Name: 从活体供体猪中获取甲状旁腺和 离体 鉴定 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: 学习从活体供体猪中获取甲状旁腺的非致死性技术，通过胸腺取出和透照法进行离体鉴定。该方法支持异种移植研究，为甲状旁腺功能减退症治疗提供新途径。

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我们感谢法国糖尿病学会和医学研究基金会提供的支持和研究资助。

所有动物实验均已获得里尔大学动物伦理委员会的批准（编号 #20491-20190219161313）。
1. 猪的麻醉
<ol>
	<li>在首次切口前30分钟，肌肉注射布托啡诺（0.015 mg/kg）以提供术前镇痛。</li>
	<li>注射氯胺酮（50 mg/kg）和赛拉嗪（3 mg/kg）进行肌肉注射以诱导镇静。给予5%异氟烷 通过 吸入3至5分钟以加深麻醉。</li>
	<li>通过检查眼睑闭合反射和吞咽反射来评估麻醉深度。对猪进行气管插管，并将其仰卧位固定于手术台上。通过吸入方式将异氟烷浓度降至2%以维持麻醉。</li>
	<li>使用便携式多参数兽用监护仪持续监测心率和血氧饱和度，以确保整个手术过程中麻醉深度适宜及生理状态稳定。</li>
</ol>
2. 暴露目标区域
<ol>
	<li>剃除并仔细清洁颈部区域，范围从下颌下区延伸至胸骨。</li>
	<li>使用抗菌皂清洁，随后使用氯己定，以确保手术区域无菌。彻底擦干整个区域。</li>
	<li>放置无菌手术巾，隔离颈前区域，以备手术操作。</li>
</ol>
3. 猪胸腺暴露
<ol>
	<li>使用手术刀沿颈部白色分界线做一条10 cm的纵向切口。用梅岑鲍姆剪刀仔细解剖该区域，分离甲状腺前肌群，以建立清晰的手术视野。</li>
	<li>将自动拉钩置于肩胛舌骨肌与甲状软骨之间，以利于分离结缔组织并暴露胸腺。 
	注意：避免对气管施加过大压力，以防造成损伤。</li>
	<li>逐步暴露胸腺的头侧部分，并小心将其从颈动脉鞘分离，后者包含迷走神经、颈内静脉和颈总动脉。 
	注意：为防止损伤，可使用电凝止血。</li>
</ol>
4. 猪胸腺获取
<ol>
	<li>释放后，取出胸腺的颅侧部分，其长度通常为 5 - 8 cm。</li>
	<li>用等渗生理盐水冲洗取出的胸腺，以利于甲状旁腺的识别。 
	注意：此步骤对于增强甲状旁腺独特质地的可视化和区分至关重要</li>
</ol>
5. 胸腺内甲状旁腺的鉴定 离体
<ol>
	<li>轻轻压平胸腺组织，以利于甲状旁腺的识别。 
	注意：甲状旁腺具有独特的质地，尤其与周围组织相比更为明显。甲状旁腺的纤维包膜较坚实，大小与豌豆相似。</li>
	<li>使用光源识别甲状旁腺 通过 透射照明 
	注意：甲状旁腺周围的血管结构应清晰可见，有助于其辨认。</li>
	<li>小心切除包膜并完整摘取甲状旁腺。使用Debakey镊子进行精细操作，用Metzenbaum剪刀进行精确解剖。将腺体从周围胸腺组织中分离出来。</li>
	<li>将分离的甲状旁腺置于冷保存液中，并在4 °C条件下保存，以维持其活性，供后续实验操作使用。</li>
	<li>将组织包埋于石蜡中以进行后续处理。</li>
</ol>
6. 手术关闭与苏醒
<ol>
	<li>切除甲状旁腺后，逐层关闭手术切口。使用可吸收缝线缝合肌肉和皮下组织，用不可吸收缝线缝合皮肤。</li>
	<li>逐步使猪脱离麻醉。在恢复意识后，密切监测猪是否出现即刻的术后并发症。</li>
	<li>根据术后处理方案给予镇痛药和抗生素（布托啡诺 0.03 至 0.05 mg/kg，阿莫西林-克拉维酸钾 15 mg/kg，持续 48 小时）。将猪送回饲养设施，在兽医监督下进行术后恢复。</li>
</ol>
7. 免疫染色实验方案
<ol>
	<li>对石蜡包埋样本进行脱蜡和水化：二甲苯中处理5分钟，再在二甲苯中处理10分钟，100%乙醇中5分钟，90%乙醇中7分30秒，70%乙醇中7分30秒，50%乙醇中5分钟，蒸馏水中5分钟，磷酸盐缓冲液（PBS）中5分钟。</li>
	<li>将样本置于pH 6的柠檬酸盐缓冲液中，使用微波炉以650 W功率加热9分钟进行抗原修复。随后让样本在缓冲液中冷却20分钟。用PBS冲洗三次，每次5分钟。</li>
	<li>用Dako笔在样本周围画圈后，在室温下用封闭蛋白溶液孵育20分钟，以阻断非特异性结合。</li>
	<li>在4°C条件下，用1%牛血清白蛋白（BSA）稀释的一抗（PTH抗体（H-7），小鼠IgG-α-人，sc-398856，1:100）对样本进行过夜孵育。用PBS洗涤两次，每次5分钟。</li>
	<li>在室温下用1%牛血清白蛋白稀释的二抗（Alexa Fluor 488，山羊-α-小鼠，A11001，1:500）孵育1小时30分钟。用PBS洗涤两次，每次5分钟，再用双蒸水洗涤一次，每次5分钟。</li>
	<li>用含DAPI的封片液封片，并将载玻片置于4°C保存。</li>
</ol>

<ol><li>Gafni, R. I., Collins, M. T. Hypoparathyroidism. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGafni%2C+RI+%22N.+Engl.+J.+Med%22">N. Engl. J. Med</a>. 380, 1738-1747 (2019).</li>
<li>Gosmanova, E. O., Houillier, P., Rejnmark, L., Marelli, C., Bilezikian, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+complications+in+patients+with+chronic+hypoparathyroidism+on+conventional+therapy%3A+a+systematic+literature+review%3A+Renal+disease+in+chronic+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Endocr.+Metab.+Disord%22%5BJournal%5D)">Renal complications in patients with chronic hypoparathyroidism on conventional therapy: a systematic literature review: Renal disease in chronic hypoparathyroidism.</a> Rev. Endocr. Metab. Disord. 22, 297-316 (2021).</li>
<li>Frey, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+permanent+post-thyroidectomy+hypoparathyroidism+on+self-evaluation+of+quality+of+life+and+voice%3A+results+from+the+national+qol-hypopara+study%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Impact of permanent post-thyroidectomy hypoparathyroidism on self-evaluation of quality of life and voice: results from the national qol-hypopara study.</a> Ann. Surg. 274, 851-858 (2021).</li>
<li>Büttner, M., Krogh, D., Siggelkow, H., Singer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+are+predictors+of+impaired+quality+of+life+in+patients+with+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Endocrinol.+%28Oxf%29%22%5BJournal%5D)">What are predictors of impaired quality of life in patients with hypoparathyroidism.</a> Clin. Endocrinol. (Oxf). 97, 268-275 (2022).</li>
<li>Gadelha, D. D., Filho, W. A., Brandão, M. A. J., Montenegro, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+parathyroid+allotransplantation+a+viable+option+in+the+treatment+of+permanent+hypoparathyroidism%3F+A+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine%22%5BJournal%5D)">Is parathyroid allotransplantation a viable option in the treatment of permanent hypoparathyroidism? A review of the literature.</a> Endocrine. 80 (2), 253-265 (2022).</li>
<li>Sakane, E. N., Vieira, M. C. C., Vieira, G. M. M., Maeda, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+options+in+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Treatment options in hypoparathyroidism.</a> Arch. Endocrinol. Metab. 66, 651-657 (2022).</li>
<li>Zhang, J. L. H., Appelman-Dijkstra, N. M., Schepers, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+allotransplantation%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Parathyroid allotransplantation: A systematic review.</a> Med. Sci. 10, 19(2022).</li>
<li>Goncu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+survival+effect+of+HLA-A+allele+matching+parathyroid+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Investig.+Med.+Off.+Publ.+Am.+Fed.+Clin.+Res%22%5BJournal%5D)">Graft survival effect of HLA-A allele matching parathyroid allotransplantation.</a> J. Investig. Med. Off. Publ. Am. Fed. Clin. Res. 69, 785-788 (2021).</li>
<li>Barczyński, M., Gołkowski, F., Nawrot, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+transplantation+in+thyroid+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Gland+Surg%22%5BJournal%5D)">Parathyroid transplantation in thyroid surgery.</a> Gland Surg. 6, 530-536 (2017).</li>
<li>Montgomery, R. A., et al. Results of two cases of pig-to-human kidney xenotransplantation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMontgomery%2C+RA+%22N.+Engl.+J.+Med%22">N. Engl. J. Med</a>. 386, 1889-1898 (2022).</li>
<li>Loupy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+response+after+pig-to-human+kidney+xenotransplantation%3A+a+multimodal+phenotyping+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Immune response after pig-to-human kidney xenotransplantation: a multimodal phenotyping study.</a> The Lancet. 402, 1158-1169 (2023).</li>
<li>Goncu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenotransplantation+of+microencapsulated+parathyroid+cells+as+a+potential+treatment+for+autoimmune-related+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Clin.+Transplant.+Off.+J.+Middle+East+Soc.+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Xenotransplantation of microencapsulated parathyroid cells as a potential treatment for autoimmune-related hypoparathyroidism.</a> Exp. Clin. Transplant. Off. J. Middle East Soc. Organ Transplant. 21, 901-912 (2023).</li>
<li>Hasse, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+xenotransplantation+without+immunosuppression+in+experimental+hypoparathyroidism%3A+long-term+in+vivo+function+following+microencapsulation+with+a+clinically+suitable+alginate%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Surg%22%5BJournal%5D)">Parathyroid xenotransplantation without immunosuppression in experimental hypoparathyroidism: long-term in vivo function following microencapsulation with a clinically suitable alginate.</a> World J. Surg. 24, 1361-1366 (2000).</li>
<li>Oster, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+and+reliable+dissection+of+porcine+parathyroid+glands+-+A+protocol+for+molecular+and+histological+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Anat.+-+Anat.+Anz%22%5BJournal%5D)">Fast and reliable dissection of porcine parathyroid glands - A protocol for molecular and histological analyses.</a> Ann. Anat. - Anat. Anz. 219, 76-81 (2018).</li>
<li>Hyun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure-inherent+targeting+of+near-infrared+fluorophores+for+parathyroid+and+thyroid+gland+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Structure-inherent targeting of near-infrared fluorophores for parathyroid and thyroid gland imaging.</a> Nat. Med. 21, 192-197 (2015).</li>
<li>Klute, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Contribution+to+the+topography+and+histology+of+porcine+parathyroid+glands%22">Contribution to the topography and histology of porcine parathyroid glands</a>. , Justus Liebig University of Giessen. Beitrag zur Topographie und Histologie der EpithelkÃ¶rperchen des Schweines.Â Ph.D. thesis. Justus Liebig-UniversitÃ¤t zu Giessen (1959).</li>
<li>Arndt, H. On the topography of epithelial cells in pigs with special consideration of the suitability of pigs for the production of organo-therapeutic epithelial cell preparations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Z.+Anat%22">Z. Anat</a>. 81, (Zur Topographie der Epithelkörperchen beim Schwein mitbesonderer Berücksichtigung der Eignung des Schweines für die Gewinnungorgano-therapeutischer Epithelkörperchenpräparate) 191-197 (1926).</li>
<li>Butylina, M., Föger-Samwald, U., Gelles, K., Pietschmann, P., Sipos, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+establishing+animal+models+for+studying+osteoimmunology+of+hypoparathyroidism%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Vet.+Sci%22%5BJournal%5D)">Challenges in establishing animal models for studying osteoimmunology of hypoparathyroidism.</a> Front. Vet. Sci. 10, 1163903(2023).</li>
</ol>

本方案介绍了一种快速且非致死性的猪甲状旁腺获取方法。方案中的关键步骤是定位猪的胸腺，以确保完整取出，用于后续的ex vivo研究。一旦取出胸腺，即可通过透射 illumination 法轻松识别甲状旁腺。
该技术的主要挑战之一是需要避免依赖与甲状旁腺切除术相关的人类外科操作习惯，因为我们的方案绕开了猪与人类甲状旁腺位置之间的解剖学差异。与人类不同，人类的甲状旁腺位于甲状腺后方，而猪的甲状旁腺则嵌于胸腺的头侧部分17。此外，猪通常仅有两个甲状旁腺，而人类则有四个。另一个局限性源于猪个体之间的解剖变异。某些个体可能仅有一个单侧甲状旁腺，而另一些个体则可能存在异位的甲状旁腺18。此外，由于甲状旁腺被限制在胸腺内部，成功识别需要经过训练，以区分这两种组织在质地上的差异。
与早期研究通常需要牺牲动物或采用昂贵技术不同，我们的方法因其非致死性且具有实际应用性而显得尤为突出。Klute 等人首次提供了从屠宰场动物矢状切面识别甲状...

本方案介绍了一种快速且非致死性的猪甲状旁腺获取方法。甲状旁腺功能减退症以甲状旁腺激素分泌不足为特征，会严重破坏钙稳态1。该疾病主要为甲状旁腺切除术或甲状腺切除术后出现的手术并发症，临床表现包括无力、慢性疼痛、心动过速、癫痫发作，甚至终末期肾病2。少数情况下，该病可由罕见的自身免疫性疾病或遗传性疾病引起。目前的治疗方法主要包括口服钙剂和维生素D补充，或使用重组甲状旁腺激素，但仅能部分缓解疲劳和抑郁等全身性症状3,4。随着同种异体甲状旁腺移植作为严重甲状旁腺功能减退症潜在治疗手段的需求日益增长，建立统一的移植方案显得尤为必要5,6,7,8,9。然而，关于甲状旁腺移植的临床前研究仍较为有限，且缺乏标准化的动物模型。此外，近年来异种移植领域取得了显著进展10,11，使得异种移植在临床应用中的前景受到更多关注，尤其是在内分泌细胞治疗领域12,13。然而，由于猪甲状旁腺组织定位复杂，构建猪源性甲状旁腺异种移植模型仍具挑战性。因此，亟需提供一种可重复、可持续且符合伦理的猪甲状旁腺获取技术，以进一步推动甲状旁腺异种移植的发展。
与人类通常在甲状腺后方有四个甲状旁腺不同，大多数猪仅有两个甲状旁腺，分别位于胸腺的头侧部分。以往旨在定位猪甲状旁腺的研究大多依赖于致死性方法 离体 基于荧光团的鉴定技术，这些技术在异种移植中可能难以实施14,15,16我们在此提出一种简单且非致死性的技术，适用于异种移植，该技术基于两个关键步骤：猪胸腺的获取和 离体 i利用透射 illumination 法识别甲状旁腺。该技术可能对甲状旁腺生理学研究以及移植研究具有应用价值。

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;仪器设备&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>22G 短外周导管</td><td>Smiths Medical</td><td>5060</td><td></td></tr><tr><td>基础敷料包 II，绉纱型</td><td>Hartmann</td><td>9389253</td><td></td></tr><tr><td>Bupaq（布托啡诺，bupr&amp;eacute;norphine）</td><td>Virbac</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Favorita II 型电动剪毛器</td><td>Aesculap Schermaschinen</td><td>GT104</td><td></td></tr><tr><td>一次性手术刀片</td><td>Swann-Morton</td><td>0510</td><td></td></tr><tr><td>电极刮匙</td><td>Erbe</td><td>21191-002</td><td></td></tr><tr><td>BE VIO 200p 电外科发生器</td><td>Erbe</td><td>10140-400</td><td></td></tr><tr><td>Euroklav 23 VS+ 高压灭菌器</td><td>MELAG</td><td>10056</td><td></td></tr><tr><td>重力输液三通阀，带可移动鲁尔锁接头</td><td>Care Fusion</td><td>A64-3V</td><td></td></tr><tr><td>双按钮电极手柄 Slim-Line&amp;nbsp;</td><td>Erbe</td><td>20190-065</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷加注漏斗式挥发罐</td><td>Supera Anesthesia Innovations</td><td>VAP3000</td><td></td></tr><tr><td>Isorane（异氟烷，isoflurane）</td><td>Axience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamidor（氯胺酮，k&amp;eacute;tamine）</td><td>Axience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>双头天花板无影灯</td><td>RIMSA</td><td>PENTA81+30E</td><td></td></tr><tr><td>Medisorb 二氧化碳吸收剂</td><td>Vyaire</td><td>8570043</td><td></td></tr><tr><td>Mersutures 0 缝线</td><td>Ethicon</td><td>F2520</td><td></td></tr><tr><td>切片机</td><td>LEICA RM2255</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Miller 喉镜片</td><td>Opticlar</td><td>600.020</td><td></td></tr><tr><td>氧气浓缩器</td><td>DeVilbiss</td><td>525KS</td><td></td></tr><tr><td>Paxman（赛拉嗪，xylazine）</td><td>Virbac</td><td></td><td></td></tr><tr><td>便携式多参数兽用监护仪</td><td>Mindray</td><td>IPM 10</td><td></td></tr><tr><td>可重复使用喉镜手柄</td><td>Opticlar</td><td>600.080</td><td></td></tr><tr><td>小型动物麻醉呼吸机</td><td>Midmark</td><td>91806001</td><td></td></tr><tr><td>氯化钠注射液 Viaflo</td><td>Baxter</td><td></td><td></td></tr><tr><td>外科手术器械</td><td>Kohler medizintechnik</td><td></td><td></td></tr><tr><td>手术台</td><td>Vetinox</td><td>TA700005</td><td></td></tr><tr><td>气管插管</td><td>Smiths Medical</td><td>100/179/070</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 2-0 缝线</td><td>Ethicon</td><td>JV453</td><td></td></tr><tr><td>VMS 麻醉系统</td><td>Midmark</td><td>91800003</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;材料与试剂&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM F-12 培养基</td><td>ThermoFischer</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>甲状旁腺激素抗体</td><td>SantaCruz</td><td>sc-398856</td><td></td></tr><tr><td>快速术中 PTH 检测试剂盒</td><td>Beckman Coulter</td><td>A16972</td><td></td></tr></tbody></table>

从活体供体猪获取甲状旁腺 离体 鉴定

Procurement of Parathyroid Glands from Living Donor Pigs and Ex Vivo Identification

甲状旁腺功能减退症常由手术并发症引起，严重扰乱钙稳态，导致致残性症状。目前的治疗方法缓解效果有限，凸显了开发替代疗法（如甲状旁腺移植）的必要性。本研究介绍了一种从活体供体猪获取甲状旁腺的简便方法，该方法在移植研究领域尤其是异种移植领域具有潜在应用价值。该操作包括三个关键步骤：猪的麻醉准备、单侧胸腺摘除以及 离体 胸腺内甲状旁腺的鉴定与提取。本方案采用长白猪作为实验动物，所有操作均遵循伦理规范，确保动物术后得到妥善护理与恢复。我们成功提取了甲状旁腺，并通过后续分析证实其活性与结构完整性。组织上清液中甲状旁腺激素（PTH）水平超过1,000 pg/mL，免疫荧光染色可明确区分甲状旁腺与胸腺组织，验证了该方法的可靠性。本方案提供了一种快速、非致死性且符合伦理的猪源甲状旁腺获取方法，克服了猪与人类在解剖结构上的差异。该方法具有可持续性，对甲状旁腺功能减退症研究及异种移植领域具有重要意义。

本研究的主要结果包括成功从长白猪中提取甲状旁腺组织，并进行后续分析以确认其活性与完整性。结果总结如下：甲状旁腺组织的识别已在术中得到确认 通过 透射光检查（图1A）。提取后，采集两小份组织样本（每份约10%）。取其中一份样本置于培养皿中，加入1 mL DMEM-F12培养基进行剪碎。剪碎后，从上清液中取出1 mL，采用快速术中PTH检测法测定PTH水平（图1C）。如果确认组织为甲状旁腺来源，上清液中的激素水平通常会超过 1000 pg/mL。
另一份样本用4%多聚甲醛固定过夜，用于组织学和进一步的免疫染色。甲状旁腺依次经梯度浓度乙醇脱水，二甲苯透明，最后包埋于石蜡中。使用切片机切取连续的5 µm厚组织切片。脱蜡后的组织切片用苏木精和伊红染色。采用光学显微镜拍摄显微照片。通过标准HES染色和光学显微镜观察，甲状旁腺与胸腺小叶易于区分，前者呈粉红色浆状外观，而后者呈深紫色染色（图1B）。此外...

本方案介绍了一种快速且非致死性获取猪甲状旁腺的实验方法。该操作主要包括三个步骤：猪的麻醉准备、单侧胸腺摘取以及 离体 胸腺内甲状旁腺的识别与摘除

甲状旁腺功能减退症常由手术并发症引起，严重扰乱钙稳态，导致致残性症状。目前的治疗方法……

[Mehdi] 本视频介绍了适用于异种移植的猪活体供体甲状旁腺获取技术。低钙血症以甲状旁腺激素分泌不足为特征，会严重破坏钙稳态。目前的治疗方法对疲劳、抑郁等全身性症状缓解有限。同种异体甲状旁腺移植以及异种移植正受到广泛关注。本研究旨在提出一种简单且非致死性的技术，适用于异种移植，主要包括两个关键步骤：第一，猪胸腺的获取；第二，通过透射照明法在体外识别甲状旁腺组织。实验在里尔大学大型动物实验中心进行，所有动物实验均经动物伦理委员会批准。步骤一：猪的麻醉。在首次切口前30分钟给予布托啡诺，以提供术前镇痛。通过肌肉注射给予氯胺酮和赛拉嗪以诱导镇静。通过吸入5%异氟烷3至5分钟加深麻醉。通过检查眼睑闭合反射和吞咽反射评估麻醉深度。对猪进行气管插管，并将其仰卧位固定于手术台上。通过吸入将异氟烷浓度降低至2%，以维持麻醉。使用便携式多参数兽用监护仪持续监测心率和血氧饱和度，以确保整个手术过程中麻醉深度适宜及生理状态稳定。步骤二：暴露目标区域。剃除并仔细清洁从下颌下区至胸骨的颈部区域。先使用抗菌皂，再使用氯己定，以确保无菌操作区域。彻底擦干整个区域。铺设无菌手术单，隔离颈部前侧区域以进行手术操作。步骤三：猪胸腺的暴露。使用手术刀沿颈部白线做一条10厘米长的纵向切口。使用梅岑鲍姆剪刀仔细解剖，分离甲状腺前肌群，建立清晰的手术视野。将自动牵开器置于肩胛舌骨肌与甲状软骨之间，以利于结缔组织的解剖并暴露胸腺。逐步暴露胸腺的头侧部分，并小心将其从颈动脉鞘分离，后者包含迷走神经、颈内静脉和颈总动脉。步骤四：猪胸腺的获取。在游离后，取出通常长5至8厘米的胸腺头侧部分。将取出的胸腺用等渗生理盐水冲洗，以利于识别甲状旁腺组织。步骤五：体外识别胸腺内甲状旁腺组织。轻柔压平胸腺组织，以利于甲状旁腺的识别。使用光源通过透射照明法识别甲状旁腺组织。小心切除包膜并完整取出甲状旁腺。使用Babcock镊进行精细操作，配合梅岑鲍姆剪刀进行精确解剖，将甲状旁腺从周围胸腺组织中分离。将分离出的甲状旁腺置于UW冷保存液中，并在4°C条件下保存，以维持其活性，供后续实验使用。步骤六：手术关闭与苏醒。在甲状旁腺获取完成后，逐层关闭手术切口。使用可吸收缝线缝合肌肉和皮下组织。使用不可吸收缝线缝合皮肤。逐步减少麻醉维持，使猪从麻醉中恢复。意识恢复后，密切监测猪的即刻术后并发症。根据术后方案给予镇痛药和抗生素。将猪送回饲养设施，在兽医监督下恢复。代表性结果：胸腺被切除并在体外分析以识别甲状旁腺组织。如图A中白色箭头所示。随后通过免疫荧光法对腹膜进行染色以识别甲状旁腺组织，如图B所示。最后，检测腺体切碎后小块组织上清液中的腹膜水平，如图C所示。结论：本方案提供了一种快速且非致死性的猪甲状旁腺获取方法。猪胸腺的获取与透射照明法的应用是体外识别猪甲状旁腺组织的关键。在活体模型中获取并研究甲状旁腺的能力，为科研与治疗开辟了新途

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科研

JoVE Journal

Medicine

医学

从活体供体猪中获取甲状旁腺和 离体 鉴定

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猪模型中的异位自体肾移植：逐步操作方案

获得性甲状旁腺功能减退症小鼠模型对于研究甲状旁腺功能减退症的新药疗法具有重要意义。本文展示了两种构建此类小鼠模型的方法。GFP-PTX...

创建甲状旁腺功能减退小鼠的两种技术：利用GFP标记腺体进行甲状旁腺切除术及白喉毒素介导的甲状旁腺消融

大型动物模型在临床前移植研究中发挥着至关重要的作用。由于该模型与临床实际情况具有高度相似性，本文所述的猪同种原位肾自体移植模型为器官保存技术和治疗干预措施的体内测试提供了理想的实验平台。...

使用24小时器官保存和连续遥测技术在猪模型中进行原位肾自体移植

我们提出了一种利用常温的方案 离体...

一种用于向心脏同种异体移植物递送治疗剂的猪异位心脏移植方案

新型外科能量设备在甲状腺/甲状旁腺手术中的安全应用受到外科医生的关注。动物实验模型可避免在人体手术中进行不必要的试错。本报告旨在展示用于评估甲状腺/甲状旁腺手术中能量设备安全参数的电生理学和热成像方法。...

在猪模型中研究甲状腺和甲状旁腺手术期间外科能量器械的电生理与热成像安全参数

迄今为止，甲状旁腺（PG）识别方法的开发受到临床前研究中缺乏动物模型的限制。本文建立了一种简单且有效的大鼠模型，用于术中甲状旁腺成像，并采用氧化铁纳米颗粒作为新型甲状旁腺对比剂来评估其有效性。...

建立一种简单有效的术中甲状旁腺成像大鼠模型

获得性甲状旁腺功能减退症（HypoPT）的动物模型对于理解HypoPT如何影响矿物质离子稳态以及验证新型治疗方法的有效性至关重要。本文介绍了一种利用碳纳米颗粒进行甲状旁腺切除术（PTX）以建立获得性甲状旁腺功能减退症（AHypoPT）大鼠模型的技术。...

低甲状旁腺大鼠的制备 通过 碳纳米颗粒辅助甲状旁腺切除术

本文介绍了一种用于临床前猪模型中肾脏获取的手术方案，以进行后续的机械灌注或移植。...

大型动物临床前模型中的肾脏获取

学习从活体供体猪中获取甲状旁腺的非致死性技术，通过胸腺取出和透照法进行离体鉴定。该方法支持异种移植研究，为甲状旁腺功能减退症治疗提供新途径。

从活体供体猪获取甲状旁腺离体鉴定

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从活体供体猪获取甲状旁腺 离体 鉴定

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