Name: 用解剖学特异性单细胞基因表达方法研究成瘾行为中抗奖励的驱动因素 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-04T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: 学习使用激光捕获显微切割和微流控RT-qPCR技术，在单细胞分辨率下分析神经元和胶质细胞的转录组，以研究神经炎症在成瘾行为中的作用机制。该方法为精神疾病治疗提供新思路。

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本研究工作由以下机构资助：美国国立卫生研究院心脏、肺和血液研究所（NIH HLB）授予JS和RV的U01 HL133360项目，美国国家药物滥用研究所（NIDA）授予JS和EVB的R21 DA036372项目，授予Jan Hoek以支持SJO'S的T32 AA-007463项目，以及美国国家酒精滥用与酒精中毒研究所：R01 AA018873项目。

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<li>O'Sullivan, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+glia+and+neuron+gene+expression+in+the+central+amygdala+in+opioid+withdrawal+suggests+inflammation+with+correlated+gut+dysbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Single-cell glia and neuron gene expression in the central amygdala in opioid withdrawal suggests inflammation with correlated gut dysbiosis.</a> Frontiers in Neuroscience. 13, 665(2019).</li>
<li>O'Sullivan, S. J., McIntosh-Clarke, D., Park, J., Vadigepalli, R., Schwaber, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+scale+neuronal+and+glial+gene+expression+and+putative+cell+phenotypes+and+networks+in+the+nucleus+tractus+solitarius+in+an+alcohol+withdrawal+time+series%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Systems+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Single cell scale neuronal and glial gene expression and putative cell phenotypes and networks in the nucleus tractus solitarius in an alcohol withdrawal time series.</a> Frontiers in Systems Neuroscience. 15, 739790(2021).</li>
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<li>O'Sullivan, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interoceptive+antireward+pathway+and+gut+dysbiosis+in+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Psychiatry%2C+Depression+%26+Anxiety%22%5BJournal%5D)">The interoceptive antireward pathway and gut dysbiosis in addiction.</a> Journal of Psychiatry, Depression & Anxiety. 7 (40), 1-5 (2021).</li>
<li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptional+analysis+reveals+novel+neuronal+phenotypes+and+interaction+networks+involved+in+the+central+circadian+clock%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptional analysis reveals novel neuronal phenotypes and interaction networks involved in the central circadian clock.</a> Frontiers in Neuroscience. 10, 481(2016).</li>
<li>Staehle, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diurnal+patterns+of+gene+expression+in+the+dorsal+vagal+complex+and+the+central+nucleus+of+the+amygdala+-+Non-rhythm-generating+brain+regions%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Diurnal patterns of gene expression in the dorsal vagal complex and the central nucleus of the amygdala - Non-rhythm-generating brain regions.</a> Frontiers in Neuroscience. 14, 375(2020).</li>
<li>Réus, G. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+inflammation+and+microglial+activation+in+the+pathophysiology+of+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of inflammation and microglial activation in the pathophysiology of psychiatric disorders.</a> Neuroscience. 300, 141-154 (2015).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+astrocytes+in+major+neuropsychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemical+Research%22%5BJournal%5D)">Role of astrocytes in major neuropsychiatric disorders.</a> Neurochemical Research. 46 (10), 2715-2730 (2021).</li>
<li>Park, J., Ogunnaike, B., Schwaber, J., Vadigepalli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+functional+gene+regulatory+network+phenotypes+underlying+single+cell+transcriptional+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Biophysics+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Identifying functional gene regulatory network phenotypes underlying single cell transcriptional variability.</a> Progress in Biophysics and Molecular Biology. 117 (1), 87-98 (2015).</li>
<li>Lieber, C. S., DeCarli, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+model+of+alcohol+feeding+and+liver+injury+in+the+baboon%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Primatology%22%5BJournal%5D)">An experimental model of alcohol feeding and liver injury in the baboon.</a> Journal of Medical Primatology. 3 (3), 153-163 (1974).</li>
<li>Lieber, C. S., Decarli, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+chronic+ethanol+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Animal models of chronic ethanol toxicity.</a> Methods in Enzymology. 233, 585-594 (1994).</li>
<li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inputs+drive+cell+phenotype+variability%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Research%22%5BJournal%5D)">Inputs drive cell phenotype variability.</a> Genome Research. 24 (6), 930-941 (2014).</li>
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</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

酒精使用障碍仍是一种难以治疗的疾病。本研究团队从系统神经科学的视角出发，通过研究反奖赏过程来应对这一障碍。我们检测了酒精戒断时间序列中单个孤束核（NTS）神经元和小胶质细胞的基因表达变化16。选择孤束核是因为其在酒精戒断综合征所引起的自主神经功能紊乱中具有重要作用。我们结合激光显微切割（LCM）与单细胞微流控反转录定量PCR技术，能够在低成本条件下以较高的解剖和分子灵敏度及特异性，检测大量样本和基因（图1B-C）。单个细胞通过免疫组化染色进行识别和筛选，并利用分子表达对这些细胞亚表型分组进行了验证（图1D-E）。然而，部分富含GLP-1的神经元样本（TH-神经元）中度表达了Th基因（图4）。细胞表型的确定基于荧光成像的细胞筛选阶段，由于仅依据单个基因Th...

成瘾问题在发达国家仍日益严峻1,2。尽管科学和临床领域取得了重大进展，成瘾的发生率仍在持续上升，而已有治疗方法的疗效至多保持稳定3,4,5。然而，生物技术和科学研究方法的进步催生了新的研究手段和假说，有助于进一步探究物质依赖的病理生理机制6,7,8。事实上，近期的发展表明，新概念和治疗范式可能带来具有社会、经济和政治影响的重大突破9,10,11,12。
我们研究了酒精和阿片类药物依赖戒断过程中的反奖赏现象13,14,15,16。方法学在此范式中居于核心地位17,18。激光捕获显微切割技术（LCM）能够以高解剖特异性选取单个细胞。该技术功能对于神经炎症反奖赏假说至关重要，因为可在同一只动物的同一神经亚核内分别收集并分析胶质细胞和神经元13,14,15,16,19。随后，可利用高通量微流控反转录定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测所选细胞转录组的特定部分，从而获得高维数据集，用于计算分析以揭示功能网络的内在机制20,21。
在特定脑核团中的神经元和胶质细胞内检测转录组的一个子集，可生成在样本数量和检测基因两方面均具有稳健性，且兼具高灵敏度与特异性的数据集。这些工具非常适合用于精神疾病研究中的系统神经科学方法，因为在过去十年中，胶质细胞（主要是星形胶质细胞和小胶质细胞）已被证实对神经及精神疾病具有核心作用22,23。我们的方法能够同时检测胶质细胞和神经元中多个参与局部旁分泌信号传导的受体和配体的表达反应。事实上，可通过模糊逻辑等各类定量方法，从这些数据集中推断出信号通路的活动情况24。此外，识别神经元或胶质细胞中的细胞亚表型及其功能，有助于深入理解特定核团中脑细胞在单细胞水平上的组织方式、应答机制及失调过程。该功能系统的动态变化还可通过时间序列实验进行建模分析16。最后，可通过解剖学或药理学手段对动物模型进行干预，从而为这一系统性研究方法提供机制性条件。
代表性实验： 
以下，我们提供这些方法应用的一个示例。本研究探讨了酒精依赖及其后续戒断对大鼠孤束核（NTS）中神经元和小胶质细胞基因表达的影响16。大鼠队列包括：1）对照组，2）乙醇依赖组（EtOH），3）戒断8小时组（Wd），4）戒断32小时组（Wd），以及5）戒断176小时组（Wd）（图1A）。在快速断头后，将脑干与前脑分离并进行冷冻切片，切片经酪氨酸羟化酶阳性（TH +）神经元和小胶质细胞染色（图1B）。利用激光显微切割技术（LCM）分别收集TH+和TH-神经元及小胶质细胞。所有细胞均来自NTS，并以每10个细胞为一组作为样本进行分析。在RT-qPCR平台上运行了四个96 × 96微流控RT-qPCR动态阵列，检测65个基因（图1B-C）。数据采用-ΔΔCt法进行标准化，并使用R软件进行分析，同时通过分子标志物验证单细胞的选择（图1D-E）。技术重复性进一步通过同一批次内及不同批次间的重复实验得到验证（图2 和 图3）。TH+与TH-神经元呈现出不同的亚表型，具有相似的炎症相关基因簇，但在γ-氨基丁酸（GABA）受体（R）基因簇上存在差异（图4 和 图5）。在戒断32小时时，炎症基因簇表达升高的亚表型比例显著增加，而在长期酒精戒断期（176 h Wd）GABA受体（GABAR）的表达仍维持在较低水平。该研究支持酒精和阿片类药物依赖的“反奖赏”假说，即戒断期间来自内脏的内感受反馈可导致内脏-情绪相关神经核团（如NTS和杏仁核）的功能失调，从而引发更严重的自主神经和情绪后遗症，进一步促进物质依赖的形成（图6）。

<table><tbody><tr><td>20X DNA结合染料</td><td>Fluidigm</td><td>100-7609</td><td>NA</td></tr><tr><td>2x GE 检测上样试剂</td><td>Fluidigm</td><td>85000802-R</td><td>NA</td></tr><tr><td>96.96 动态阵列 IFC 基因表达芯片（文中简称 qPCR 芯片）</td><td>Fluidigm</td><td>BMK-M-96.96</td><td>NA</td></tr><tr><td>抗Cd11&amp;beta; 抗体</td><td>Genway Biotech</td><td>CCEC48</td><td>小胶质细胞染色</td></tr><tr><td>抗 NeuN 抗体，克隆 A60</td><td>EMD Millipore</td><td>MAB377</td><td>神经元染色</td></tr><tr><td>抗酪氨酸羟化酶抗体</td><td>abcam</td><td>ab112</td><td>TH+ 神经元染色</td></tr><tr><td>ArcturusXT 激光显微切割系统</td><td>Arcturus</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Biomark HD</td><td>Fluidigm</td><td>NA</td><td>实时定量 PCR 平台</td></tr><tr><td>牛血清抗原</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B4287</td><td></td></tr><tr><td>CapSure Macro LCM 帽盖</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>&amp;nbsp;LCM0211</td><td>NA</td></tr><tr><td>CellDirect 一步法 qRT-PCR 试剂盒</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>11753500</td><td>裂解缓冲液溶液成分</td></tr><tr><td>细胞直接重悬 &amp;和裂解缓冲液试剂盒</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>11739010</td><td>Invitrogen</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>62248</td><td>细胞核染色</td></tr><tr><td>DNA悬浮缓冲液</td><td>TEKnova</td><td>T0221</td><td></td></tr><tr><td>驴抗兔IgG（H+L）ReadyProbe二抗，驴抗兔IgG（H+L）ReadyProbe二抗，Alexa Fluor 488</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>R37118</td><td>二抗</td></tr><tr><td>外切核酸酶 I</td><td>New England BioLabs, Inc.</td><td>M0293S</td><td>NA</td></tr><tr><td>ExtracSure 样本提取装置</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>LCM0208</td><td>NA</td></tr><tr><td>Fisherbrand™ Superfrost Plus 显微镜载玻片</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>22-037-246</td><td>普通载玻片</td></tr><tr><td>GeneAmp 超薄壁反应管</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>N8010611</td><td></td></tr><tr><td>山羊抗小鼠 IgG（H+L），Superclona 重组二抗，Alexa Fluor 555</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A28180</td><td>二抗</td></tr><tr><td>IFC 控制器</td><td>Fluidigm</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>RNaseOut</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>10777019</td><td></td></tr><tr><td>SsoFast EvaGreen Supermix with Low Rox</td><td>Bio-Rad</td><td>PN 172-5211</td><td>NA</td></tr><tr><td>SuperScript VILO cDNA合成试剂盒</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>11754250</td><td>包含 VILO 和 SuperScript</td></tr><tr><td>T4基因32蛋白</td><td>New Englnad BioLabs, Inc.</td><td>M0300S</td><td>NA</td></tr><tr><td>TaqMan PreAmp Master Mix</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>4391128</td><td>NA</td></tr><tr><td>TE缓冲液</td><td>TEKnova</td><td>T0225</td><td>NA</td></tr><tr><td>TempPlate 半裙边 96 孔 PCR 板，0.2 mL</td><td>USA Scientific</td><td>1402-9700</td><td>NA</td></tr></tbody></table>

利用解剖学特异性单细胞基因表达方法研究成瘾行为中反奖赏驱动因素

Investigating Drivers of Antireward in Addiction Behavior with Anatomically Specific Single-Cell Gene Expression Methods

成瘾行为发生率的上升促使心理健康研究人员和临床医生共同致力于理解反奖赏机制与康复过程。这种从奖赏机制向反奖赏机制的转变，需要全新的视角、范式和假设，同时扩展用于研究成瘾的方法。在此，我们提供一个范例：采用系统生物学方法研究反奖赏机制，该方法结合了激光捕获显微切割技术（LCM）和高通量微流控反转录定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）。通过该方法测量了基因表达网络的动态变化，并鉴定出在酒精和阿片类物质戒断过程中导致神经内脏功能失调及神经炎症的关键驱动因子。这一技术组合可在单细胞分辨率下实现解剖学和表型特异性分析，同时具备高通量灵敏度和特异性基因表达检测能力，从而产生可用于提出新假说的数据集以及揭示潜在机制的可能性，为获得新的科学认知和开发创新治疗方法提供契机。

在激光显微切割（LCM）操作过程中，通过肉眼观察对单细胞的采集进行验证。细胞核在质控（QC）工作站进行评估。可通过特定细胞类型标记的荧光基团发射信号及其整体形态来确定细胞类型。若在帽膜上采集到了非目标细胞，可在质控工作站使用紫外（UV）激光破坏其遗传物质。此外，还需通过分子分析进行进一步验证。在此代表性示例16中，除小胶质细胞外，还选择了两种类型的神经元：酪氨酸羟化酶（Th）阳性（+）和Th阴性（-）神经元。图1D显示，目标为神经元的样本中神经元标志物NeuN的表达水平显著升高，具有统计学意义。同时，小胶质细胞样本中微胶质细胞标志物CD34和Cx3cr1的表达也显著升高，表明样本筛选具有高度准确性。此外，与Th-神经元样本和小胶质细胞样本相比，Th+神经元样本中Th的表达显著升高；而Th-神经元样本中GCG（编码前胰高血糖素的基因）的表达显著升高，提示这些Th-神经元样本富集了以GLP-1作为神经递质的神经元（<strong class="x...

激光捕获显微切割与微流控反转录定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）相结合，可在单个神经元和胶质细胞中实现转录组检测的解剖学与生物技术特异性。将创新方法与系统生物学策略应用于精神疾病研究，可能推动对疾病机制的理解与治疗手段的发展，例如成瘾中的神经炎症性奖赏缺失假说。

成瘾行为发生率的上升促使心理健康研究人员和临床医生共同致力于理解反奖赏机制与康复过程。这一转变……

该方案具有高灵敏度，能够在单细胞分辨率下高通量捕获基因表达谱。该技术在单细胞分辨率下同时提供解剖学空间信息和分子特异性。在获取脑组织、筛选单细胞并制备mRNA后，将对照管线液体注入qPCR芯片以进行预启动。将qPCR芯片插入微流控混合装置中。选择引物脚本并运行程序。程序完成后，取出已预处理的qPCR芯片，用移液器将PCR样本板中六微升（6 µL）反应液加入到qPCR芯片中对应的样本孔内。现在，将 PCR 检测板中六微升反应液移液至预装的 qPCR 芯片中对应的检测孔内。然后将芯片插入微流控混合装置中。选择“Load Mix”程序并运行。 打开微流控RT-qPCR平台并预热光源。从微流控混合装置上取下qPCR芯片，并撕去芯片底部的保护贴纸。打开微流控RT-qPCR平台，将qPCR芯片装入平台中。通过点击“启动新运行”来启动数据采集软件。核对芯片条形码和芯片类型，然后点击下一步。选择芯片运行文件，并浏览数据采集存储的文件位置。然后点击“应用类型”并选择基因表达。对于被动参照，选择 ROX，探针类型选择单探针，探针化学类型选择 EVAGreen。单击以选择热循环程序，并选择 Biomark HD GE:Fast 96x96 PCR+Melt v2.pcl 文件。下载数据分析软件。启动软件以分析微流控 RT-qPCR 实验。单击芯片运行，然后打开实验人员创建的 ChipRun.bml 文件。将弹出一个窗口，显示实验详细信息，包括被动参比、探针和PCR热循环程序。在“Chip Explorer”选项卡下，单击“Sample Plate Setup”并创建一个新的样品板模板。根据实验设计，将样品标签复制并粘贴到软件电子表格中。输入标准样品的样品名称和所用的 RNA 浓度。现在，通过点击任务菜单中的“map”并选择 SBS96-Left.dsp 来配置样品布局。接着，选择“Detail Views”以在文件中更新这些更改，然后点击“Analyze”。选择检测板设置并创建新的分析板。选择合适的容器类型和规格。根据实验设计粘贴分析名称，然后点击分析。在分析设置窗格中，单击用户并设置拟合方式为自动。现在，手动检查96×96芯片中的每个反应。通过观察扩增曲线和熔解曲线，判断每个反应是否符合预期的qPCR模式。如果扩增曲线或熔解曲线与预期结果不符，则判定该反应失败。质量控制完成后，依次选择文件、点击导出，并将数据集保存为 csv 文件。由于导出的 csv 文件包含通过/失败矩阵以及原始 CT 值矩阵，因此请使用通过/失败矩阵将数据集中所有失败的单元格替换为 NA。下载最新版本的开源 R 软件，然后下载 R Studio 应用程序。对于中位数中心化，使用 R 软件计算单个样本所有 CT 值的中位数 CT 值，然后从该中位数中减去所有单个 CT 值，以获得负 delta CT 值。对于看家基因标准化，计算每个样本看家基因的平均表达量，并用该值减去单个 CT 值。为生成负 delta delta CT 值，在 R 软件中运行相应代码。将标准化后的数据集上传至 R 中，使用 scale 函数分析数据，生成标准化后的数据，然后利用 R 的热图函数或独立软件生成热图。为使数据集适用于其他功能分析，需计算每个基因之间的皮尔逊相关系数，随后应用 melt 函数进行数据重塑。将处理后的数据导出并上传至基因相关性网络分析软件中。神经元表现出NeuN表达升高，小胶质细胞样本则显著表达小胶质细胞标志物Cd34和Cx3xr1。Th+神经元样本中Th的表达水平显著高于Th-神经元和小胶质细胞样本。Th-神经元显著表达Gcg，提示Th-神经元样本富集了以Glp1作为神经递质的神经元。线性判别分析显示，这三种细胞类型在全部65个基因上的基因表达谱存在差异。通过酒精戒断时间序列，采用热图展示了Glp1富集神经元样本的细胞亚表型。亚表型A高表达炎症基因簇1，在戒断8小时时间点其比例增加，并在戒断32小时达到峰值。炎症亚表型在撤除176小时后恢复至对照水平。亚表型B高度表达GABA受体基因簇2，在撤除176小时条件下，该基因簇的整体表达受到抑制。将各个样本的基因表达数据合并取平均值，以便在整个时间序列中可视化基因簇的表达情况及其基因转录本的蛋白质定位。该技术可应用于任何生物系统或组织，以研究细胞对疾病或扰动的响应，即在单细胞分辨率下解析与组织空间结构和解剖架构相关的分子响应。

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科研

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神经科学

用解剖学特异性单细胞基因表达方法研究成瘾行为中抗奖励的驱动因素

多巴胺在中脑核团中受到独特调控，这些核团含有多巴胺神经元的胞体和树突。本文介绍一种解剖与样本处理方法，旨在最大化对啮齿类动物黑质（SN）和腹侧被盖区（VTA）中脑核团内多巴胺调控研究的结果质量，从而提升结论的可靠性与科学洞察力。...

黑质与腹侧被盖区多巴胺调节的全面分析

本文介绍了如何将病毒载体微量注射到小鼠脑内，随后在条件性位置偏爱范式中进行测试，该范式包括获得、消退和复燃三个阶段。...

立体定位微量注射表达Cre重组酶的病毒载体以研究靶基因在可卡因条件性位置偏爱中的作用

本文描述了一种用于分析啮齿类动物在特定行为范式后脑内特定核团转录程序的综合性分析方案。本文以小鼠急性可卡因暴露后伏隔核（NAc）中基因表达谱的变化为例，展示了利用微流控qPCR阵列进行基因表达谱分析的方法。...

行为经验后脑组织样本转录动态的综合分析

本文演示了使用激光捕获显微切割技术，通过直接或间接免疫组织化学方法分离单个多巴胺能神经元或腹侧被盖区。讨论了使用红外激光从玻璃载玻片上分离组织，以及结合红外和紫外激光从膜载玻片上分离组织的参数。...

激光捕获显微切割——分离单个多巴胺能神经元及完整腹侧被盖区的示范操作

啮齿类动物是研究行为和复杂精神疾病分子基础的合适模型。通过在清醒啮齿类动物中进行脑部微量注射，可用于阐明疾病的神经生物学基础。本文介绍了一种高效且可定制的脑部微量注射方法，以及用于量化动机的工具性条件行为范式。...

啮齿类动物脑部微量注射研究动机行为的分子基础

本文介绍一种荧光激活细胞分选（FACS）方案，用于研究来自新鲜和冷冻脑组织中表达 Fos 的神经元群体的分子改变。使用冷冻组织可实现跨多个实验批次对多个脑区进行 FACS...

流式荧光细胞分选（FACS）及对新鲜与冻存大鼠脑组织中Fos表达神经元的基因表达分析

我们描述了一种利用果蝇（Drosophila...

一种利用简易方法测量奖赏寻求行为变化的方式 黑腹果蝇

本文详细介绍了利用碳纤维电极和酶法生物传感器技术进行固定电位安培记录，以在雌性仓鼠自然奖赏行为期间高时间分辨率地测量多巴胺和谷氨酸的释放。...

测量雌性叙利亚仓鼠在自然奖赏行为期间细胞外神经递质的体内变化

在伏隔核中鉴定多巴胺 D1-α 受体对于阐明中枢神经系统疾病期间 D1 受体功能障碍至关重要。我们采用了一种新型的 RNA 原位 杂交检测方法，以可视化特定脑区中的单个 RNA...

通过一种创新的RNA 原位检测技术鉴定啮齿类动物伏隔核中的多巴胺D1-α受体

本方案介绍了如何使用激光显微切割技术，从杏仁核中央核中高精度、高解剖特异性地分离单个神经元、小胶质细胞和星形胶质细胞。此外，我们还阐述了如何利用微流控RT-qPCR技术检测这些细胞部分转录组的表达情况。...

结合激光捕获显微切割与微流控qPCR分析单细胞转录谱：一种研究阿片类药物依赖的系统生物学方法

学习使用激光捕获显微切割和微流控RT-qPCR技术，在单细胞分辨率下分析神经元和胶质细胞的转录组，以研究神经炎症在成瘾行为中的作用机制。该方法为精神疾病治疗提供新思路。

利用解剖学特异性单细胞基因表达方法研究成瘾行为中反奖赏驱动因素

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