Name: 研究骨髓细胞和 CAR T 细胞在体外和体内的相互作用 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-25T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 14 s
Description: 了解简化体外和体内模型，用于研究人免疫抑制性巨噬细胞与CAR T细胞在套细胞淋巴瘤中的相互作用，并测试巨噬细胞靶向免疫疗法。

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本研究部分由梅奥诊所综合癌症中心（SSK）、梅奥诊所个体化医学中心（SSK）、梅奥诊所再生生物治疗中心（SSK）、美国国立卫生研究院资助项目R37CA266344-01（SSK）以及美国国防部资助项目CA201127（SSK）提供资金支持。

<ol><li>Yun, K., Siegler, E. L., Kenderian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Who+wins+the+combat%2C+CAR+or+TCR%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Who wins the combat, CAR or TCR.</a> Leukemia. 37 (10), 1953-1962 (2023).</li>
<li>Neelapu, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axicabtagene+Ciloleucel+CAR+T-Cell+Therapy+in+Refractory+Large+B-Cell+Lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+J+Med%22%5BJournal%5D)">Axicabtagene Ciloleucel CAR T-Cell Therapy in Refractory Large B-Cell Lymphoma.</a> New England J Med. 377 (26), 2531-2544 (2017).</li>
<li>Shah, N. N., Fry, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+resistance+to+CAR+T+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of resistance to CAR T cell therapy.</a> Nat Rev Clin Oncol. 16 (6), 372-385 (2019).</li>
<li>Kiss, M., Caro, A. A., Raes, G., Laoui, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Reprogramming+of+Monocytes+in+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Fronti+Oncol%22%5BJournal%5D)">Systemic Reprogramming of Monocytes in Cancer.</a> Fronti Oncol. 10, (2020).</li>
<li>Rodriguez-Garcia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cell-mediated+depletion+of+immunosuppressive+tumor-associated+macrophages+promotes+endogenous+antitumor+immunity+and+augments+adoptive+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">cell-mediated depletion of immunosuppressive tumor-associated macrophages promotes endogenous antitumor immunity and augments adoptive immunotherapy.</a> Nat Commun. 12 (1), (2021).</li>
<li>Kankeu Fonkoua, L. A., Sirpilla, O., Sakemura, R., Siegler, E. L., Kenderian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cell+therapy+and+the+tumor+microenvironment%3A+Current+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Oncolyt%22%5BJournal%5D)">CAR T cell therapy and the tumor microenvironment: Current challenges and opportunities.</a> Mol Ther Oncolyt. 25, 69-77 (2022).</li>
<li>Stroncek, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elutriated+lymphocytes+for+manufacturing+chimeric+antigen+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Elutriated lymphocytes for manufacturing chimeric antigen receptor T cells.</a> J Trans Med. 15 (1), (2017).</li>
<li>Stroncek, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+cells+in+peripheral+blood+mononuclear+cell+concentrates+inhibit+the+expansion+of+chimeric+antigen+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Myeloid cells in peripheral blood mononuclear cell concentrates inhibit the expansion of chimeric antigen receptor T cells.</a> Cytotherapy. 18 (7), 893-901 (2016).</li>
<li>Sterner, R. M., Cox, M. J., Sakemura, R., Kenderian, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+crispr%2Fcas9+to+knock+out+gm-csf+in+car-t+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using crispr/cas9 to knock out gm-csf in car-t cells.</a> J Vis Exp. (149), e59629(2019).</li>
<li>Ali, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-1+blockade+and+CDK4%2F6+inhibition+augment+nonoverlapping+features+of+T+cell+activation+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">PD-1 blockade and CDK4/6 inhibition augment nonoverlapping features of T cell activation in cancer.</a> J Exp Med. 220 (4), e20220729(2023).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+and+Metabolomic+Characterization+of+SARS-CoV-2-Infected+Cynomolgus+Macaque+at+Early+Stage%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Proteomic and Metabolomic Characterization of SARS-CoV-2-Infected Cynomolgus Macaque at Early Stage.</a> Front Immunol. 13, 954121(2022).</li>
<li>Ruella, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+the+immunosuppressive+tumor+microenvironment+of+Hodgkin+lymphoma+using+chimeric+antigen+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Dis%22%5BJournal%5D)">Overcoming the immunosuppressive tumor microenvironment of Hodgkin lymphoma using chimeric antigen receptor T cells.</a> Cancer Dis. 7 (10), 1154-1167 (2017).</li>
<li>Sakemura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Clinically+Relevant+Reporter+for+Chimeric+Antigen+Receptor+T-cell+Expansion+Trafficking%2C+and+Toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Res%22%5BJournal%5D)">Development of a Clinically Relevant Reporter for Chimeric Antigen Receptor T-cell Expansion Trafficking, and Toxicity.</a> Cancer Immunol Res. 9 (9), 1035-1046 (2021).</li>
<li>Sterner, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GM-CSF+inhibition+reduces+cytokine+release+syndrome+and+neuroinflammation+but+enhances+CAR-T+cell+function+in+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">GM-CSF inhibition reduces cytokine release syndrome and neuroinflammation but enhances CAR-T cell function in xenografts.</a> Blood. 133 (7), 697-709 (2019).</li>
<li>Smith, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Three-Dimensional+Skin+Disease+Model+to+Assess+Macrophage+Function+in+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Meth%22%5BJournal%5D)">A Novel Three-Dimensional Skin Disease Model to Assess Macrophage Function in Diabetes.</a> Tissue Eng Meth. 27 (2), 49-58 (2021).</li>
<li>Nowak, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pro-inflammatory+monocyte+profile+in+patients+with+major+depressive+disorder+and+suicide+behaviour+and+how+ketamine+induces+anti-inflammatory+M2+macrophages+by+NMDAR+and+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Pro-inflammatory monocyte profile in patients with major depressive disorder and suicide behaviour and how ketamine induces anti-inflammatory M2 macrophages by NMDAR and mTOR.</a> EBioMedicine. 50, 290-305 (2019).</li>
<li>Ajith, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+Mouse+Model+as+a+Novel+Approach+in+the+Assessment+of+Human+Allogeneic+Responses+in+Organ+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Humanized Mouse Model as a Novel Approach in the Assessment of Human Allogeneic Responses in Organ Transplantation.</a> Front Immunol. 12, 687715(2021).</li>
<li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Animals%22%5BJournal%5D)">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Exp Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li>
<li>Hickman, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+Exposure+Times+for+Irreversible+Euthanasia+with+Carbon+Dioxide+in+Mice+and+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Animal+Sci%22%5BJournal%5D)">Minimal Exposure Times for Irreversible Euthanasia with Carbon Dioxide in Mice and Rats.</a> J Am Assoc Lab Animal Sci. 61 (3), 283-286 (2022).</li>
<li>Zhou, R., Mei, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhou%2C+R+%22Neural+Development%3A+Methods+and+Protocols%22">Neural Development: Methods and Protocols</a>. , Humana Press. Totowa, NJ. (2013).</li>
<li>Gutierrez-Ruiz, O. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectopic+expression+of+DOCK8+regulates+lysosome-mediated+pancreatic+tumor+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Ectopic expression of DOCK8 regulates lysosome-mediated pancreatic tumor cell invasion.</a> Cell Rep. 42 (9), 113042(2023).</li>
<li>Kirkiles-Smith, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Humanized+Mouse+Model+to+Study+the+Role+of+Macrophages+in+Allograft+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Development of a Humanized Mouse Model to Study the Role of Macrophages in Allograft Injury.</a> Transplantation. 87 (2), 189-197 (2009).</li>
<li>Chuprin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mouse+models+for+immuno-oncology+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Humanized mouse models for immuno-oncology research.</a> Nat Rev Clin Oncol. 20 (3), 192-206 (2023).</li>
<li>Yun, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+immunosuppressive+features+of+monocytes+suppress+CAR-T19+through+IL-1+pathway+modulation+in+mantle+cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intrinsic immunosuppressive features of monocytes suppress CAR-T19 through IL-1 pathway modulation in mantle cell lymphoma.</a> Mol Ther Oncol. 33 (2), 200985(2025).</li>
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SSK 是 CAR 免疫治疗领域多项专利的发明人，这些专利已授权给诺华（通过梅奥诊所、宾夕法尼亚大学与诺华之间的协议）、MustangBio（通过梅奥诊所）和 Sendero（通过梅奥诊所）。RLS 和 SSK 是 CAR 免疫治疗领域多项专利的发明人，这些专利已通过梅奥诊所授权给 Humanigen。KY、RLS、TH、BK、ES 和 SSK 是 CAR 免疫治疗领域多项专利的发明人，这些专利已通过梅奥诊所授权给 Immix。SSK 收到来自 Kite、Gilead、Juno、BMS、诺华、Humanigen、MorphoSys、Tolero、Sunesis/Viracta、LifEngine Animal Health Laboratories Inc.、Incyte 和 Lentigen 的研究资助。SSK 参与了 Kite/Gilead、Humanigen、Juno/BMS、Capstan Bio 和诺华的顾问会议。SSK 曾在 Humanigen 和 Carisma 的数据安全与监查委员会任职。SSK 曾担任 Torque、Calibr、诺华、Capstan Bio、Carisma 和 Humanigen 的顾问。

CAR-T细胞疗法在治疗部分血液系统恶性肿瘤患者中已显示出多项临床成功，但大多数患者在CAR-T输注后1-2年内出现复发1,2。目前已发现多种潜在的CAR-T耐药机制，其中免疫抑制性髓系细胞在肿瘤微环境（TME）的免疫抑制及后续CAR-T治疗失败中发挥重要作用3,4,5,6,7,8。已有研究对CAR-T细胞进行工程化改造以靶向免疫抑制性巨噬细胞，从而提高整体抗肿瘤疗效5。然而，巨噬细胞介导的CAR-T抑制机制尚未完全阐明。此外，由于在小鼠模型中移植人源巨噬细胞的技术复杂性，目前可用于...

自体嵌合抗原受体T（CART）细胞疗法在治疗复发或难治性血液系统恶性肿瘤方面已取得临床成功，由此推动美国食品药品监督管理局（FDA）批准了六种靶向CD19或B细胞成熟抗原（BCMA）的CART产品1尽管CAR-T细胞治疗在初期表现出显著疗效，但大多数患者在治疗后的前1-2年内出现复发2已发现多种CART耐药机制，包括T细胞功能欠佳、抗原逃逸、CART细胞存续能力差，以及由免疫抑制性肿瘤微环境（TME）介导的抑制作用。2,3髓系细胞（如单核细胞和巨噬细胞）通常构成肿瘤微环境（TME）的重要组成部分，并已被证实是其他免疫细胞（包括T细胞）的主要抑制因子。4,5在血液系统肿瘤和实体瘤的临床前模型及临床试验中，已有报道称髓系细胞对CAR-T细胞治疗效果具有不利影响。3,6髓系介导的抑制可能从CAR-T细胞制备过程的初始阶段即开始发生——已有研究表明，起始单采产品中的单核细胞具有抑制作用 离体 CART 扩增7,8鉴于髓系细胞介导的CAR-T抑制作用的证据不断积累，许多研究致力于对CAR-T细胞进行基因改造，以靶向并清除肿瘤微环境（TME）中的免疫抑制性巨噬细胞，从而增强免疫应答5然而，CART细胞与免疫抑制性巨噬细胞之间相互作用的机制尚未完全阐明。此外，目前公开可用的此类相互作用的异种移植模型十分有限。因此，迫切需要建立用于研究人类巨噬细胞与CART细胞相互作用的模型 体外 以及在小鼠模型中。
在此，我们描述了一种将靶向人CD19的嵌合抗原受体T细胞（CART19）与CD19+ 肿瘤细胞和 离体 极化的M2样巨噬细胞。此外，我们报道了一种异种移植小鼠模型，该模型将免疫缺陷小鼠皮下植入靶细胞和人巨噬细胞，从而可在存在免疫抑制性巨噬细胞的环境中评估相关免疫疗法的效果。具体而言，我们在有或无免疫抑制性巨噬细胞的条件下，分析了CAR-T细胞针对抗原的特异性增殖情况 体外，显示在transwell和直接共培养板中T细胞扩增均受到显著抑制。在我们的异种移植模型中，将NSG小鼠皮下接种悬浮于Matrigel中的肿瘤细胞和人源巨噬细胞，用于治疗方案筛选。该动物模型成功证明了 离体 分化的免疫抑制型人巨噬细胞能够在NSG小鼠中促进肿瘤进展。通过遵循本方案，可测试靶向免疫抑制型巨噬细胞的治疗手段的有效性，包括小分子药物、生物制剂以及其他基于细胞的疗法。然而，由于使用免疫缺陷小鼠研究人类肿瘤微环境存在局限性，所提出的模型最适合用于概念验证研究。

<table><tbody><tr><td>0.5 mL 注射器</td><td>Fisher Scientific</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL 微量离心管</td><td>Eppendorf</td><td>1415-2508&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 锥形管</td><td>Corning Life Sciences</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>24孔Transwell小室（0.4 &amp;mu;m）</td><td>Corning Life Sciences</td><td>3397</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 锥形管</td><td>Corning Life Sciences</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cy7标记的抗人CD206抗体</td><td>Biolegend</td><td>321119</td><td>流式抗体</td></tr><tr><td>APC标记的抗人CD14抗体</td><td>Biolegend</td><td>325607</td><td>流式抗体</td></tr><tr><td>APC标记的抗人CD3抗体</td><td>Biolegend</td><td>344811</td><td>流式抗体</td></tr><tr><td>autoMACS冲洗液</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td>经典单核细胞分离缓冲液&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>基底膜基质</td><td>Corning Life Sciences</td><td>CLS356237</td><td>溶解态基底膜基质</td></tr><tr><td>细胞培养基</td><td></td><td></td><td>X-VIVO 15无血清造血细胞培养基中含10%人AB血清和1%青霉素-链霉素-谷氨酰胺</td></tr><tr><td>人经典单核细胞分离试剂盒</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-117-337</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX系统&amp;nbsp; B5-R3-V5</td><td>Beckman Coulter</td><td>C04652</td><td>流式细胞仪</td></tr><tr><td>D-荧光素</td><td>Gold Biotechnology</td><td>LUCK-1G</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS（杜氏磷酸盐缓冲液）</td><td>Gibco</td><td>14190250&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>眼膏</td><td>ThermoFisher</td><td>19-090-832</td><td></td></tr><tr><td>FACS缓冲液</td><td></td><td></td><td>PBS中含2%胎牛血清和1%叠氮化钠</td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Corning Life Sciences</td><td>35-011-CV</td><td></td></tr><tr><td>平底96孔板</td><td>Corning Life Sciences</td><td>CLS3997</td><td></td></tr><tr><td>热灭活混合人AB血清&amp;nbsp;</td><td>Innovative Research</td><td>4931</td><td></td></tr><tr><td>人TruStain FcX（Fc受体阻断液）</td><td>Biolegend</td><td>422301</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷液体&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Piramal Pharma Limited</td><td>66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Spectrum活体成像系统</td><td>PerkinElmer</td><td>124262</td><td></td></tr><tr><td>JeKo-1细胞系培养基</td><td></td><td></td><td>RPMI-1640培养基中含10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素-谷氨酰胺</td></tr><tr><td>活/死可固定Aqua死细胞染色试剂盒（适用于405 nm激发）</td><td>Invitrogen</td><td>L34966</td><td></td></tr><tr><td>LS柱</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>阴性磁珠分选</td></tr><tr><td>Lymphoprep</td><td>Stemcell Technologies</td><td>07811</td><td>密度梯度介质</td></tr><tr><td>MACS BSA储存液</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td>经典单核细胞分离缓冲液&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>AF546标记的小鼠抗人CD206抗体&amp;nbsp;</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-376232</td><td></td></tr><tr><td>NOD.Cg-Prkdcscid&amp;nbsp;Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) 小鼠</td><td>Jackson Laboratory&amp;nbsp;</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>PE标记的抗人CD16抗体</td><td>Biolegend</td><td>302007</td><td>流式抗体</td></tr><tr><td>青霉素-链霉素-谷氨酰胺（100倍浓度），液体</td><td>Gibco</td><td>10378-016</td><td></td></tr><tr><td>PerCP标记的抗人CD163抗体</td><td>Biolegend</td><td>333625</td><td>流式抗体</td></tr><tr><td>AF647标记的兔抗人iNOS抗体&amp;nbsp;</td><td>Proteintech</td><td>CL647-18985</td><td></td></tr><tr><td>重组人GM-CSF</td><td>Stemcell Technologies</td><td>78015</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640培养基</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>SepMate-50 IVD</td><td>Stemcell Technologies</td><td>85450</td><td>通过密度梯度离心法分离外周血单个核细胞&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>叠氮化钠，5%（w/v）</td><td>Ricca Chemical</td><td>7144.8-16</td><td></td></tr><tr><td>组织培养处理的48孔板</td><td>Corning Life Sciences</td><td>3548</td><td></td></tr><tr><td>Vi-cell XR细胞活力分析仪</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>细胞计数仪</td></tr><tr><td>X-VIVO 15无血清造血细胞培养基</td><td>Lonza</td><td>04-418Q</td><td></td></tr></tbody></table>

研究髓系细胞与car t细胞之间的相互作用 体外 和 在体 内

Studying Interactions between Myeloid Cells and CAR T Cells In Vitro and In Vivo

嵌合抗原受体T（CART）细胞疗法在治疗血液系统恶性肿瘤方面已取得显著的临床成功。然而，大多数患者在1至2年内出现复发。目前已发现多种导致CART耐药的机制，包括免疫抑制性髓系细胞对T细胞的抑制作用。越来越多的证据表明，肿瘤微环境（TME）中的单核细胞和巨噬细胞会影响CART细胞的功能，导致疗效不佳和临床预后不良。但用于研究人源巨噬细胞与CART细胞相互作用的临床前模型仍十分有限。本文将探讨研究人源巨噬细胞对CART细胞影响的若干方法 体外 和 体内我们描述 体外 共培养模型以证明具有免疫抑制作用的巨噬细胞可抑制CAR-T细胞功能。此外，我们报道了一种异种移植模型，将人巨噬细胞与肿瘤细胞皮下移植至NSG小鼠，用于研究M2样巨噬细胞与CAR-T细胞及肿瘤细胞之间的相互作用。这些模型可用于评估巨噬细胞在肿瘤微环境中的作用，并测试靶向巨噬细胞的癌症免疫疗法。

本实验方案的目的是建立两种方法 体外 和 体内 研究人类免疫抑制性巨噬细胞与CAR-T细胞相互作用的模型较为有限，这主要是由于两者相互作用的复杂性和动态性，以及现有异种移植模型的不足。根据本方案，分离的人类经典单核细胞将被诱导分化为具有M2样表型并具备免疫抑制功能的巨噬细胞。
为确认分离的人经典单核细胞的纯度，将染色后的样本在流式细胞仪上检测，并通过圈选人CD14阳性细胞进行分析+CD16- 种群（图 3A- B) 成功的单核细胞分离将获得至少90%的CD14+CD16- 从活细胞亲代群体中分离出目标细胞群体。为进行表型鉴定并确认已分化为M2样巨噬细胞，需观察CD163的群体偏移情况低 CD206低 CD163高 或 CD206高 与M2样巨噬细胞相比，M0巨噬细胞的预期表现（<s...

鉴于可用于研究人源CART细胞与髓系细胞相互作用的异种移植模型有限，我们建立了 体外 和 体内 利用模型研究人巨噬细胞对CAR-T细胞的影响。研究结果有望推广应用于评估巨噬细胞在肿瘤微环境中的作用，并测试靶向巨噬细胞的免疫疗法。

研究髓系细胞与CAR T细胞之间的相互作用 体外 和 在体 内

嵌合抗原受体T（CART）细胞疗法在治疗血液系统恶性肿瘤方面已取得显著的临床成效。然而，大多数患者……

本研究提供了简化的体外和体内模型，用于理解在套细胞淋巴瘤背景下，人源免疫抑制性巨噬细胞对CA 19抗肿瘤活性的影响。目前研究人源巨噬细胞和单核细胞最常用的体内模型是将造血干细胞移植到免疫缺陷小鼠体内。将人源造血干细胞移植至免疫缺陷小鼠以研究小鼠体内人源髓系细胞的方法，可能耗时较长且成本较高。移植效率也可能受限。我们建立了更为简化的体外和体内模型，用于研究人巨噬细胞、CAR-T细胞与肿瘤细胞之间的相互作用。该模型也可用于测试其他靶向巨噬细胞的免疫疗法。首先，在4摄氏度条件下，以300×g离心1000万个人类经典单核细胞5分钟。吸除上清液，并将细胞重悬于培养基中，调整终浓度为每毫升100万个细胞。向细胞悬液中加入人重组GM-CSF，使其终浓度达到每毫升10纳克，并充分混匀。将单核细胞转移至T25培养瓶中，在37摄氏度下孵育七天。第七天时，在冰上每10分钟剧烈吹打细胞一次，并在显微镜下观察，直至大多数巨噬细胞脱落。将脱落的细胞转移至预冷的15毫升锥形管中，置于冰上。然后，用预冷的 PBS 洗涤细胞，以松动残留的细胞，并将其收集至锥形管中。使用自动细胞计数仪对细胞进行计数，随后在 4°C 条件下以 300g 离心 5 分钟。吸除上清液，再用 5 mL 预冷的 PBS 洗涤并重悬细胞沉淀。再次离心试管并吸除上清液后，用预冷的磷酸盐缓冲液（PBS）重悬最终的细胞沉淀，调整细胞浓度至每毫升2000万个细胞。将悬液转移至1.5毫升微量离心管中，置于冰上保存。接着，将已制备的1500万个荧光素酶阳性的JeKo细胞转移至15毫升锥形管中。离心JeKo细胞后，吸除上清液。将沉淀重悬于预冷的PBS中，调整细胞浓度至每毫升4000万个细胞。随后，在一个新的1.5毫升微量离心管中，等体积混合巨噬细胞悬液与肿瘤细胞悬液。加入等体积的溶解基底膜基质，冰上充分混匀。作为对照，在新的微量离心管中，将剩余的JeKo细胞与等体积的PBS混合，再加入等体积的溶解基底膜基质，冰上混匀。将小鼠麻醉后，将其置于带有鼻罩的加热平台上。在小鼠双眼涂抹眼用软膏，以防止角膜损伤。剃除每只小鼠右侧 flank 部的毛发，暴露皮肤。将100微升JeKo巨噬细胞混合物装入0.5毫升注射器中，并排出气泡。轻轻提起暴露的皮肤，将针头插入抬起的皮肤区域，同时用手指对注射部位施加压力。缓慢将细胞注入皮下层，然后轻柔地拔出针头。为了评估免疫抑制性巨噬细胞在体内的影响，通过生物发光成像技术在NSG小鼠中追踪肿瘤负荷的进展，这些小鼠仅移植了JeKo细胞，或同时移植了分化后的巨噬细胞。分化后的巨噬细胞显著加速了体内肿瘤的进展，表现为到第17天时，联合移植小鼠的肿瘤负荷明显高于仅移植JeKo细胞的小鼠。

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科研

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癌症研究

研究骨髓细胞和 CAR T 细胞在体外和体内的相互作用

本视频演示了一种 体外 验证嵌合抗原受体（CAR）T细胞活性的检测方法。表达CD19抗原和胞质荧光素酶的B细胞淋巴瘤细胞与靶向CD19的CAR T细胞共培养。CAR与肿瘤细胞表面CD19结合后，可激活CAR T细胞释放细胞因子和毒素，导致肿瘤细胞发生细胞毒性。通过定量检测CAR T细胞释放的细胞因子水平以及肿瘤细胞中荧光素酶介导的生物发光信号的减弱，评估CAR...

一种体外评估肿瘤特异性CAR T细胞抗肿瘤活性的实验方法

在此，我们介绍一种实验方案 体内 GM-CSF诱导的骨髓来源树突状细胞（DC）对初始CD4...

一个 在体 内 用于测量骨髓来源树突状细胞诱导的初始CD4 T细胞活化、增殖及Th1分化的 小鼠模型

本文介绍了一种通过逆转录病毒转导法生产小鼠CD19 CAR T细胞并进行临床前测试的实验方案，用于治疗经建立的同系A20...

一种用于CD19 CAR T细胞临床前评估的同源小鼠B细胞淋巴瘤模型

本文介绍了一种体外共培养方法，用于反复刺激靶向肿瘤的T细胞，从而实现对T细胞抗肿瘤活性的表型和功能分析。...

体外肿瘤细胞再攻击用于预测性评估嵌合抗原受体T细胞的抗肿瘤功能

我们介绍了一种可靠生成嵌合抗原受体（CAR）T细胞的方法，并在体外和体内检测其分化与功能。...

制造用于过继性免疫治疗的嵌合抗原受体（CAR）T细胞

该方案简化了逆转录病毒载体的制备及小鼠T细胞的转导过程，有助于高效生成小鼠CAR-T细胞。...

高效生成小鼠嵌合抗原受体（CAR）-T细胞

本方案提供了一种原代小鼠T细胞分离的方法，以及在特定环境条件下对T细胞迁移进行延时显微成像并进行定量分析的技术。...

原代小鼠CD8+ T细胞的实时体外迁移实验

本实验方案描述了一种实验工作流程，可实现 离体...

经预处理肿瘤细胞异基因共培养体系中人类T细胞活性的分析

本文介绍了一种制备双乳液滴的方法，该液滴包封单个T细胞和一个癌细胞靶标，用于在单细胞水平上研究细胞杀伤作用。该方法能够在大量T细胞中同时定量检测细胞毒性分子和靶细胞的凋亡情况。...

基于液滴的单细胞水平评估嵌合抗原受体T细胞毒性的检测方法

本方案描述了原代T细胞培养的关键步骤，包括其分离、活化、扩增以及通过mRNA电穿孔进行的瞬时转染。此外，还提出了一套用于流式细胞术分析表型、活化标志物、细胞活力以及嵌合抗原受体（CAR）表达的实验流程和抗体组合。...

分离、培养及瞬时转染人原代T细胞以生成嵌合抗原受体（CAR）T细胞

了解简化体外和体内模型，用于研究人免疫抑制性巨噬细胞与CAR T细胞在套细胞淋巴瘤中的相互作用，并测试巨噬细胞靶向免疫疗法。

研究髓系细胞与CAR T细胞之间的相互作用体外和在体内

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研究髓系细胞与CAR T细胞之间的相互作用 体外 和 在体 内

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