建立并表征间变性甲状腺癌和头颈部鳞状细胞癌的患者来源异种移植模型

本方案有助于建立更能反映肿瘤异质性、分子多样性并预测临床结果的甲状腺未分化癌（ATC）和头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）患者来源的异种移植（PDX）模型。该技术操作简便，成功率高，也可适用于其他PDX模型的构建。该技术可进一步拓展用于抗癌药物敏感性筛选，以指导癌症患者的个体化治疗。

从未操作过该技术的人员可能会遇到一些困难，因此建议仔细关注方案中的每一个细节。在获取甲状腺癌（ATC）和头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）肿瘤样本后，将其置于含有无菌HTK溶液的50毫米离心管中，并用75%酒精进行消毒。使用无菌眼科镊子将肿瘤组织转移至盛有生理盐水的6厘米培养皿中，并用刀片将其切成小块。

然后，将组织块转移至一个新的含有生理盐水的6厘米培养皿中，并用封口膜包裹。将包好的培养皿放入冰盒中，连同剪刀、镊子和接种针一起带入无病原体动物房。麻醉小鼠后，去除右侧胸侧的毛发，并用75%酒精对该区域进行消毒。

使用剪刀在右侧胸侧壁中部做一个两毫米的切口。用镊子从培养皿中取出组织，并将其放入套管针中。固定小鼠，并在穿刺部位绷紧皮肤。

将带有肿瘤组织的套管插入切口至皮下间隙，然后移动至肩部后方并推出套管芯。用无菌纱布保留剩余组织，去除肿瘤表面的生理盐水，确保组织不过于湿润。取4到6块组织放入2毫升细胞冻存管中，并向管内加入1毫升冻存液。

然后，将试管放入梯度降温盒中，在零下80摄氏度条件下冷冻过夜。最后，转移至液氮中保存。复苏PDX模型肿瘤时，使用游标卡尺每周测量一次皮下肿瘤的长度和宽度。

计算肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线。然后用剪刀剪开已处死小鼠肿瘤周围的皮肤，用镊子取出肿瘤并置于培养皿中。

按照先前已证实的方法，将肿瘤移植至第五代小鼠。选取第五代（P5）未分化甲状腺癌（ATC）患者来源的肿瘤异种移植（PDX）模型小鼠的肿瘤组织，将其切成2至4立方毫米大小的组织块。

将这些组织块皮下接种至裸体雌性BALB/c小鼠右背部，接种方法如前所述。当肿瘤生长至50至150立方毫米时，将小鼠分为三组。每周两次分别给予乐伐替尼、顺铂及对照处理后，测量小鼠的体重。

同时测量肿瘤体积。相关性分析显示，ATC患者来源的异种移植模型（PDX）构建成功率与年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤分级及分化程度无关。头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）PDX模型构建的成瘤率表明，分化程度与模型构建成功率相关，而其他参数对成瘤率无显著影响。

每个PDX模型的肿瘤生长曲线显示，ATC样本稳定传代至P3代，而两例HNSCC样本在传至P1代后未能形成肿瘤。大多数PDX模型P0代的肿瘤生长速度相对较慢，可能与小鼠微环境的适应过程有关。组织病理学检查表明，PDX肿瘤保留了原发肿瘤的形态学特征。

与对照组相比，使用乐伐替尼治疗显著抑制了未分化甲状腺癌PDX模型中的肿瘤生长，并表现出更低的肿瘤重量。此外，接受乐伐替尼治疗的小鼠总体体重未出现明显变化。顺铂剂量过高会导致显著的毒性反应，表现为体重下降甚至死亡。

新鲜肿瘤必须用生理盐水反复清洗数次，然后切成小块。将活检获得的肿瘤组织混合后接种，可能导致肿瘤形成。该模型可用于肿瘤生物学研究、药物筛选和个体化治疗。