基于细胞的电学阻抗平台实时评估寨卡病毒抑制剂

病毒感染具有高度动态性，传统的病毒学终点检测方法存在局限性，即所选择的检测终点可能导致部分信息的遗漏。该技术的主要优势在于，利用基于细胞的电学阻抗，能够实时监测病毒感染过程以及抗病毒化合物的活性。接下来由本实验室的技术员 Eef Meyen 演示该实验操作。

首先，取一块基于叉指电极的96孔板，制备CEI板。向每孔中加入100微升生长培养基，并在孔与孔之间的空隙中加入DPBS。然后，将该板置于37摄氏度、5%二氧化碳条件下孵育4小时。

接种A549细胞时，按照文中的描述从培养瓶中分离细胞，并将其重悬于新鲜培养基中。将细胞悬液转移至50毫升离心管中。计数活细胞，并用新鲜培养基稀释至所需细胞密度。

孵育后，使用多通道移液器从96孔板中移除生长培养基。每孔加入100微升细胞悬液。待细胞平衡后，将培养板放入CEI仪器中，设置并进行CEI检测。

打开设备的软件，在“采集数据”面板中，单击“设置”以建立新实验。将笔记本电脑连接到ECIS设备。通过检查各孔的阻抗（以绿色显示）来配置培养板。

在“孔板配置”面板中，根据所使用的培养器皿选择阵列类型，然后点击“多频次”时间模式。接着，通过点击“开始”启动测量。将化合物置于冰上保存。

在5毫升聚丙烯管中，使用平衡的检测培养基制备10倍浓缩的稀释液，然后加入待测化合物。在数据采集设置面板中，单击暂停，待当前时间点完成后，取出96孔板。在光学显微镜下观察细胞的贴壁情况和单层形成。

接下来，使用多通道移液器从每孔中吸出 20 微升培养基，并在目标孔中加入 20 微升化合物溶液或溶剂对照。将培养板置于 37 摄氏度、5% 二氧化碳条件下孵育 15 分钟。为制备病毒溶液，解冻一管病毒储备液。

在15毫升聚丙烯管中用检测培养基将病毒稀释至所需的感染复数（MOI）后，加入病毒原液。将病毒稀释液加入指定孔板后，在细胞对照孔中加入100微升检测培养基。随后，对使用过的病毒容器进行去污染处理。

将培养板重新放回 CEI 仪器中，点击“继续”以持续进行连续六天的测量。为分析数据，点击“完成”以结束实验，并输入实验摘要。数据采集完成后，选择“确定”。在图表窗格中选择所需的频率。

确保在“孔板配置”窗格中选中所有孔，然后依次点击文件、导出数据，再选择导出图表数据，以电子表格格式导出数据。CEI 检测结果显示，感染动力学高度依赖于细胞类型，U87 细胞仅在高 MOI 条件下易感寨卡病毒感染。CEI 检测还表明，在高密度接种时细胞已形成完全融合的单层，无法在 CEI 电极上进一步扩展，导致细胞对照组与病毒对照组之间存在轻微差异。

对于U87这种较大的细胞类型，接种密度过高可能导致细胞单层完全脱落。非洲型MR766和亚洲谱系PRVABC59的代表性寨卡病毒株表现出相似的CEI模式。然而，PRVABC59诱导细胞病变效应的速度略慢，这一点也反映在CIT50值中。

两种寨卡病毒株在三种不同感染复数（MOI）条件下的阻抗谱显示，该特定化合物浓度能够延缓寨卡病毒感染引起的阻抗下降。细胞指数（CEI）检测表明，抗病毒活性依赖于MOI，且通过AUCN计算确定了IC50值。所评估的CIT50值揭示了该化合物在细胞生长与感染动力学中的活性强度。

CEI 是一种强大的技术，可用于实时、无标记且非侵入性地评估和表征化合物对寨卡病毒复制的作用。