微流体评估血小板功能

本研究的范围是评估生理条件下的血小板功能。我们专门使用微流体设备和生物表面研究血小板功能。使用这种方法，我们能够回答与血小板功能障碍和止血复苏相关的问题，以便在输血医学中应用。

目前的血小板功能测定通常测试血小板响应所选的特定激动剂而聚集的能力。检测方法可能包括透光或电阻抗，这些检测可能使用过程样品，并且测试停滞不前。通过使用这种微流体方法来测试血小板功能，我们结合了流体动力学以增加生理相关性。

流体动力学在止血过程中参与血小板功能的生物学机制中起着关键作用。对于出血患者，我们特别关注血小板功能，以及可能增强血小板功能以获得更好的结果的治疗干预。使用这种血小板功能测试方法，我们能够跟踪不同血小板群在实验中的贡献，并解锁一种评估创伤和其他出血状况的治疗方案的方法。

首先，将有机硅弹性体底座倒入称重盘中。以 10 比 1 的比例添加有机硅固化剂，并充分搅拌混合物，以确保有机硅聚合物链正确交联。将母模放入培养皿中，将未固化的 PDMS 均匀地倒在模具上。

然后，将培养皿放入真空干燥器中 30 分钟，以去除混合物中的气泡。要完成 PDMS 的固化，请将模具放入设置为 70 摄氏度的烘箱中 90 分钟。PDMS 完全固化后，使用剃须刀片或手术刀切出微流控石膏。

在通道的边缘打孔。现在，将载玻片和蚀刻面朝上的微流体铸件放入等离子清洗剂中。启动真空泵并密封腔室。

然后，将等离子清洁器转到 High 设置，并将设置留在清洁器中 30 秒。之后，关闭等离子清洁器并释放真空。要粘合等离子清洁的石膏和载玻片，请轻轻地将等离子清洁器中朝上的侧面压在一起。

将微流控装置放入 70 摄氏度的烘箱或热板上 10 分钟，以完成装订过程。现在，通过指定出口到指定入口，用 1 型马原纤维胶原试剂涂覆微流体室。将设备存放在温暖、潮湿、密闭的容器中，以防止涂层的胶原蛋白在通道内蒸发。

一小时后，用 PBS 沿涂层的相反方向冲洗设备，以冲洗出胶原蛋白溶液。首先，使用所选的荧光基团将柠檬酸全血与荧光偶联的 CD41 抗体一起孵育。在章动摇杆上对血液染色 30 分钟。

接下来，打开显微镜和相关软件。用显微镜载物台设置撤液注射泵水平，并根据实验要求调整注射泵设置。然后，将微流体装置放在显微镜载物台上，并将其边缘贴在载物台上以防止移动。

现在，将十六分之一英寸内径管连接到弯头连接器，然后连接到带有十六分之一英寸内径连接器的 10 毫升注射器。用无菌 PBS 填充 10 毫升注射器，并将其连接到注射泵。然后，将弯头连接器插入微流体装置的出口。

准备约 10 厘米长的入口管路，一端有弯头连接器，另一端有斜切口。现在，将入口弯头连接器连接到设备入口，并将入口管路定位到放置在倾斜支架上的废微量离心管中。使用 10 倍物镜聚焦在微流体器件通道边缘。

接下来，用 PBS 灌注线。手动推进注射泵以清除通道中的任何 PDMS 或碎屑。检查通道入口和出口附近是否有任何障碍物。

现在，打开保存的图像捕获设置或为每 1 到 2 秒捕获一次的时间序列图像创建新的图像捕获程序，这些图像具有与血液样本中 CD41 抗体相对应的明场通道和荧光通道。获得过滤后的柠檬酸盐血样，并在开始实验前通过上下吹打混合。将样品放在倾斜的微量离心机支架上。

然后，将入口管路放入血液样本中并开始记录图像捕获。慢慢抽出注射器以填充管中的死体积。血液到达通道后，立即按下注射泵上的 Play（播放），以所需的剪切速率恢复流速。

运行实验，直到血小板完全阻塞微流体装置的狭窄区域，或直到实验终点，通常为 10 分钟。实验完成后，停止图像捕获，并停止注射泵。最后，将图像捕获保存到适当的存储中。