来自 Spiny 小鼠模型的 Fibro-Adipogenic Progenitor 分离、扩增和分化
2024年11月15日
该方案概述了通过酶解离和荧光激活细胞分选从多刺小鼠 （Acomys） 中分离骨骼肌和心肌纤维成脂祖细胞 （FAP）。从该方案获得的 FAP 可以有效地扩增和分化为肌成纤维细胞和脂肪细胞。
我们的总体愿景是更好地了解和掌握导致组织转移的细胞通讯和细胞行为，以及细胞过程如何在进食修复中被错误调节。为此，我们使用了各种型号，其中一种是 Spiny 鼠标。这种新小鼠模型的主要问题之一是缺乏研究它的工具。
在这里，我们提供了一个新方案，其中包含可靠的酶消化和抗体染色。使我们能够成功地对纤维成脂祖细胞进行分类并在体外培养它们，以进一步分析它们的命运。我们测试了各种酶组合和浓度，以及多种抗体，我们的方法为最可靠和最稳健的方案提供了参考。
由于我们现在拥有可靠的酶消化，我们将继续测试其他标志物和抗体，以成功分析内皮细胞、周细胞、免疫细胞和肌源细胞。
概述
本方案概述了利用酶解消化和荧光激活细胞分选技术从刺鼠（Acomys）中分离骨骼肌和心肌纤维-脂肪生成祖细胞（FAPs）的方法。该方法提供了可靠的酶消化和抗体染色流程，可有效实现FAPs的分选及其体外培养。
关键研究组成部分
科学领域
- 细胞生物学
- 再生医学
- 干细胞研究
背景
- 理解细胞间的通讯与行为对于组织稳态至关重要。
- 纤维脂肪生成祖细胞在组织修复中发挥重要作用。
- 由于研究工具有限，多刺小鼠模型带来了独特的研究挑战。
- 在此模型中研究FAPs需要可靠的实验方案。
研究目的
- 建立从小鼠棘鼠中分离FAPs的稳健方案。
- 为进一步分析FAPs向肌成纤维细胞和脂肪细胞的分化提供支持。
- 为在小鼠棘鼠模型中研究其他细胞类型奠定基础。
使用的方法
- 肌肉组织的酶解离。
- 利用荧光激活细胞分选（FACS）分离FAP。
- 测试多种酶组合及浓度。
- 使用多种抗体实现高效分选。
主要结果
- 成功分离并扩增多刺鼠的纤维脂肪前体细胞（FAPs）。
- FAPs 可分化为肌成纤维细胞和脂肪细胞。
- 建立了一种可靠的酶消化方案。
- 提供了可靠的抗体染色方法参考。
结论
- 该方案的建立有助于深入研究多刺鼠中的纤维脂肪生成前体细胞（FAPs）。
- 未来的研究可进一步探索其他标记物及细胞类型。
- 本研究有助于理解组织修复的机制。
常见问题
行业重要性概述
从刺鼠模型中优化分离和扩增纤维脂肪生成祖细胞（FAPs）的方法填补了再生医学研究中的一个关键空白，从而能够深入研究组织修复机制。该技术能力支持以细胞间通讯、细胞外基质重塑以及比较再生生物学为重点的早期探索性研究。本方案提高了在临床前模型开发中进行靶点验证和机制性风险评估的预测可靠性。
生物制药研发中的策略性应用
早期发现与靶点验证
- 能够在再生能力极强的哺乳动物模型中研究再生通路及细胞间相互作用。
- 通过分离并扩增FAPs以支持下游机制研究，实现功能靶点的验证。
- 提供一个比较棘刺鼠与小家鼠再生反应的平台，有助于生物学层面的风险评估。
筛选与检测方法开发
- 为标准化的体外分化和基质重塑实验提供经过验证的细胞群体。
- 通过可靠的酶消化和基于抗体的细胞分选方案，提高实验的可重复性。
- 可在定义明确的条件下实现对FAP命运决定的定量评估。
转化与临床前研究
- 通过在哺乳动物体系中模拟组织修复和纤维化，与疾病相关系统相一致。
- 通过支持再生机制的比较研究，促进转化生物标志物的发现。
- 加强再生医学产品组合的风险调整后推进决策。
流程与工作流整合
本方案通过提供一种可靠的方法来分离和扩增FAPs，从而融入从发现到临床前研究的连续过程，适用于机制研究、筛选及转化研究。
- 发现生物学：在再生背景下推进细胞命运和基质重塑的假设验证。
- 筛选：提供可重复且特征明确的细胞群体，用于检测方法开发和化合物评估。
- 分析：实现对分化结果和细胞群体纯度的定量测量。
- 转化研究：促进跨物种再生过程的比较及生物标志物的对应分析。
- 企业级复用：建立可重复使用的方案，用于从多刺鼠模型中分离其他细胞类型。
运营与企业影响
- 科学价值：提高再生医学靶点验证和机制研究的预测可信度。
- 操作价值：标准化细胞分离与扩增流程，实现可重复性和可扩展性。
- 战略价值：通过减少早期研究中的生物学不确定性，优化决策判断。
- 项目组合影响：支持基于风险调整的再生医学项目优先级排序。
实施注意事项
- 需要具备流式细胞术、酶法组织解离和细胞培养方面的专业知识。
- 需要能够使用FACS仪器以及经过验证的抗体组合。
- 为确保可重复性，需在不同团队间对消化和染色方案进行标准化。
- 随着研究扩展，可能需要针对其他组织类型或物种进行方案调整。
- 依赖于对额外细胞标志物和细胞群体的持续优化。
生物制药常见问题
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:13
Collection of Skeletal and Cardiac Muscles from Spiny Mouse for Isolating Fibro‐Adipogenic Progenitors (FAPs)
2:46
Digestion of Mouse Skeletal and Cardiac Muscles for Fluorescence‐Activated Cell Sorting and Culture of Fibro‐Adipogenic Progenitors (FAPs)
5:01
Fluorescence‐Activated Cell Sorting and Culture of Fibro‐Adipogenic Progenitors (FAPs)
