结晶与 原位 使用哈威尔结晶设施和钻石光源 VMXi 光束线在室温下收集数据

了解蛋白质的三维结构是药物设计、生物技术以及理解多种疾病的基础。VMXi 能在无需低温冷冻的条件下测定蛋白质结构，使其更接近天然温度状态。VMXi 还可在蛋白质晶体仍处于结晶板中时直接测量其衍射数据，从而避免因机械操作带来的损伤。

未来，我们希望充分利用 VMXi 极高的通量，对大量晶体样本进行分析，以识别出多种不同的结构状态，而不仅仅局限于目前人们常获得的单一结构。我们还希望推进药物开发，直接在结晶板内开展片段筛选与优化，这一新方法展现出巨大的应用前景。首先，在 NC2 板中培养晶体。

然后使用提供的 Diamond Fed ID 登录 ISPyB 系统，并选择“提案”（Proposals）。通过滚动列表或在搜索栏中输入提案编号来查找目标提案。找到提案后，在提案编号下方的下拉菜单中选择“运输”（Shipment）。

货件窗口将打开，显示与该提案相关的所有货件。要创建新货件，请点击屏幕右上角的“添加货件”按钮，并为该货件提供一个名称。然后选择“自动/成像仪”选项，并点击屏幕左下角的“添加货件”按钮以确认创建货件。

进入货件窗口，点击“添加容器”，此时将弹出添加容器页面。随后，在容器类型下拉菜单中选择合适的板类型。根据光束线工作人员的指示，为实验用板输入条形码和容器名称。

从“请求成像仪”下拉菜单中选择 VMXi 20 摄氏度成像仪，然后从“成像时间表”下拉菜单中选择斐波那契成像时间表。从“结晶筛选”下拉菜单中选择相应的结晶筛选条件，然后从“所有者”下拉菜单中选择正确的用户名。点击“查看”并在电子邮件输入框中填写准确的联系地址。

在注释框中输入关于该孔板的详细信息。从“蛋白质”下拉菜单中选择相应的样品，并使用在UAS中注册且经Diamond在实验提案中批准的缩写名称。将相同的名称输入样品名称框中，其余框保持空白。

单击“板”图标，将样本复制到整块板上，并用绿色方块填充整个容器。单击页面底部的“添加容器”以注册该板。将该板转移至相应的成像仪中进行储存和成像。

当容器存入成像仪时，系统将生成一次访问记录，用户会收到一封包含该孔板及其图像链接的电子邮件。要查看成像结果，请导航至相关提案，点击提案编号下方的下拉菜单中的“容器”选项，查看可用容器列表。如果存在其他类型的样品 holder，请选择“孔板”滤镜。

为了缩小搜索范围，使用“我的容器”选项，仅显示与当前用户 ID 相关的容器。将光标悬停在目标行上，单击鼠标左键以选择所需的容器。随后将弹出一个新窗口，显示该培养板的概览。在培养板示意图的左侧选择一个液滴，以查看其最近的图像。

使用箭头键在液滴之间切换，或使用鼠标或光标单独选择液滴。如需手动添加数据采集点，请按下“标记点”按钮，然后将光标定位到目标位置。

进行选择并等待红色叉号出现。当所有点均被标记后，单击“完成”按钮。单击“标记区域”按钮，以通过网格扫描为数据采集添加区域。

单击左上角的点，向下并向右拖动以创建将在光束线上扫描的区域。当所有目标区域都设定完毕后，单击“完成”按钮。在液滴图像上查找蓝色十字标记，这些标记代表由 CHiMP 自动识别出的晶体样品。

要查看结晶液滴的 CHiMP 评估结果，请勾选“显示自动评分”并在类别下拉菜单中选择“crystal”。当所有液滴中的点和区域均已标注后，点击页面底部的“准备数据采集”按钮。查看系统预选或自动识别的样品列表。

如需添加单个点或区域，请点击按钮，或点击“将当前页面添加到队列”按钮以添加所有显示的样本。然后点击点筛选器并勾选“全选”复选框，以对当前队列中所有样本应用相同的参数。可使用点、区域、手动和自动的筛选功能。

对于区域扫描，选择“网格扫描 DMM，步长10微米，透射率100%”。对于其他点实验，从下拉菜单中选择相应的选项。对于振荡数据采集，选择“Omega扫描 DMM，10度，透射率10%”，以最大化数据采集效率。

在为所有样品选择正确的实验参数后，点击“队列容器”按钮。一旦该板升至队列顶部，将被送至光束线进行数据采集，随后返回样品存储区。之后请查收包含访问相关数据链接的电子邮件。

在项目编号下方的下拉菜单中选择“样本组管理”，查看其他用户是否已创建了组列表。如需创建新组，请点击“创建样本组”按钮。在“创建样本组”页面的下拉菜单中选择一个运输批次，以查看样本浏览界面。

单击某个容器后，查找显示板图概览的图形。单击单个液滴或相应的行字母或列编号。选择与单个组关联的所有孔后，在“样本组名称”框中输入该组的名称，然后单击“保存样本组”按钮。

点击此页面上的“查看样本组”按钮，返回与该方案关联的已生成样本组列表，并继续进行数据处理。