一种高效的单人实验室小鼠牛奶采样技术

本研究的重点是改进哺乳研究中的牛奶采样技术，尤其是小鼠。我们提出了一种方法，该方法克服了样品损失、体积有限和劳动密集型过程等挑战，为啮齿动物牛奶采集提供了简化的解决方案，并为该领域的研究人员提供了有价值的工具。在小鼠中进行研究的最大挑战之一是它们的体积小，尤其是在对牛奶等生物流体进行采样时。

如果不混合样品或由两个人手动收集样品，就很难获得足够的体积，这使得该过程在许多情况下不太实用。我们的方案允许一个人使用现成的实验室工具在 10 分钟内收集足够的牛奶量，从而简化了牛奶收集。与其他方法不同，它通过连续抽吸最大限度地减少样品损失，将牛奶直接吸入收集管，节省时间并保留分析体积。

首先，将 5/32 英寸内径 PVC 管的一端连接到真空泵上，并用胶带固定附件。使用带倒钩的直连接器，将 5/32 英寸内径 PVC 管的另一端连接到 1/8 英寸内径 PVC 管。接下来，使用连接器将 1/8 英寸内径 PVC 管的另一端连接到 18 号皮下注射针头。

使用剪刀剪下 P200 移液器吸头的末端，大约 0.2 厘米，以形成一个更大的开口。将改良的 P200 移液器吸头插入隔膜塞的开口，使吸头朝上，然后将隔膜塞连接到无菌收集管上。使用 18 号皮下注射针，刺穿隔膜塞。

现在，打开真空泵，将戴手套的手指放在移液器吸头开口上，检查吸力压力 在挤奶当天，将母乳与幼崽分开，让乳汁积聚在腺体中。让幼崽在巢中取暖。麻醉 dam 后，用力挤压 dam 的一英尺，以评估动物对感觉和疼痛的感知。

然后，将兽用眼药膏涂抹在母细胞的眼睛上，以防止麻醉时干燥。将麻醉的 dam 仰卧在坚固的工作表面上。用无菌酒精制备湿巾轻轻清洁分流坝的乳房区域。

在未接受任何注射的腹膜腔一侧的第四对和第五对之间腹膜内注射一到两个单位的催产素。用非惯用手轻轻划动胶膜的颈部区域。然后，从奶嘴底部到尖端挤压乳腺组织，直到看到奶珠。

按下电源按钮打开真空设备。要开始挤奶，将倒置的 P200 移液器吸头轻轻地贴在上，然后轻轻拉动吸出牛奶。对所有挤奶，直到收集到足够量的奶。

之后，将麻醉的母带放回笼子，并确保她在麻醉恢复期间保持温暖。在 10 分钟内，可以从每个母乳中舒适地收集 0.1 至 0.5 毫升的牛奶。乳脂浓度从分娩后第二天的每升 174.4 克/升显着增加到分娩后第 10 天的每升 224.4 克。

乳糖和总蛋白浓度在分娩后第 2 天和分娩后第 10 天之间没有显示出显着差异。与分娩后第 2 天的牛奶相比，第 10 天的牛奶中 α-S1-酪蛋白和乳清酸蛋白的相对丰度更高，而第 2 天的牛奶中的 β-酪蛋白比第 10 天的牛奶中更丰富。电泳凝胶上的蛋白质条带强度目测证实了单个牛奶蛋白相对丰度的差异。