Name: 一种高效的单人实验室小鼠牛奶采样技术 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 56 s
Description: 学习小鼠乳汁采集的高效单人操作技术，利用真空装置实现连续抽吸，可在10分钟内收集0.1–0.5毫升样本。该方法减少样本损失，适用于哺乳期研究，为生物流体采样提供可靠工具。

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本工作由 NJAES Hatch 项目 14190 和 NIH R21HD 108496 资助。

所有动物护理和实验程序均遵循联邦指南，并获得罗格斯大学机构动物护理和使用委员会的批准。雌性小鼠（C57BL/6 背景）在 8 周龄时进行交配。它们被饲喂标准繁殖饲料。 随意摄取 并在标准的12小时光照:12小时黑暗循环条件下饲养。分娩当天记为产后第1天（PD1）。在PD2（初乳期）和PD10（泌乳高峰期）按照下述方法采集乳汁样本。
1. 挤奶装置的组装
<ol>
	<li>将内径为 5/32'' 的聚氯乙烯（PVC）管一端连接至真空泵，并用胶带固定连接处（如图 1A中标记为a处）。 
	注意：真空泵可用实验室中任何合适的泵或中央真空系统（有时称为“房屋真空”）替代。</li>
	<li>通过带倒刺的直通接头，将内径为 5/32'' 的 PVC 管另一端与内径为 1/8'' 的 PVC 管连接。</li>
	<li>通过接头，将内径为 1/8'' 的 PVC 管另一端连接至一支 18G 注射针头（如图 1A中标记为b处）。</li>
	<li>将 P200 移液器吸头末端剪去约 0.2 cm，以形成更大的开口。将 P200 移液器吸头从隔膜塞的开口处插入，使吸头朝上（如图 1B所示）。 
	注意：在不同动物之间应更换移液器吸头。</li>
	<li>将隔膜塞安装到无菌收集管上。用 18G 注射针头在隔膜塞上刺穿一个孔。</li>
	<li>开启真空泵，并用戴有实验室手套的手指抵住移液器吸头的开口，以检查吸力大小。 
	注意：若组装正确，应能感受到轻柔的吸力。收集管、18G 注射针头和 P200 移液器吸头均应保持无菌。</li>
</ol>
<img alt="乳汁提取过程；真空泵示意图；小鼠实验；试管中的样品收集。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67669/67669fig1.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图1"> 
图1：挤奶装置。（A）挤奶装置，其中真空泵通过PVC管连接至一支18 G的皮下注射针头。针头穿过与微型离心收集管相连的隔膜塞。一个倒置的P-200移液器吸头插入隔膜塞的开口中，用于从乳头吸取乳汁。（B）挤奶装置的横截面示意图。（C）使用所述方法对一只母鼠进行挤奶。（D）从泌乳高峰期母鼠收集到的一份代表性乳汁样品（0.3 mL）。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67669/67669fig1large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
2. 将母鼠与幼崽分离
<ol>
	<li>在挤奶当天，将母鼠与其幼崽分离，以使乳汁在乳腺中积聚。</li>
	<li>将幼崽置于巢穴中保持温暖。</li>
	<li>若在泌乳早期（如本研究中的产后第2天）采集乳汁，需分离2小时。</li>
	<li>若在泌乳高峰期（如本研究中的产后第10天）采集乳汁，需分离30–45分钟。</li>
</ol>
3. 母体麻醉
<ol>
	<li>当母鼠准备进行泌乳时，向腹腔一侧注射氯胺酮/赛拉嗪溶液（腹腔注射，i.p.）th 和 5th 一对乳头 
	注意：麻醉剂溶液的给药剂量需根据母鼠体重计算（按照罗格斯大学IACUC方案，每公斤体重给予80–100 mg氯胺酮和5–12 mg赛拉嗪）。该剂量可使小鼠镇静45–60分钟，足以完成乳汁采集。</li>
	<li>通过用力挤压动物足部（以不造成损伤为限）来确认麻醉效果，以检测动物对感觉和疼痛的反应。充分的麻醉表现为完全无任何类型的运动反应。</li>
	<li>为母鼠眼部涂抹兽医眼科用软膏，以防止麻醉期间角膜干燥。</li>
</ol>
4. 乳汁采集
<ol>
	<li>将麻醉后的母鼠仰卧置于坚固的工作台面上。用无菌酒精消毒巾轻轻擦拭其乳腺区域，以在挤奶前清洁该区域。</li>
	<li>在第4次给药期间，腹腔注射1–2单位的催产素th 和 5th 腹腔未注射一侧的乳头对 
	注意：催产素是一种小分子，可被快速吸收且半衰期较短 14,15注射后应在一分钟内开始采乳。</li>
	<li>用非惯用手轻轻抓住母鼠颈部的皮肤以固定。</li>
	<li>通过从乳头基部向尖端挤压乳腺组织，手动挤出乳汁，直至可见乳滴。</li>
	<li>打开电源按钮以启动真空装置。</li>
	<li>通过将倒置的P200移液器吸头轻轻接触乳头开始挤奶。使用轻柔的牵拉动作帮助乳汁排出。图1C).</li>
	<li>重复步骤 4.4–4.6，直至采集到足够体积的乳汁。 
	注意：挤奶过程中，乳汁可能意外吸入18 G皮下注射针头或真空管路的PVC管中。可在挤下一只动物前更换针头或PVC管以轻松解决此问题。</li>
</ol>
5. 乳汁采集后母鼠的恢复
<ol>
	<li>将麻醉后的母鼠放回与其幼崽同笼，并保持温暖。持续监测动物，直至其恢复意识。 
	注意：若让母鼠在单独的笼子中自行苏醒后再放回幼崽身边，母鼠可能拒绝再次哺乳。这种情况在哺乳早期（PD2）进行乳汁采集时更为常见。</li>
	<li>当母鼠开始苏醒时，允许其暂时离开幼崽以完成恢复过程；此为正常行为。 
	注意：我们观察到母鼠会周期性地返回幼崽身边，并在数小时后完全恢复哺乳行为。</li>
</ol>
6. 牛奶分析
<ol>
	<li>使用商用乳糖检测试剂盒（参见材料表）测定乳汁中的乳糖含量。用无菌水将乳汁稀释75倍，然后按照试剂盒说明书进行检测。</li>
	<li>采用其他文献中所述的奶油离心法（creamatocrit method）测定乳汁脂肪含量16,17。</li>
	<li>使用牛血清白蛋白作为标准品，通过Bradford蛋白测定法18估算乳汁蛋白含量19。检测前，在4 °C条件下以4,000 × g离心15分钟。用移液器吸取下层液体（infranatant），用无菌水稀释10倍后进行检测。</li>
	<li>进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）；按照制造商说明，将10 µg蛋白质在预制的4%–12% Bis-Tris凝胶中分离。将蛋白质转移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，并用考马斯亮蓝R-250（Coomassie Blue R-250）染色。</li>
</ol>

Optimized Single&mdash;Person Method for Milk Collection in Lactation Studies of Mice

<ol><li>Ericsson, A. C., Crim, M. J., Franklin, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brief+history+of+animal+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Mo+Med%22%5BJournal%5D)">A brief history of animal modeling.</a> Mo Med. 110 (3), 201-205 (2013).</li>
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<li>Robinson, A. M., Williamson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+glucose+metabolism+in+the+lactating+mammary+gland+of+the+rat+in+vivo+and+in+vitro.+Effects+of+starvation%2C+prolactin+or+insulin+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Comparison of glucose metabolism in the lactating mammary gland of the rat in vivo and in vitro. Effects of starvation, prolactin or insulin deficiency.</a> Biochem J. 164 (1), 153-159 (1977).</li>
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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

我们展示了一种改良的挤奶技术，可由一人使用一种易于组装且便携的装置完成。传统上，啮齿类动物乳汁的采集使用毛细管10,17、玻璃巴斯德移液管12或微量移液器11。这些方法需要一人固定母鼠并手动挤奶，另一人负责收集乳汁。这在某些情况下可能具有挑战性，尤其是在周末或节假日期间进行乳汁采样时。通过这些方法采集的乳汁必须转移至无菌储存管中。由于啮齿类动物乳汁的脂肪含量相对较高（如本研究及其他研究20,21所示），因而较为黏稠，转移乳汁的过程可能导致乳汁体积损失，从而限制后续分析所需的样本量。本文所述装置可在5分钟内利用实验室常见工具完成组装，单人操作可在10分钟内采集到足够的乳汁量。该方法采用持续轻柔的负压抽吸，使乳汁直接持续进入收集管，避免了因转移操作导致的样本损失。在产后第2天（PD2）即开始采集乳汁时，尽量减少样本损失尤为重要，因为此阶段的乳汁产量已知相对较低10。此外，相同的装置和方案已成功用于另一小鼠品系（FVB/N背景）的乳汁采集，表明该方法在不同小鼠品系中可能均具有良好的适用性。
本研究中，我们还观察到分离时间可能因泌乳阶段的不同而有所差异。既往研究表明，为获得足够的乳汁量，应在采集乳汁前将母鼠与其幼崽分离至少 2 小时，最长可达 16 小时11,13。采用该方法时，我们发现，在泌乳早期（PD2）将母鼠与其幼崽分离 2 小时，而在泌乳高峰期（PD10）仅分离 30–45 分钟，即可获得足够的乳汁量。由于母鼠从麻醉中恢复还需额外时间，因此缩短分离时间不仅可减少采样所需总时长，还能降低对母鼠及其幼崽可能造成的不利影响。
此外，我们发现，在产后第2天（PD2）即采集乳汁可能会因母鼠长时间的分离与恢复，导致幼鼠后续生长受到不利影响，出现喂养不足的阶段。而在泌乳高峰期（PD10）采样时未观察到此现象。因此，若研究者希望在21天的泌乳期内于不同时间点采集乳汁，建议从另一组母鼠中采集早期泌乳乳汁。然而，在泌乳高峰期和后期，可在同一只母鼠身上多次进行乳汁采集，以开展纵向研究。
此外，研究人员可选择其他麻醉剂以缩短母体的恢复时间。例如，吸入异氟烷可能有助于缩短恢复时间，因为动物在停止吸入异氟烷后通常能迅速恢复22。尽管许多研究采用这种麻醉方式13,23，但有报道称吸入异氟烷可能对采集的乳汁量产生不利影响13。此外，异氟烷吸入需要配备适当的设备，以确保剂量的精确控制。目前关于氯胺酮/赛拉嗪和异氟烷等麻醉剂对泌乳、乳汁成分及其向乳汁中转移的潜在影响的研究仍较为有限24,25,26。因此，在比较使用不同麻醉方式的研究时，应谨慎进行数据分析和解释。另一种选择是不使用麻醉剂进行乳汁采样，如其他研究人员所述14,27,28,29。然而，该方法可能给母体带来过度应激，并需要额外人员协助固定动物。
本研究还表明，可使用乳汁样本进行宏量营养素检测，且仍有剩余样本可用于其他实验，如组学分析。测定了乳汁中乳糖、蛋白质和脂肪的水平，并与已发表的数据进行比较，以验证所述方法。乳汁中乳糖浓度约占乳汁成分的~1.2%，与此前其他研究中对照饮食小鼠的数据相似30,31,32。小鼠乳汁中脂肪含量较高，为26%至33%，与先前报道一致20,30。本研究报道的总蛋白浓度与Chen等30的报道相近，但低于其他研究的结果31,32。在从早期到泌乳高峰期的变化方面，我们发现乳糖和蛋白质水平相对稳定，但乳脂百分比从早期到泌乳高峰期有所上升。该结果与Ragueneau32的报道不一致，但差异可能源于样本量的不同。尽管早期和泌乳高峰期的总蛋白浓度相似，但我们发现个别蛋白质丰度（αS1-酪蛋白、β-酪蛋白和乳清酸性蛋白）存在变化，可能反映了新生仔鼠在不同发育阶段需求的改变。
尽管该技术无法直接定量乳汁产量，但可利用Falconer于1947年提出的性能指数（IOP）进行计算33。乳汁产量在很大程度上依赖于仔鼠数量和采样时间。该指数可用于衡量不同仔鼠数量条件下的乳汁产量。例如，可在产后第10天（PD10）称量整窝仔鼠的重量（此时将母鼠分离以采集乳汁）。母鼠的IOP通过将其仔鼠重量除以同窝仔数在PD10的平均仔鼠重量来计算。综上所述，我们展示了一种高效的单人操作技术，用于从实验小鼠采集乳汁，所用装置可由相对廉价且易于获取的设备简便组装而成。该技术能够稳定地收集到足量乳汁，适用于大多数分析检测。

比较医学是指人类与其他动物在解剖学和生理学上具有相似性；因此，从一个物种获得的信息可用于研究另一物种中类似的生理通路1,2. 自20世纪初以来th 一个世纪以来，啮齿类动物（尤其是小鼠和大鼠）因其在疾病模型构建中易于进行基因操作，而被广泛应用于生物医学研究1,2此外，它们体型相对较小，因此与其它非啮齿类哺乳动物模型相比，维持种群所需的资源更少2然而，它们体型较小也带来了一些挑战。某些操作在小鼠身上难以顺利实施。例如，动静脉差值法可在大鼠身上进行3,4,5，但在小鼠中可能具有挑战性，因为它们的血管较细小，容易破裂6,7从小鼠中可采集的组织量也有限。例如，在哺乳期小鼠中，内脏脂肪组织的体积显著减小8,9 在某些情况下，目标物质的含量甚至几乎降至无法检测的水平。此外，从小鼠采集的生物流体样本量也有限；采血量因技术不同而有所差异，但总体上均受到一定限制。7，限制了可进行的分析数量。
在哺乳与新生儿发育研究中，需要采集乳汁以评估其成分和泌乳量。在小鼠研究中，由于乳汁体积有限，通常需要将多只母鼠的乳汁混合，以获得足够的样本量10。已有若干研究报道了从单只小鼠采集足量分析用乳汁的技术11,12,13。然而，这些方法通常需要两名经过培训的人员11,12：一人固定动物并手动挤奶，另一人用移液器收集乳汁；或者需要使用实验室中不易获得的设备和工具。本文中，我们展示了一种对DePeters和Hovey所设计技术的改进方法14。本方法所用装置可利用实验室现有设备轻松组装，或从常规供应商处方便购买。使用该装置，单人通常可在10分钟内常规获取0.1–0.5 mL的小鼠乳汁，适用于大多数分析。我们在分娩后第2天（PD2，早期哺乳期）和分娩后第10天（PD10，泌乳高峰期）采集乳汁，并测定乳汁中的宏量营养素，以验证该方法的有效性。

<table><tbody><tr><td>1 mL 冻存管</td><td>Corning</td><td>430658</td><td>推荐用于早期乳汁采集</td></tr><tr><td>1 mL 注射器</td><td>Exel</td><td>26048</td><td></td></tr><tr><td>2 mL 微量离心采集管</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-681-344</td><td>推荐用于高峰期和晚期乳汁采集</td></tr><tr><td>18 G 注射针头</td><td>BD PrecisionGlide</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>27 G 注射针头</td><td>BD PrecisionGlide</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>酒精消毒片</td><td>Honeywell</td><td>154818</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad 蛋白检测试剂浓缩液</td><td>Bio-Rad</td><td>5000006</td><td></td></tr><tr><td>牛血清白蛋白</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>Immobilon-P PVDF 膜</td><td>Immobilon</td><td>IPVH00010</td><td></td></tr><tr><td>氯胺酮</td><td>Dechra</td><td>1000001250</td><td>通过兽医办公室购买&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>实验室标签胶带</td><td>VWR International</td><td>89097</td><td></td></tr><tr><td>乳糖检测试剂盒</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MAK487</td><td></td></tr><tr><td>微型带倒钩聚丙烯接头</td><td>Cole-Parmer Instrument Company</td><td>6365-90</td><td></td></tr><tr><td>小鼠饲料</td><td>Lab Diet</td><td>5015</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE Bis-Tris Mini 蛋白凝胶，4&amp;ndash;12%</td><td>Invitrogen</td><td>NP0335BOX</td><td></td></tr><tr><td>Optixcare 眼部润滑膏</td><td>Aventix</td><td>N/A</td><td>通过兽医办公室购买&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>催产素</td><td>Bimeda</td><td>1OXY015</td><td>通过兽医办公室购买&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>P200 移液器吸头</td><td>Gilson</td><td>F1733001</td><td></td></tr><tr><td>PVC 管：1/8'' 内径</td><td>VWR International</td><td>MFLX07407-75&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PVC 管：5/32'' 内径</td><td>VWR International</td><td>MFLX07407-77</td><td></td></tr><tr><td>隔垫塞</td><td>Chemglass Life Sciences</td><td>CG-3022-91</td><td></td></tr><tr><td>真空泵</td><td>Drummond Scientific Co.</td><td>P-103635</td><td></td></tr><tr><td>赛拉嗪</td><td>Akorn Animal Health</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>通过兽医办公室购买&amp;nbsp;</td></tr></tbody></table>

一种高效的单人操作实验室小鼠乳汁采集技术

An Efficient Single-Person Technique for Milk Sampling from Laboratory Mice

自20世纪初以来，啮齿类动物模型已广泛应用于生物学研究，以探索基础生理学和生物化学机制。在哺乳及新生儿发育研究中，常需采集乳汁以分析其成分，并确定实验干预如何影响乳汁，从而影响新生儿的发育。从小型啮齿类动物中采集足量的生物液体可能较为困难。已有若干研究报道了从小鼠获取乳汁的不同技术。然而，这些技术通常至少需要两名经过培训的人员操作，在某些情况下可能难以实现。&#160;
本文展示了一种改进的乳汁采样技术，该方法基于2009年发表的一种技术。通过这种经济且易于组装的方法，一名经过培训的人员可在10分钟内，从处于麻醉状态的母体中常规采集0.1–0.5 mL的乳汁。利用该方法，我们在分娩后第2天（PD2）和分娩后第10天（PD10）成功采集了足量的乳汁样本。我们测定了乳汁中的宏量营养成分，并将其与现有文献数据进行比较，以验证本采集方法的可靠性。&#160;
我们记录到，在产后第2天（PD2），乳蛋白平均为70.1 ± 5.2 g/L，乳脂为174.4 ± 7.1 g/L，乳糖为12.3 ± 0.6 g/L。在产后第10天（PD10），尽管乳糖和乳蛋白浓度与PD2时相近，但乳脂显著升高（224.4 ± 17.1 g/L）。我们还观察到，单个乳蛋白的相对丰度在PD2和PD10之间存在差异。具体而言，与PD2相比，PD10时αS1-酪蛋白和乳清酸性蛋白含量较高，而β-酪蛋白含量较低。总体而言，我们展示了一种高效的单人操作小鼠乳汁采样技术，该方法使用常见实验室设备即可轻松组装所需装置。

利用该技术，我们成功地在21天哺乳期内的不同时间点采集了足够的乳汁样本。我们将分娩当天记为产后第1天（PD1），在本研究中分别于PD2（早期哺乳期）和PD10（泌乳高峰期）采集乳汁样本，每组n = 4。每只母鼠均可轻松采集到0.1–0.5 mL乳汁（图1D）。为验证该方法的可行性，我们测定了这些乳汁样本的总宏量营养素组成，并采用Student's t-检验比较早期哺乳期与泌乳高峰期所采集乳汁成分的差异。
我们发现 乳糖 浓度在PD2时平均为12.3 ± 0.6 g/L，在PD10时为12.0 ± 0.9 g/L（表1). 乳脂 百分比在PD2和PD10时分别为26.0 ± 1.0%和33.4 ± 2.5%。脂肪浓度在PD2时为174.4 ± 7.1 g/L，在PD10时显著升高，达到224.4 ± 17.1 g/L（表1）。平均 蛋白 PD2 时含量为 70.1 ± 5.2 g/L，PD10 时为 75.1 ± 2.6 g/L（表1）。尽管PD2和PD10的总乳蛋白含量无显著差异，但各乳蛋白的相对丰度存在差异。具体而言，αS1-酪蛋白和乳清酸性蛋白在PD10乳汁中的相对丰度高于PD2乳汁（p &lt; 0.05），而β-酪蛋白（β-casein）p &lt; 0.05）在PD2中的丰度高于PD10（图2).
<img alt="SDS-PAGE 和条形图分析蛋白质表达模式；PD2 与 PD10 样品；相对丰度。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67669/67669fig2.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图 2"> 
图 2：乳汁蛋白质分析。 （A）对分娩后第 2 天（PD2）和第 10 天（PD10）收集的乳汁进行考马斯亮蓝染色的 PAGE 分析。蛋白质鉴定方法如前所述14。 （B）使用 ImageJ 分析各蛋白质条带信号，并以总蛋白染色量为基准进行归一化。结果以平均值±标准误差表示，单个数据点以圆点标出。采用双尾 Student’s t-检验比较 PD2 与 PD10 各蛋白质的平均丰度。*p &lt; 0.05，n = 4。缩写：PAGE = 聚丙烯酰胺凝胶电泳；PDn = 分娩后第 n 天。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67669/67669fig1large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="2"></td>
			<td>平均值</td>
			<td>标准误</td>
			<td>p值</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">乳糖 
			(g/L)</td>
			<td>PD2</td>
			<td>12.3</td>
			<td>0.6</td>
			<td rowspan="2">0.75</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD10</td>
			<td>12.0</td>
			<td>0.9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">脂肪 
			(g/L)</td>
			<td>PD2</td>
			<td>174.4</td>
			<td>7.1</td>
			<td rowspan="2">0.04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD10</td>
			<td>224.4</td>
			<td>17.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">蛋白质 
			(g/L)</td>
			<td>PD2</td>
			<td>70.1</td>
			<td>5.2</td>
			<td rowspan="2">0.42</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PD10</td>
			<td>75.1</td>
			<td>2.6</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表1：产后第2天（PD2）和产后第10天（PD10）采集乳汁的主要营养成分组成。 结果以平均值±平均值的标准误（SEM）表示，采用双尾Student t检验分析哺乳天数对乳汁成分的影响，n = 4。

本文介绍了一种用于采集实验小鼠乳汁的装置的组装方法。该装置成本低廉、便于携带，由经过培训的人员操作可采集0.1–0.5 mL乳汁。文中还包含详细的挤奶操作流程。&#160;

自20世纪初以来，啮齿类动物模型已被广泛用于生物学研究，以探索基础生理学和生物化学机制。在哺乳和……

本研究聚焦于改进哺乳期研究中的乳汁采样技术，特别是在小鼠中的应用。我们提出了一种方法，可克服样本损失、采样量有限以及操作繁琐等挑战，为啮齿类动物乳汁采集提供了一种简化的解决方案，成为该领域研究人员的有力工具。在小鼠研究中面临的主要挑战之一是其体型较小，尤其是在采集乳汁等生物液体时更为突出。若不通过合并样本或由两人手动采集，则很难获得足够的采集量，这使得该过程在许多情况下不够实用。我们的方案通过使用 readily available 的实验工具，使单人可在 10 分钟内采集到足够的样本量，从而简化了乳汁采集流程。与其他方法不同，该方法采用持续负压吸引，将乳汁直接吸入收集管中，最大限度减少了样本损失，节省了时间，并保留了用于分析的样本体积。首先，将内径为 5/32 英寸的 PVC 软管一端连接至真空泵，并用胶带固定连接处。使用带倒刺的直通接头，将内径为 5/32 英寸的 PVC 软管另一端连接至内径为 1/8 英寸的 PVC 软管。接着，使用接头将内径为 1/8 英寸的 PVC 软管另一端连接至一支 18 号规格的皮下注射针头。使用剪刀剪去 P200 枪头末端约 0.2 厘米，以形成较大的开口。将改造后的 P200 枪头从隔膜塞的开口处插入，使枪头朝上，并将隔膜塞固定在无菌收集管上。使用 18 号皮下注射针头穿刺隔膜塞。现在，打开真空泵，用戴着手套的手指堵住移液管尖端开口，以检查吸力压力。在采奶当天，将母鼠与其幼崽分离，使乳汁在乳腺中积聚。将幼崽保持温暖并置于巢穴中。对母鼠进行麻醉后，用力挤压其一只脚趾，以评估动物对感觉和疼痛的反应。然后，将兽用眼科软膏涂抹于母鼠眼部，以防止其在麻醉期间眼睛干涩。将麻醉后的母鼠仰卧置于坚固的工作台面上。使用无菌酒精擦拭巾轻轻清洁母鼠的乳腺区域。在未接受过注射的腹腔一侧，于第四和第五对乳头之间腹膜内注射 1 至 2 个单位的催产素。用非惯用手轻轻抓握母鼠颈部皮肤，然后从乳头基部向顶端挤压乳腺组织，直至可见乳滴。按下电源按钮开启真空装置。开始挤奶时，将倒置的P200移液器吸头轻轻套在乳头上，用轻柔的抽吸动作将乳汁抽出。依次挤取所有乳头，直至收集到足够的乳汁量。随后，将麻醉后的母鼠放回笼中，并确保其在麻醉恢复期间保持温暖。每只母鼠可在10分钟内舒适地采集0.1至0.5毫升的乳汁。乳汁脂肪浓度从分娩后第2天的174.4克/升显著增加至分娩后第10天的224.4克/升。产后第2天与产后第10天的乳糖和总蛋白浓度未显示出显著差异。与产后第2天的乳汁相比，产后第10天乳汁中α-S1-酪蛋白和乳清酸性蛋白的相对丰度更高，而β-酪蛋白在产后第2天乳汁中的丰度则高于产后第10天乳汁。电泳凝胶上蛋白质条带的强度在视觉上证实了各乳蛋白相对丰度的差异。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

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小鼠面部静脉采血

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一种高效的单人操作实验室小鼠乳汁采集技术

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