Name: 小鼠眼模型中视网膜缺血再灌注损伤的诱导 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-20T12:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 10 s
Description: 学习在小鼠眼模型中通过前房穿刺和眼内压升高诱导视网膜缺血再灌注损伤的方法。该模型通过标准化眼内压减少实验变异性，为研究视网膜退行性疾病提供准确平台。

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感谢 David Yee 提供的技术支持。本工作部分由马萨诸塞州狮子会眼科研究基金会和波士顿大学乔巴尼安 &amp;#38; 阿维迪西安医学院 Wing Tat Lee 奖

所有操作均根据波士顿大学机构动物照护与使用委员会批准的动物使用方案进行，符合《美国国立卫生研究院实验动物照护与使用指南》以及视觉与眼科研究协会（ARVO）关于在眼科和视觉研究中使用动物的声明。
1. 实验动物
<ol>
	<li>在标准条件下饲养 C57BL/6J 小鼠。</li>
</ol>
2. 准备所需的溶液和输液管路
<ol>
	<li>在50 mL&#160;注射器中，每只小鼠注入灭菌的0.9% NaCl生理盐水溶液。将注射器置于操作台面以上120 cm的高度。</li>
	<li>将装有溶液的注射器连接至输液管路，并通过三通阀连接管路末端的30 G针头。排出管路中所有气泡。</li>
</ol>
3. 准备工作区
<ol>
	<li>在生理盐水瓶下方设置手术/解剖显微镜。</li>
	<li>取一块海绵，剪出一个约 6 cm × 3 cm 的凹槽，将其牢固地放置于泡沫塑料槽或其他平坦容器中，制成用于固定小鼠的手术床。</li>
</ol>
4. 小鼠麻醉
<ol>
	<li>使用标准剂量的氯胺酮和赛拉嗪混合物对小鼠进行麻醉，确保达到深度麻醉状态。 
	注意：在本方案中，采用腹腔注射氯胺酮 100 mg/kg 和赛拉嗪 10 mg/kg 的混合物，以达到适当的麻醉深度。</li>
	<li>当小鼠在脚趾受压时无肢体回缩反应，且角膜受到轻触时无眨眼反射，表明已达到充分麻醉。若小鼠在麻醉状态下出现任何疼痛迹象（如过度通气或肢体活动），应追加麻醉剂。</li>
</ol>
5. 扩张虹膜
<ol>
	<li>用1滴1%托吡卡胺滴眼液扩张待灌注眼的瞳孔，静置5分钟使其充分扩张。对不进行灌注的眼使用如杆菌肽等眼科药膏。</li>
</ol>
6. 前房插管
<ol>
	<li>将麻醉后的小鼠稳妥地放置在显微镜下的海绵床中。用生理盐水冲洗眼睛，以清除眼表的碎屑或毛发。</li>
	<li>使用无齿镊子轻轻外翻小鼠的一只眼睛。 
	注意：实验中仅使用小鼠的左眼或右眼，不得在同一小鼠上同时使用双眼。</li>
	<li>在输液管关闭的状态下，将针头从角膜缘约 2 mm 处穿刺进入前房。确保针头垂直于周边弯曲的角膜表面刺入角膜，随后略微放平，使其与虹膜平面平行。可适当调整角膜位置以推进针头并维持对眼球的控制。操作时应避免触碰虹膜或晶状体，并防止扩大角膜切口，以免造成液体渗漏。相关细节可进一步参见 Buchi 等人2的描述&#160;。</li>
</ol>
7. 缺血期
<ol>
	<li>转动旋塞以开启灌注管路。检查角膜切口处是否有渗漏。确保随着眼内压升高，角膜逐渐膨胀。 
	注意：如果在角膜膨胀后仍有明显渗漏无法封闭，则无法维持足够的压力，需更换另一只小鼠进行操作。</li>
	<li>使用眼压计确认眼内压已升高至90–100 mmHg。用胶带固定灌注管路，注意小心操作，避免针头移位导致渗漏。</li>
	<li>在灌注眼上涂抹如杆菌肽之类的眼科软膏，防止角膜干燥。将小鼠移离显微镜，并置于加热灯下以维持正常体温，持续监测接下来的60分钟。</li>
	<li>在操作结束前30分钟重新测量眼内压，确保眼内压维持在90–100 mmHg之间。</li>
</ol>
8. 再灌注阶段
<ol>
	<li>60 分钟后，将小鼠放回显微镜下。将生理盐水瓶降至与小鼠同一水平，以平衡眼内压。</li>
	<li>使用眼压计测量眼内压，确认其接近正常值（20 mmHg）。当眼内压恢复正常后，小心拔出针头，避免损伤晶状体或虹膜。</li>
</ol>
9. 术后护理
<ol>
	<li>使用如杆菌肽兽用眼膏等任何眼科抗菌软膏涂抹小鼠眼睛。</li>
	<li>将小鼠置于加热表面，监测1-2小时，直至其从麻醉状态完全恢复。在小鼠恢复足够意识、能够维持胸卧位之前，不得使其无人看管。待小鼠完全恢复后，将其放回笼具和饲养环境中。</li>
</ol>
10. 摘除眼球3
<ol>
	<li>首先通过腹腔注射给予小鼠混合麻醉剂（氯胺酮 100 mg/kg 和赛拉嗪 10 mg/kg），然后通过颈椎脱位法实施安乐死。</li>
	<li>将已安乐死的小鼠置于平坦、干燥且光滑的表面上。用几滴生理盐水冲洗眼睛。</li>
	<li>用镊子轻轻按压外眦，直至眼球移出眼眶并暴露视神经。使用Westcott剪刀沿眼眶边缘剪开，切断眼外肌。</li>
	<li>将Westcott剪刀置于眼眶最靠后的位置，切断视神经。</li>
</ol>
11. 样品固定4
<ol>
	<li>将去核的眼球放入含有4%多聚甲醛的0.1 M PBS溶液中，置于密封小瓶内。3天后取出眼球，转移至70%乙醇溶液的小瓶中，室温过夜保存。</li>
	<li>取出眼球并转移至95%乙醇溶液的小瓶中。随后将小瓶置于密封真空环境中15分钟，取出后再于室温空气中放置45分钟。</li>
	<li>重复真空处理过程，依次将眼球转移至以下溶液中：100%乙醇、100%乙醇、100%二甲苯溶液和100%二甲苯溶液。</li>
	<li>取出眼球并放入洁净的空小瓶中，加入60 °C熔化的石蜡。将小瓶置于60 °C的密封真空烘箱中30分钟，随后在60 °C非真空烘箱中继续放置30分钟。</li>
	<li>取出眼球，转移至洁净的空小瓶中，并加入60 °C熔化的石蜡。于60 °C条件下过夜保存。</li>
</ol>
12. 样品包埋
<ol>
	<li>将眼球转移至金属包埋模具中，在60 °C的加热板上用液化石蜡填充模具，并按所需方向调整眼球位置，以便通过视盘进行切片。在室温（RT）下冷却模具，然后于4 °C保存。</li>
</ol>
13. 样品切片5
<ol>
	<li>将包埋的标本转移至切片机。缓慢修块，直至暴露眼球并使切面包含视盘。</li>
	<li>以5 µm厚度连续切片，形成带状切片并漂浮于水浴中。用镊子小心提起石蜡带，将三个切片组成的带状切片转移至载玻片上，并过夜干燥。</li>
	<li>重复此过程，直至每只眼球获得至少8张以视盘为中心的切片载玻片。</li>
</ol>
14. 染色切片5
<ol>
	<li>将切片置于60 °C烘箱中加热1小时，以熔化石蜡。将切片浸入室温二甲苯中三次，每次5分钟。</li>
	<li>将切片浸入100%乙醇中三次，每次3分钟。用自来水冲洗切片1分钟。</li>
	<li>将切片在苏木精染液中孵育45秒。用自来水冲洗切片2分钟。</li>
	<li>将切片在蓝化试剂中孵育1分钟。用自来水冲洗切片1分钟。</li>
	<li>将切片在伊红染液中孵育15秒。</li>
	<li>将切片依次浸入95%和100%乙醇中各两次，每次1分钟。再将切片浸入100%二甲苯中四次，每次1分钟。然后用封片介质封片。</li>
</ol>
15. 组织学分析6
<ol>
	<li>在显微镜下分析每张视网膜切片，记录视网膜皱褶的数量、各视网膜层（神经节细胞层、内核层、外核层）的细胞丢失百分比、玻璃体或视网膜下出血的存在情况，以及视网膜色素上皮损伤的程度。评分标准的详细信息请参见表1。</li>
</ol>

Mouse Model for Retinal Ischemia-Reperfusion Injury to Study Retinal Pathologies

<ol><li>Lee, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+induced+in+a+mouse+model+of+ischemia-reperfusion+injury+and+its+management+by+pemafibrate+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration induced in a mouse model of ischemia-reperfusion injury and its management by pemafibrate treatment.</a> FASEB J. 36 (9), e22497(2022).</li>
<li>Buchi, E. R., Suivaizdis, I., Fu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pressure-induced+retinal+ischemia+in+rats%3A+An+experimental+model+for+quantitative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Pressure-induced retinal ischemia in rats: An experimental model for quantitative study.</a> Ophthalmologica. 203 (3), 138-147 (1991).</li>
<li>Aerts, J., Nys, J., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+reproducible+and+straightforward+method+to+perform+in+vivo+ocular+enucleation+in+the+mouse+after+eye+opening%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A highly reproducible and straightforward method to perform in vivo ocular enucleation in the mouse after eye opening.</a> J Vis Exp. (92), e51936(2014).</li>
<li>Nayagam, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+processing+eyes+implanted+with+a+retinal+prosthesis+for+localized+histopathological+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Techniques for processing eyes implanted with a retinal prosthesis for localized histopathological analysis.</a> J Vis Exp. (78), e50411(2013).</li>
<li>Pang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Step-by-step+preparation+of+mouse+eye+sections+for+routine+histology%2C+immunofluorescence%2C+and+RNA+in+situ+hybridization+multiplexing%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Step-by-step preparation of mouse eye sections for routine histology, immunofluorescence, and RNA in situ hybridization multiplexing.</a> STAR Protoc. 2 (4), 100879(2021).</li>
<li>Shome, A., Mugisho, O. O., Niederer, R. L., Rupenthal, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+grading+system+for+experimental+autoimmune+uveitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Comprehensive grading system for experimental autoimmune uveitis in mice.</a> Biomedicines. 11 (7), 2022(2023).</li>
<li>Ng, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-melanocyte-stimulating+hormone+maintains+retinal+homeostasis+after+ischemia%2Freperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Alpha-melanocyte-stimulating hormone maintains retinal homeostasis after ischemia/reperfusion.</a> Biomolecules. 14 (5), 525(2024).</li>
<li>Lee, D., Kang, H., Yoon, K. Y., Chang, Y. Y., Song, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+retinal+hypoperfusion+injury+induced+by+unilateral+common+carotid+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">A mouse model of retinal hypoperfusion injury induced by unilateral common carotid artery occlusion.</a> Exp Eye Res. 201, 108275(2020).</li>
<li>Goit, R. K., Taylor, A. W., Lo, A. C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+alpha-melanocyte-stimulating+hormone+protects+retina+after+ischemia%2Freperfusion+injury+in+type+I+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory alpha-melanocyte-stimulating hormone protects retina after ischemia/reperfusion injury in type I diabetes.</a> Front Neurosci. 16, 799739(2022).</li>
<li>Chen, J., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+functional+evaluation+of+ocular+inflammatory+disease+using+the+model+of+experimental+autoimmune+uveitis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Clinical and functional evaluation of ocular inflammatory disease using the model of experimental autoimmune uveitis.</a> Methods Mol Biol. 1899, 211-227 (2019).</li>
</ol>

作者无披露信息。

缺血/再灌注模型为研究视网膜缺血/再灌注损伤的机制和病理提供了可重复的方法。该模型在研究视网膜缺血/再灌注损伤的病理过程以及识别潜在治疗靶点方面具有重要价值。实验方案中的若干关键步骤可能存在挑战，需要一定的技术能力才能成功完成。其中之一是实际的插管操作，该步骤通常需要多次尝试才能掌握，且存在损伤眼部其他结构的风险。此外，角膜切口处可能发生液体渗漏，原因包括插管不当或插管后针头移位等。为降低此类风险，本方案在插管后立即将小鼠固定于海绵装置中以保持其位置稳定。一旦针头和输液管路在此装置上固定，插管眼内的针头便几乎不会发生非预期移动。该模型的一个局限性在于，它引起的是整个视网膜的急性缺血/再灌注，可能与由局部或反复缺血/再灌注损伤所致的视网膜病变存在差异。视网膜在解剖结构和病理生理上的复杂性，导致缺血/再灌注损伤过程中涉及复杂的信号通路。本实验方案模拟了缺血/再灌注事件后视网膜损伤的关键组成部分，有助于更深入理解视网膜变性疾病的病理机制。
其他常用的缺血/再灌注损伤模型包括单侧颈总动脉阻断8,<sup class='x...

缺血/再灌注损伤表现为多种视网膜疾病，包括糖尿病性视网膜病变、青光眼、视网膜血管阻塞及相关血管闭塞性疾病。由于视网膜具有较高的氧需求，因此特别容易受到缺血/再灌注损伤的影响，这一现象与糖尿病性视网膜病变等疾病的发病机制密切相关。此类损伤可导致视网膜神经节细胞（RGCs）死亡、视网膜形态学退变、视网膜功能受损，并最终造成视力障碍1。建立缺血/再灌注模型适用于研究与缺血/再灌注损伤相关的各种视网膜疾病的发病机制及治疗反应。
我们专注于优化小鼠眼部缺血/再灌注损伤的模型。前房灌注法用于建立眼压升高所致的视网膜缺血损伤模型，最早由 Büchi 等人于1991年发表2。他们成功将眼内压升高至110 mmHg，并维持可控的时间。研究发现，由此产生的视网膜损伤与视网膜和脉络膜血管阻塞的病理表现一致。由于该方法操作相对简便且成本较低，因此成为研究视网膜缺血性损伤的有效模型。我们在原有基础上增加了一个步骤：在拔出针头前，先将灌注液源降至与小鼠眼部水平一致的位置。这一改进可防止拔针时眼内形成异常升高的压力梯度，从而避免与缺血/再灌注无关的眼内损伤。
目的是在小鼠模型中建立一种可控且可重复的视网膜缺血/再灌注损伤机制与病理研究模型，同时最大限度地减少操作对眼球造成的损伤。该模型为识别潜在治疗方法以及加深对与血管阻塞相关的视网膜病理的理解提供了途径。

<table><tbody><tr><td>0.5% 丙帕卡因</td><td>Sandoz</td><td>61314-016-01</td><td></td></tr><tr><td>1% 托吡卡胺</td><td>萨默塞特治疗公司</td><td>700069-016-01</td><td></td></tr><tr><td>30 G针头&amp;nbsp;</td><td>Becton Dickinson</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>4% 多聚甲醛</td><td>电子显微镜科学公司</td><td>15700</td><td></td></tr><tr><td>显蓝试剂</td><td>Fisher Scientific</td><td>&amp;nbsp;22-050-114</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J 小鼠</td><td>杰克逊实验室</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>体视显微镜</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>伊红染色</td><td>电子显微镜科学公司</td><td>26051-11</td><td></td></tr><tr><td>苏木精染色</td><td>Electron Microscopy Sciences（Gill's #2）</td><td>26030-20</td><td></td></tr><tr><td>成像仪</td><td>奥林巴斯</td><td>Q-Color 5</td><td></td></tr><tr><td>灌注管路（包含在活体灌注系统中）</td><td>Braintree Scientific</td><td>IV4140</td><td></td></tr><tr><td>氯胺酮&amp;nbsp;</td><td>Covetrus</td><td>10004027</td><td>Zoetis NDC# 00856440301</td></tr><tr><td>显微镜&amp;nbsp;</td><td>奥林巴斯</td><td>CX-33</td><td></td></tr><tr><td>切片机</td><td>微米</td><td>HM335S</td><td></td></tr><tr><td>眼科抗菌软膏&amp;nbsp;</td><td>Henry Schein&amp;nbsp;</td><td>1410468</td><td>Baush &amp;amp; Lomb NDC# 2420879535</td></tr><tr><td>Permount 封片介质</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>Prism</td><td>GraphPad</td><td>10.3.1 版本适用于 macOS</td><td>数据收集、统计分析、图表</td></tr><tr><td>生理盐水</td><td>KD Medical Inc</td><td>50-103-1363</td><td></td></tr><tr><td>三通阀（包含在体内灌注系统中）</td><td>Braintree Scientific</td><td>IV4140</td><td></td></tr><tr><td>眼压计</td><td>iCare</td><td>TA01i</td><td></td></tr><tr><td>赛拉嗪</td><td>Covetrus</td><td>1XYL006</td><td>Covetrus NDC# 11695402401</td></tr></tbody></table>

小鼠眼球模型中视网膜缺血-再灌注损伤的诱导

Induction of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury in a Mouse Eye Model

已知缺血-再灌注损伤可导致多种视网膜病变，包括糖尿病性视网膜病变、青光眼、视网膜血管阻塞及其他血管阻塞性疾病。本文介绍了一种在小鼠模型中诱导缺血-再灌注损伤的方法。该方法通过前房插管连接生理盐水储液器，利用静水压将眼内压升高至90–100 mmHg，从而有效引起视网膜毛细血管收缩，诱发视网膜缺血。缺血期结束（60分钟）后，在拔除前房插管以启动再灌注之前，先将眼内压恢复至正常水平（≤20 mmHg）。缺血/再灌注操作数天后，摘取眼球并进行切片，用于组织学染色。通过评估视网膜损伤的八个参数——皱褶、出血、变形、神经节细胞层、内核层、外核层和光感受器层的细胞丢失，以及视网膜色素上皮细胞的损伤——对视网膜切片的组织病理学变化进行评分。该方法提供了一个可重复的模型，用于研究视网膜缺血/再灌注损伤的机制与病理过程。此外，该模型有助于发现潜在的治疗靶点，以治疗视网膜缺血/再灌注损伤，推动视网膜病变的研究并改善患者预后。

为了评估缺血/再灌注后视网膜的病理变化，分别在手术后2天和7天从小鼠的两组中采集眼球。摘除的眼球用4%多聚甲醛固定，包埋于石蜡中，并切成5 µm厚的切片。切片经苏木精和伊红（H&amp;E）染色后进行组织学成像观察（图1）。染色的组织学图像显示，与术后第2天的小鼠视网膜相比，术后第7天的视网膜细胞损伤和丢失程度更为严重（图1A、B）。
每只眼睛的视网膜组织学评分见（表1）7。在第2天视网膜的大多数层中均观察到个别组织病理学特征评分的变化（图2A），而第7天视网膜的评分更高（图2B）。第2天视网膜的总评分显著高于正常眼（正常眼的平均组织病理学评分为0）（图2C）。第7天视网膜...

本方案通过前房插管并升高眼内压以诱导小鼠眼视网膜缺血，随后恢复正常眼内压以启动再灌注，从而建立视网膜缺血-再灌注损伤模型。

缺血-再灌注损伤已知可导致多种视网膜病变，包括糖尿病性视网膜病变、青光眼、视网膜血管阻塞等。

我们的研究重点是了解眼睛如何自然地防止炎症。研究结果表明，myecorn 通路对于抑制眼内炎症以及促进应激视网膜中的细胞存活至关重要。这提示失活 myecorn 通路可能对治疗视网膜变性疾病具有益处。该方案在拔针前对眼内压进行标准化，以减少对眼部结构的损伤，并将伤害限制在缺血-再灌注成分范围内。这一优化措施可最大限度地降低因物理操作引起的实验变异性，从而提高该模型的准确性。我们的研究推动了一种独特的治疗理念，即不通过中和分子来缓解症状，而是期望细胞能够存活并恢复正常功能。我们专注于改变与疾病相关的细胞行为。由于该方法可诱导细胞恢复正常功能，因此在提供长期疗效以及抵抗慢性疾病复发方面具有巨大潜力。我们的模型为研究小鼠眼部的缺血-再灌注损伤提供了一种优化的技术手段。这可能更准确地反映眼内结构在长期眼内压升高或再灌注损伤情况下所引发的损伤反应。首先，为每只小鼠准备一支连接输液管路和三通阀的无菌0.9%氯化钠盐水注射器，并在管路末端安装30号针头，将装置置于实验台面上方120厘米处。随后，排出管路中的所有气泡。接下来，通过在海绵中切割出一个约六乘三厘米的凹槽，并将其牢固地放置于泡沫塑料孔洞或其他平坦容器中，以制备用于固定小鼠的床。麻醉小鼠后，滴加一滴1%托吡卡胺以散大瞳孔，并等待五分钟使其充分散大。随后，将小鼠稳妥地置于显微镜下的海绵床上。将生理盐水滴入眼睛，以冲洗掉眼表的任何碎屑或毛发。使用无齿镊子轻轻夹住其中一只眼睛。然后，在输液管关闭的情况下，将针头从角膜缘约两毫米处插入前房进行插管。确保针头垂直于周边弯曲的角膜表面刺入角膜，然后略微调整至与虹膜平面平行。转动旋塞以开启灌注管路，并确认角膜切口处无渗漏。随着眼内压升高，应观察到角膜逐渐膨隆。使用眼压计检查眼内压是否已升高至90至100毫米汞柱。用胶带固定灌注管路，确保针头位置不变且不发生渗漏。随后，在眼部涂抹如杆菌肽之类的眼科软膏，以防止角膜干燥。将小鼠置于显微镜外的加热灯下，以维持其正常体温 60 分钟。60 分钟后，将小鼠放回显微镜下。降低生理盐水注射器至小鼠水平位置，以平衡眼内压。使用眼压计测量眼内压，以确认其接近正常值，约为20毫米汞柱。待眼压恢复正常后，小心拔出针头，避免损伤晶状体或虹膜。用眼科抗菌软膏（如兽用杆菌肽眼膏）涂抹小鼠眼睛。将小鼠置于加热的表面上观察一到两个小时，直至其完全从麻醉中恢复。完全恢复后，将小鼠放回笼中。缺血再灌注后第七天的视网膜相较于第二天显示出更严重的细胞损伤和丢失，表明随着时间推移，视网膜变性程度加重。与第2天相比，第7天视网膜多数层次的个体组织病理学评分更高，表明随着时间推移，病理改变加重。第7天的总组织学评分显著高于第2天，提示视网膜损伤明显进展。

induction-of-retinal-ischemia-reperfusion-injury-in-a-mouse-eye-model

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

小鼠眼模型中视网膜缺血再灌注损伤的诱导

本实验方案的目的是通过光化学方法在大鼠的视神经后段诱导缺血性损伤。该模型对于研究视神经后段缺血性病变的病理生理机制、此类及其他视神经病变的治疗策略，以及中枢神经系统其他缺血性疾病的机制至关重要。...

光化学诱导大鼠后部缺血性视神经病变模型

本文介绍了一种通过升高眼内压在小鼠中诱导视网膜缺血-再灌注损伤的方法。通过升高眼内压造成视网膜缺血-再灌注损伤，可模拟人类视网膜因氧气和营养供应受损所导致的病理状态，使研究人员能够探究视网膜神经血管单元相关人类疾病的潜在细胞机制及治疗方法。...

通过升高眼内压建立小鼠视网膜缺血-再灌注损伤模型

我们描述了一种通过使用硅胶包被的缝合线阻塞大脑中动脉来诱导小鼠脑卒中的模型。该方案可用于诱导永久性阻塞，或诱导短暂性缺血后进行再灌注。...

采用大脑中动脉阻塞技术诱导小鼠缺血性卒中与缺血-再灌注及梗死区域的可视化

本方案描述了利用磁夹钳在小鼠耳部皮肤上建立缺血-再灌注（IR）模型的方法。通过使用自行构建的活体成像模型，我们开展研究 体内...

在小鼠耳部皮肤诱导缺血-再灌注损伤以进行活体多光子成像观察免疫反应

虹膜新生血管是缺血性视网膜疾病的常见并发症，可能导致威胁视力的新生血管性青光眼。本文介绍一种用于诱导实验性虹膜新生血管的小鼠实验方案，可用于无创评估调节血管生成的物质。...

穿刺诱导的虹膜新生血管形成作为虹膜红变的小鼠模型

氧诱导的视网膜病变（OIR）可用于模拟缺血性视网膜疾病，如早产儿视网膜病变和增殖性糖尿病视网膜病变，并可作为评估抗血管生成药物治疗新生血管疾病的概念验证研究模型。OIR...

用于啮齿类动物缺血性视网膜疾病的氧诱导视网膜病变模型

本文介绍了一种通过暂时性双侧颈总动脉结扎并结合夹闭法建立的小鼠视网膜缺血模型。该模型有助于理解由心血管异常引发的视网膜缺血的病理机制。...

一种通过短暂双侧颈总动脉阻塞诱导的缺血性视网膜损伤小鼠模型

本方案详细描述了小鼠视网膜平铺片的制备与免疫荧光染色及分析方法。同时详细介绍了小鼠幼崽的荧光素眼底血管造影（FFA）技术及图像处理方法。...

监测氧诱导视网膜病变小鼠模型中视网膜血管的动态生长

本文介绍一种简单且可重复的方法，通过显微操作对小鼠左前降支冠状动脉进行精确结扎，从而诱导心肌梗死或心肌缺血-再灌注损伤。...

小鼠心肌梗死与心肌缺血-再灌注损伤的诱导

本文介绍了视网膜静脉阻塞（RVO）研究中荧光素眼底血管造影（FA）和光学相干断层扫描（OCT）图像的三种数据分析方案。...

体内 小鼠视网膜血管损伤检测指标以促进可重复性

学习在小鼠眼模型中通过前房穿刺和眼内压升高诱导视网膜缺血再灌注损伤的方法。该模型通过标准化眼内压减少实验变异性，为研究视网膜退行性疾病提供准确平台。

小鼠眼球模型中视网膜缺血-再灌注损伤的诱导

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