通过 DNA 微阵列芯片法鉴定 分枝杆菌 种类

在这里，我们提出了一种用于鉴定 分枝杆菌 种类的 DNA 微阵列芯片方法，这将提高临床使用相关疾病的诊断准确性和效率。

[旁白]本研究的重点是临床微生物学中的分子诊断。与传统检测方法相比，DNA微阵列芯片方法识别分枝杆菌种类具有高灵敏度、特异性强、快速性，可为临床患者的早期诊断提供重要帮助。目前，许多基层实验室对非结核分枝杆菌的快速鉴定方法有限，直接影响患者的临床诊疗。首先，将恒温水浴的温度设置为 50 摄氏度并预热。要制备芯片，请在基因微阵列芯片杂交盒的底部加入 200 微升蒸馏水。将支架放在盒子内的两个定位柱之间。小心地将芯片正面朝上放在支架上，并用盖玻片盖住，使其四个凸台朝下，确保盖玻片的末端与芯片末端的标签对齐。接下来，根据样品数量准备 200 微升离心管或八孔条，并正确标记。将试剂盒中的杂交缓冲液加热至 50 摄氏度，直至其完全融化。充分混合后，在微量离心机中快速离心。将 9 微升杂交缓冲液等分到每个制备的试管或条带中。向每个试管中加入六微升相应的PCR产物，使每个反应混合物的最终体积为15微升。使用 PCR 仪器或水浴将杂交反应混合物加热至 95 摄氏度 5 分钟，使其变性。变性处理后，立即将混合物浸入冰水混合物中并孵育三分钟。从冰浴中取出杂交反应混合物，并通过上下移液两次进行混合。当没有白色絮状沉淀物残留时，通过盖玻片的装载孔加入13.5微升反应混合物。快速盖上杂交盒盖盖密封，记录芯片数、微阵列位置、样品数。现在，将密封的杂交盒水平放入预热至50摄氏度的恒温水浴中。将所有盒子放入其中后，启动计时器 120 分钟。杂交反应完成后，水平取出杂交盒，拆开，取出芯片。立即将芯片放在装有芯片清洗液 I 的容器内的载玻片架上，该容器已平衡至室温，并在室温下以 80 至 100 RPM 在恒温摇床上洗涤三分钟。在室温下，用设置为 80 至 100 RPM 的摇床上的切屑清洗液 II 再次清洗切片三分钟。现在，将薯片放入离心机中，在室温下以 100 克旋转五分钟。打开扫描仪。然后打开相应的软件。单击激光控制按钮，使其预热 10 分钟。将样品相关信息输入软件。扫描仪完成预热后，单击弹出按钮。将干燥的薯片稳定地放在小支架上。将芯片轻轻水平推入扫描仪隔间，然后单击“加载”按钮。现在，将芯片编号输入软件，点击选择检测区域微阵列1至4。单击“选择样品”为每个微阵列选择相应的样品。然后单击开始检测开始芯片扫描。扫描结果将显示在屏幕上并自动保存。使用数据查询页面进行数据查询和打印作。完成所有作后，关闭激光，退出软件，最后关闭扫描仪。 通过质量控制确认了实验结果的有效性，阳性对照检测结核分枝杆菌复合体，阴性对照检测结果为结核分枝杆菌。对测试样品的解释从所有探针（包括具有最高信号值的探针）均为阴性的情况开始，从而导致报告没有分枝杆菌。在只有结核分枝杆菌复合体探针显示强信号的样本中，该物种组的结果被确定为阳性。如果对应于鸟分枝杆菌的探针是唯一具有强信号的探针，则该样品被鉴定为鸟分枝杆菌阳性。如果只有内部对照探针呈阳性，而所有其他探针均呈阴性，则结果报告为不确定，表明存在检测试剂盒未涵盖的分枝杆菌种类。