2024年3月8日
本文提供了一种详细的方案,用于清洗和重复使用聚碳酸酯超速离心管,以进行适用于蛋白质组学实验的细胞外囊泡分离。
我们研究心血管疾病,特别是细胞外囊泡在心血管组织(如心脏瓣膜和血管)病理性钙化中的作用。本课题组研究人员近期建立了从纤维钙化性心血管组织中提取组织及滞留的细胞外囊泡的方法,并可进一步分析其蛋白质组学特征。本课题组已证实,这些细胞外囊泡含有启动病变组织钙化过程的关键蛋白质成分。
用于细胞外囊泡分离超速离心步骤的专用离心管可清洗并灭菌后重复使用。然而,蛋白质组学分析需要特别注意,因为任何污染都可能显著影响下游实验结果。本文中,我们验证了一种可重复使用耗材的方案, specifically polycarbonate ultracentrifuge tubes for extracellular vesicle isolation that is suitable for downstream, low input proteomics applications。
我们的实验方案简单且高效,可帮助研究人员降低此类分离方案中通常涉及的耗材成本和废弃物产生。首先,收集使用过的聚碳酸酯管,并彻底弃去其中的先前样品。为防止样品干燥附着在管壁上,应立即将超速离心管浸入自来水中。
然后将离心管置于0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)中孵育10分钟。倒出大部分但并非全部的SDS溶液。使用棉签彻底擦拭离心管中曾有细胞外囊泡沉淀的区域。
冲洗时,用热水注满试管,然后完全倾倒。使用喷瓶冲洗三次后,将去离子水喷入试管,随后喷入70%乙醇。将试管倒置,使其完全干燥,然后转移至洁净的容器中以备重复使用。
本研究聚焦于细胞外囊泡在心血管疾病中的作用,特别是其在心血管组织钙化过程中的参与。研究人员展示了一种有效的方案,用于清洗和重复使用聚碳酸酯超速离心管以分离这些囊泡,在确保其适用于蛋白质组学研究的同时,最大限度地减少浪费和成本。
在细胞外囊泡(EV)蛋白质组学的发现阶段工作流程中,验证后重复使用聚碳酸酯超速离心管可同时应对可持续性和成本效益方面的挑战。确保最低限度的污染并兼容质谱分析,能够从低得率的EV样本中实现可靠的蛋白质鉴定。该方案通过减少耗材浪费,支持企业研发,同时不降低分析严格性或下游数据质量。
该清洗方案可整合到从早期发现到临床前研究的整个EV分离与蛋白质组学流程中,通过确保样本纯度和分析相容性,提升研究的可靠性。