代谢功能障碍相关脂肪性肝病中脂肪沉积的体外建模

我们的研究方向是传统蒙古药学。通过建立代谢功能障碍相关脂肪性肝病的细胞模型，研究常用疗法的作用及其机制。本研究的发现将有助于未来提升相关优势，推动建立代谢功能障碍相关脂肪性肝病的细胞模型，并深入探究该疾病的潜在发病机制。

未来的研究将基于代谢功能障碍相关脂肪性肝病细胞模型，以探讨克罗恩病降低铅水平的作用机制。首先，在96孔板的每个孔中接种过夜培养的HepG2细胞，每孔加入100 µL DMEM培养基。将细胞置于37°C、5% CO₂条件下孵育24小时。

第二天，弃去上清液，根据指定的分组每孔加入100微升油酸。对于对照组，每孔加入100微升DMEM。将细胞在37摄氏度下孵育24小时。

孵育后，向每孔加入10微升细胞计数区域溶液，轻轻混匀，并在避光条件下孵育2小时。将培养板放入酶标仪中，在450纳米波长下测定吸光度。根据光密度计算HepG2细胞的GI`50值。

与对照组相比，油酸在0.125、0.25、0.5和1毫摩尔浓度下均降低了HepG2细胞的存活率，其中0.5和1毫摩尔浓度下的差异具有统计学显著性。首先，将过夜培养的HepG2细胞接种于含DMEM培养基的6孔板中。将细胞在37摄氏度条件下培养24小时。

孵育后，向每个孔中加入含有油酸的2毫升细胞培养基。在37摄氏度下将细胞孵育24小时。第二天，移除培养基，并用PBS洗涤细胞两次。

向每个孔中加入1毫升苏丹红O固定液，孵育30分钟。弃去固定液，用蒸馏水洗涤细胞两次。向每个孔中加入1毫升60%异丙醇，孵育30秒。

弃去异丙醇后，加入一毫升新配制的油红O染色液，孵育20分钟。随后加入一毫升60%异丙醇，孵育30秒。用蒸馏水洗涤细胞五次，以去除多余的染料。

显微成像后，在计算机上观察覆盖蒸馏水的细胞。成像完成后，从孔板中移除水分，使其自然干燥。向每个孔中加入 2 毫升异丙醇，并在摇床中震荡 10 分钟。

将100微升细胞悬液转移至96孔板中，每组16个孔，在酶标仪上于510纳米处测定光密度以计算脂质含量。与对照细胞相比，经油酸处理的HepG2细胞显示红色染色强度增加，表明脂滴形成增多。

随着油酸浓度的升高，HepG2 细胞中的脂滴和脂质含量增加。首先，将总甘油三酯检测试剂盒在室温下平衡 20 分钟。收集过夜培养的 HepG2 细胞上清液，在 1,570 ×g 条件下离心 10 分钟。

设置标准品孔和待测样品孔。向标注为标准品的孔中加入50微升油酸。除空白孔和标准品孔外，向样品孔中加入10微升细胞培养物。

然后，向每个孔中加入 40 微升样本稀释液。接着，向每个孔中加入 100 微升辣根过氧化物酶检测抗体。用酶标板封板膜密封，于 37 摄氏度恒温箱中孵育。

孵育一小时后，弃去上清液，并在无尘纸上吸干。向每个孔中加入洗涤液，在室温下孵育一分钟。然后，向每个孔中加入50 µL底物A和50 µL底物B。

轻轻混匀，在37摄氏度下孵育15分钟。加入50 µL终止液，并在15分钟内于450 nm处测定吸光度。

以标准品浓度为横坐标（X轴），对应的吸光度值为纵坐标（Y轴）作图，进行线性回归分析，得到标准曲线方程，用于计算各样本的浓度值。与对照组相比，用不同浓度油酸处理HepG2细胞后，细胞上清液中的总甘油三酯含量显著增加。