体内 通过乳腺导管内注射将基因传递到小鼠乳腺上皮细胞

该方法以特殊、临时和定量可控的方式将遗传物质递送到乳腺上皮细胞中。由于将遗传物质递送到乳腺上皮细胞中是特殊的，暂时和定量控制，通过这种方法生成的乳腺模型更好地模拟了天然肿瘤发生。通过将 33 号金属轮毂针切割成约 1 厘米长并将它们储存在酒精中来开始注射器制备。

从酒精中取出注射器和针头，并将剩余的酒精从注射器和针头中推出。然后拆卸注射器进行空气干燥。干燥后，组装注射器。

从零下80摄氏度的冰箱中取出病毒储备管，并在冰上解冻。要添加溴酚蓝，请将移液器吸头浸入溴酚蓝粉末中一厘米的深度。然后将附着的微量溴酚蓝带入病毒悬浮液中。

将溴酚蓝与病毒溶液混合，上下移液10次，然后将病毒放在冰上。通过捏麻醉雌性小鼠的脚趾来检查麻醉深度。在眼睛上涂抹软膏以防止动物在麻醉下干燥。

将鼠标仰卧放在温暖的垫子上，并使用胶带将所有四肢连接到工作台上。识别要注射的，并通过用剪刀修剪周围的头发来暴露它。将 70% 酒精和 iota 四根棉签交替涂抹在区域，以清洁并暴露。

使用一对无菌的微解剖弹簧剪刀横断的远端尖端，直到在放大镜灯下可以看到一个小的中央导管开口。然后将10微升病毒溴酚蓝混合物装入注射器中，并在放大镜灯的帮助下小心地将针头插入开口。将整个10微升病毒注入导管树中，并将鼠标放在设置为45摄氏度的载玻片加热器上，直到鼠标完全醒来。

注射病毒后三到五天打开胸腔。用剪刀沿着腹侧中线和上下肢切割皮肤。提起皮肤，露出乳腺。

使用镊子和剪刀从皮肤和未注射的腺体中取出注射的乳腺作为对照。完成后，将乳腺放在载玻片上并将腺体展开至其原始形状，然后在荧光体视显微镜下观察和成像。通过暴露乳腺和观察蓝色导管树证实了导管内注射的成功。

在注射慢蛋白-EGFPFUCGW病毒2至5天后，通过在荧光体视显微镜下观察整个支架制备来评估乳腺上皮细胞感染。对于病毒产生的荧光蛋白或细胞表面标志物的流式细胞术分析，收集未感染的腺体和感染的腺体并将其处理成单细胞悬液以估计病毒感染率。活化的ERBBB2在几周内导致癌前病变，在几个月内导致肿瘤。

由于个体小鼠的质量，年龄，体重和力量的差异，的大小可能会有很大差异。正确修剪尖端以露出乳腺导管的开口和安装针头是成功注射病毒的重要步骤。