利用急性淋巴细胞白血病患者来源的异种移植小鼠模型评估嵌合抗原受体T细胞相关毒性

本方案利用人源CAR-T细胞和肿瘤细胞，准确地展示了与CART19给药相关的毒性，从而重现了在临床中观察到的现象。该平台的主要优势在于，它提供了一个可转化且具有临床相关性的模型，其中使用了人源T细胞和肿瘤细胞。

该模型不仅能够高效评估与CART19相关的毒性反应，还能帮助我们更好地理解如何通过改进治疗策略来克服这些毒性。首先，每天两次监测接受CART19处理的小鼠，以评估其健康状况是否发生变化，例如运动无力、蜷缩体态和体重下降。一旦小鼠出现运动无力和体重减轻，即采集其外周血以分析肿瘤负荷。

并按照文中的描述进行血清分离以检测细胞因子。分离后，将血清置于微型离心管中，在 -80 摄氏度保存，并使用该血清通过多重检测法分析趋化因子和细胞因子。对于 MRI 成像，将 120 µL 钆与 880 µL 生理盐水混合，装入 1 mL 胰岛素注射器中。

将100微升制备好的溶液腹腔注射至每只小鼠体内。麻醉小鼠后，将其放置在适用于啮齿类动物的探头支架上，然后将小鼠的牙齿钩挂在咬杆上。

将小鼠头部拉入25毫米体积线圈中，并调整连接至异氟烷麻醉系统的鼻罩。拧紧咬合杆的旋钮，以在扫描期间保持小鼠位置固定。为进行呼吸监测，将呼吸监测设备的探头靠近膈肌放置，并用手术胶带固定。

保持呼吸频率在每分钟20至60次之间，以确保小鼠的状态稳定。将动物探头插入垂直孔径小型动物MRI系统的窄孔内，并调整动物头部至线圈中心位置。使用固定装置将设备锁定在直立位置，并将仪器连接至计算机。

接下来，打开 ParaVision 软件以设置扫描位置和扫描类型。在保持所有实验组一致的前提下，确定最佳的矢状面和轴向位置。为采集 T1 加权 MRI 数据，采用重复时间为 300 毫秒、回波时间为 9.5 毫秒、视野为 4.00 × 2.00 × 2.00 厘米、矩阵为 192 × 96 × 96 的 T1 加权多层面多回波序列。

对于T2加权MRI图像，采用多层面、多回波序列并使用类似参数。扫描完成后，将探头从磁孔中取出，并通过将小鼠牙齿脱离咬合杆的方式轻柔地取出小鼠。从软件中提取数据后，使用分析软件对高信号区域进行定量分析和三维容积重建。通过流式细胞术比较接受CART19治疗的小鼠与未治疗小鼠中CD19+肿瘤细胞群体的差异。

在经CART19细胞治疗的小鼠中观察到显著的体重下降。体重减轻被认为是细胞因子释放综合征（CRS）出现的症状，与CART细胞相关毒性有关。多重检测法揭示了NSG小鼠血清在给予CART19前后细胞因子和趋化因子的表达情况。

T2加权成像显示，在接受CART19治疗的小鼠中，神经炎症期间存在水肿及可能的炎性浸润证据。T1加权MRI则显示脑实质内出现对比增强，提示血管通透性增加。基于对应于血管通透性的T1高信号区域，对啮齿类动物大脑进行了三维重建，从而呈现脑内钆泄漏的体积。

必须牢记，在给予CART19后对小鼠进行每日体格监测并结合外周采血，是决定是否进一步进行MRI检查以全面评估脑部是否出现CRS或神经毒性的最佳指标。该技术可广泛应用于其他CAR-T细胞疗法，使科研人员能够高效检测新型CAR-T细胞可能引发的潜在毒性。本研究所提出的模型是理解如何监测、治疗CAR-T细胞相关毒性，并用于验证新型CAR-T细胞模型的重要一步。