速、廉价且稳健的分析方法，可实现对化学反应的实时定量监测。本文通过分析壳聚糖薄膜上共价接枝肽以改善细胞黏附的过程，展示了该方法在快速、便捷和精确分析方面的实用性。...

利用毛细管电泳实时监测肽在壳聚糖薄膜上的接枝反应

本方案描述了一种结合微加工技术与冷冻凝胶化技术制备弹性三维大孔微凝胶的方法。在载入细胞后，可形成三维微组织，且易于注射 在体内 以促进再生治疗，或组装成阵列用于 体外...

用于可注射再生治疗和高通量药物筛选的三维微组织

本文介绍了一种利用动态亚胺化学简便制备基于壳聚糖的可注射水凝胶的方法。同时提供了调节水凝胶机械强度的方法及其在三维细胞培养中的应用。...

壳聚糖基可注射水凝胶的制备及其在三维细胞培养中的应用

本文介绍了一种明胶甲基丙烯酰胺的3D生物打印方法。...

基于明胶甲基丙烯酰胺水凝胶生物墨水的3D生物打印方案

本文介绍了一种由交变粘性-惯性力驱动的温和3D打印技术，可用于构建水凝胶微载体。自制喷嘴具有灵活性，可方便地更换以适应不同材料和直径。可获得并收集直径为50-500...

3D打印 体外 通过交替黏性-惯性力喷射法制备水凝胶微载体

本研究介绍了一种简单、可调且低成本的微凝胶制备方法，该方法基于挤出破碎技术，可将微凝胶加工成可注射的颗粒状水凝胶，并进一步将这些颗粒状水凝胶用作生物医学应用中的挤出式打印墨水。...

将块状水凝胶破碎并加工成颗粒状水凝胶用于生物医学应用

本方案描述了一组用于合成微孔退火颗粒支架微凝胶构建单元的方法，该支架可用于多种再生医学应用。...

用于微孔退火颗粒支架的微凝胶构筑单元的微流控合成

学习无乳化法制备壳聚糖-染料木酚微凝胶技术，用于组织工程和药物递送。该方法无需特殊设备，可精确控制尺寸，具有pH响应性溶胀和持续释放特性，适用于再生医学研究。

用于组织工程的尺寸可控且无乳液的壳聚糖-京尼平微凝胶的制备

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