流式细胞仪之间实验室转移的标准化，用于检测接种日本脑炎疫苗的儿童淋巴细胞
2023年2月10日
在这项研究中，开发了一种方法来促进两个实验室中两个流式细胞仪之间实验设置和分析模板的转移，以检测接种日本脑炎疫苗的儿童的淋巴细胞。流式细胞仪实验的标准化方法将使研究项目能够在多个中心有效进行。
流式细胞仪的标准化方法为实验室结果的相互认证提供了可行的方法，并确保了结果与多个中心的研究项目的一致性。该方法将时间消耗最小化，易于执行，配备自动化，分析模板，并且可以显着降低数据分析的要求。通过单击细胞仪按钮并选择视图配置，从转移实验室开始在细胞仪 A 的软件中创建新配置。
右键单击配置列表中的基本配置文件夹，选择新建文件夹并重命名。接下来，通过右键单击基本配置并复制它来创建新配置。右键单击新文件夹并粘贴基本配置，然后再重命名新配置，标准化方法转移"将参数名称（例如FETC）从参数列表中拖到相应的检测器530/30上，同时编辑新配置的附加参数。
为了在转移实验室中标准化实验，请使用此细胞仪A设置运行性能检查并跟踪磁珠以验证细胞仪A是否表现良好。右键单击软件浏览器窗口中的细胞仪 A 设置，然后通过选择应用程序设置来创建工作表。然后使用未染色的样品调整前向散射区域（FSC）和侧散射区域（SSC）的光电倍增管或PMT电压以及所有荧光参数。
通过右键单击实验细胞仪设置并选择应用程序设置来保存应用程序设置。若要自动添加补偿控件，请单击实验按钮并选择补偿设置菜单，然后选择"创建补偿控件"。记录所有补偿控制磁珠的数据。
完成后，单击实验并选择补偿设置，自动计算补偿，然后记录单细胞染色对照的数据。使用CD45 RAA APC将R7-18的补偿值修改为15%APC，使用CD19 BB700将APC H7的补偿值修改为14%BB700，使用CD8 R7-18将APC H7的补偿值修改为60%R7-18。记录CST磁珠的数据后，为CST亮珠创建目标值模板的全局工作表，完成后，在流式细胞仪阵列上运行样品并收集25， 000个淋巴细胞。
为样品创建分析模板的全局工作表，并将实验模板保存在细胞仪上 A.使用 CD-ROM 导出实验模板。要将实验模板转移到测试实验室中的细胞仪B，请使用CST微球进行性能检查，以验证细胞仪B是否表现良好。从细胞仪 A 导入实验模板，并使用该模板为细胞仪 B 创建实验。
使用相同批次的CST微球调整每个荧光通道的荧光参数电压，以匹配以前的MFI仪器。如果需要，使用未染色的样品调节FSC电压。右键单击实验细胞仪设置，然后选择应用程序设置以保存应用程序设置。
接下来，使用 CD45 RA APC 将 R7-18 的补偿值修改为 15%APC。使用CD19 BB700将APC H7的补偿值修改为24%BB700。并使用CD8 R7-18将APC H7的补偿值修改为60%R7-18。
补偿值修改后，在流式细胞仪B上运行样品并收集25， 000个淋巴细胞。在用于细胞仪设置和跟踪的目标值模板或CST亮珠的全局工作表中，获得了10个荧光通道的直方图，通过显示直方图门内的中位数来显示每个参数的目标值。使用细胞仪A和B获得的样品的点阵图经过仪器标准化，证明了使用自动分析模板的不同仪器之间的数据一致性。
在两个不同的仪器模型中比较六个样品的结果时，未观察到显着差异。使用标准化方法从不同仪器获得的15个淋巴亚群的结果获得了高度可比的数据。相同的配置名称、创建模板以及在不同仪器中制作安全珠的生态技术值是该协议中的关键步骤。
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概览
本研究提出了一种在不同实验室的流式细胞仪之间传输实验设置和分析模板的标准化方法。该方法旨在增强对日本脑炎疫苗接种儿童淋巴细胞的检测，从而促进多中心研究项目。
关键研究组成部分
科学领域
- 流式细胞仪
- 免疫学
- 标准化方法
背景
- 流式细胞仪是分析淋巴细胞种群的关键工具。
- 标准化对于确保各实验室之间一致的结果至关重要。
- 日本脑炎疫苗接种对公共卫生很重要。
- 实验室之间的合作可以增强研究成果。
研究目的
- 开发标准化流式细胞仪实验的方法。
- 促进实验设置在实验室之间的传输。
- 提高对接种疫苗儿童淋巴细胞检测的可靠性。
使用的方法
- 在流式细胞仪软件中创建新配置。
- 在实验室之间传输基本配置。
- 编辑标准化分析的参数。
- 自动化数据分析过程。
主要结果
- 该方法允许实验室结果的相互认证。
- 它最大限度地减少时间消耗并简化执行。
- 自动化分析减少了对大量数据处理的需求。
- 标准化配置增强了各中心的一致性。
结论
- 标准化方法改善了实验室之间的合作。
- 它确保了涉及淋巴细胞的研究结果可靠。
- 该方法可以应用于各种多中心研究。
常见问题
Executive Industry Relevance
Multi-center immunology studies require robust standardization to ensure data comparability and reproducibility across diverse flow cytometry platforms. This method enables the transfer of experimental settings and analysis templates between different instruments and laboratories, directly supporting portfolio-wide immune monitoring and cross-site data integration. Standardized workflows reduce biological and operational variability, strengthening predictive confidence in immune function assessments for vaccine research and beyond.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables consistent immune cell phenotyping across sites for target validation studies.
- Reduces mechanistic ambiguity by harmonizing instrument setup and gating strategies.
- Supports predictive confidence in immunological endpoints for early-stage programs.
Screening & Assay Development
- Facilitates preparation of validated flow cytometry assays for multi-site screening campaigns.
- Improves assay reproducibility and quantitative comparability through standardized templates.
- Enables reliable evaluation of immune responses in diverse cohorts and settings.
Translational & Preclinical Research
- Aligns immune monitoring protocols for translational biomarker studies in vaccine development.
- Ensures continuity of immune function data from discovery through preclinical validation.
- Supports risk-adjusted advancement decisions by minimizing inter-lab variability.
Pipeline & Workflow Integration
This standardization method integrates into the discovery-to-preclinical continuum, enabling seamless immune monitoring from early research through multi-center validation.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification by ensuring consistent lymphocyte detection.
- Screening: Delivers assay readiness and reproducibility for immune cell subset analysis across platforms.
- Analytics: Provides quantitative fluorescence intensity and compensation outputs for robust data comparison.
- Translational Research: Maintains biomarker alignment and data integrity in multi-site vaccine studies.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable standardization protocol for future multi-center immunology projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in immune monitoring.
- Operational Value: Streamlines assay setup, minimizes manual adjustments, and enhances reproducibility.
- Strategic Value: Enables reliable go/no-go decisions and efficient resource allocation in multi-site studies.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and cross-study data integration for vaccine and immunology programs.
Implementation Considerations
- Requires expertise in flow cytometry configuration and compensation adjustment.
- Needs compatible software and access to standardized fluorescence beads for calibration.
- Demands cross-team agreement on template design and gating strategies.
- Adaptation may be needed for different instrument models or sample types.
- Dependent on consistent reagent lots and instrument maintenance for optimal comparability.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:05
Introduction
0:57
Create Identical Configuration with the Same Name on Different Cytometers
1:45
Standardizing Experiment Using Cytometer A in the Transferring Lab
3:48
Transferring the Experimental Template to Cytometer B in the Test Method Lab
5:02
Results: A Rapid and Feasible Standardization Method to Transfer Parameters Across Different Flow Cytometers
5:50
Conclusion
