Name: 在无胸腺裸鼠中皮下注射人结直肠癌细胞以评估抗肿瘤疗效 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-08T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: 学习建立皮下结直肠癌小鼠模型的方法，使用生物发光HCT-116细胞在免疫缺陷裸鼠中进行非侵入性肿瘤监测。该方案通过IVIS成像和数字卡尺测量，为临床前抗肿瘤药物评估提供可重复、标准化的平台。

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ACS 和 CNN 隶属于西班牙穆尔西亚圣哲罗姆校区 135 号（邮编 30107）穆尔西亚天主教大学（UCAM）健康科学博士项目&#34;，并获得 UCAM 提供的博士奖学金。作者感谢 IMIB（Instituto Murciano de Investigación Biosanitaria，穆尔西亚）动物实验平台的支持，本研究的临床前实验在该平台完成&#34;。

动物饲养于特定病原体阴性环境中，遵循由Instituto Murciano de Investigación Biosanitaria（IMIB，穆尔西亚）伦理委员会（编号 A13240502）制定的指南。合格人员按照皇家法令 1201/2005 的要求每周进行检查。
1. 动物
注意：注射前必须对所有动物进行安全且牢固的固定。若操作对象为免疫缺陷小鼠（例如裸鼠，如 Crl: NU(NCr)-Foxn1nu），务必保持无菌环境。本研究在实验开始时使用了12只5周龄的裸鼠（雌性体重20–22 g，雄性体重22–26 g），雌雄各占50%。所有麻醉和实验操作均在 科研伦理与良好实践指南 经机构伦理委员会批准（批准号：A13240502），并符合西班牙法规（R.D. 1201/2005）。
<ol>
	<li>开始实验前，将4周龄的小鼠在动物中心适应约1周。随后进行以下操作。</li>
</ol>
2. D-荧光素储备液的制备
<ol>
	<li>在生物安全柜内，将D-荧光素钾盐生物发光底物以15 mg/mL的浓度溶于预热的磷酸盐缓冲液（PBS）中，置于锥形管内。反复倒置管子数次，充分混匀溶液。</li>
	<li>将溶液通过0.2 µm针头滤器过滤，以实现无菌处理。</li>
	<li>将无菌溶液分装至1 mL不透光微量离心管中，于-20 °C保存。 
	注意：荧光素对光敏感。</li>
</ol>
3. 细胞外基质制备
<ol>
	<li>在2 °C至8 °C的冰箱中，将无酚红商品化细胞外基质（ECM）水凝胶置于冰上过夜解冻5。</li>
	<li>注射当天，将ECM保持在冰上，使用预冷的P1000移液器将200 µL ECM分装至无菌离心管中。 
	注意：建议使用宽口微量离心管。尽量减少温度变化，避免反复冻融。</li>
	<li>在配制注射液前，将注射器和针头置于冰上预冷，以防止ECM发生突然的温度变化。</li>
</ol>
4. 细胞脱离与计数
<ol>
	<li>在肿瘤诱导前数天，将HCT-116生物发光细胞（ATCC细胞系CCL-247-LUC2）接种于T75培养瓶中，以确保获得足够数量的细胞。细胞培养维持在37 °C、5% CO2条件下，必要时更换培养基6。</li>
	<li>实验当天，小心吸除培养基，避免扰动贴壁细胞。</li>
	<li>用8 mL预热至30 °C的无菌PBS洗涤细胞，以去除残留血清。</li>
	<li>每瓶加入2 mL预热的0.05%胰蛋白酶-EDTA溶液，于37 °C孵育4–5分钟。在倒置显微镜下观察细胞脱落情况。若细胞仍贴壁，可轻敲培养瓶侧壁以促进脱落。</li>
	<li>加入含胎牛血清（FBS）的10 mL完全培养基以中和胰蛋白酶活性。</li>
	<li>用10 mL移液管将细胞转移至15 mL锥形离心管中。用额外2 mL新鲜培养基冲洗培养瓶，收集残留细胞，并将冲洗液一并加入15 mL离心管中。</li>
	<li>室温下以200 × g离心5分钟。小心吸除上清液，避免扰动细胞沉淀。</li>
	<li>用3 mL接种培养基轻柔重悬细胞沉淀，制成均匀的细胞悬液。</li>
	<li>使用血球计数板或自动细胞计数仪对细胞进行计数。取10 µL细胞悬液与10 µL台盼蓝混合，通过倒置显微镜计数活细胞。 
	注意：为实验准备足够数量的细胞：每只小鼠至少需要3 × 106个活细胞。</li>
	<li>将细胞重悬于预热至30 °C的无菌PBS中，并用PBS调节活细胞浓度至2 × 107个/mL，分装为每份200 µL。</li>
</ol>
5. 准备实验设备并麻醉动物。
<ol>
	<li>在成像前至少4小时开启成像系统。 
	注意：请遵循系统说明，完成初始化步骤，包括根据信噪比手动调整光照强度和相机曝光时间。该设置必须根据实验条件手动设定。</li>
	<li>称量动物体重，并计算所需注射的D-荧光素钠溶液体积（每20 g动物注射15 mg/mL溶液200 µL）。</li>
	<li>清洁并消毒成像室和成像柜。</li>
	<li>识别每只小鼠，并在麻醉前安全固定。 
	注意：进行皮下注射时，佩戴两副手套以防止针头意外刺伤手部。</li>
	<li>使用2%异氟烷与氧气混合气体（氧气流速为1.8–2.0 L/min）对小鼠进行麻醉。同时开启麻醉泵和抽吸泵。</li>
</ol>
6. 注射用细胞的制备
<ol>
	<li>在生物安全柜内，将 200 µL 浓度为 2 × 107 个生物发光结直肠癌细胞/mL 的细胞悬液与 200 µL 细胞外基质（ECM）混合。使用 P1000 移液器轻轻吹打，避免产生气泡和细胞解离。</li>
	<li>将 400 µL 混合液转移至 1 mL 注射器中，去除气泡，并立即进行注射。</li>
	<li>在固定动物的同时，安全地取下针头保护帽，操作过程中始终确保针头无菌。 
	注意：建议每只动物使用单独的针头，以最大限度减少污染。每只小鼠均使用新针头，防止小鼠间交叉感染。</li>
	<li>安装 25 G 针头，调整注射器内液体体积至 200 µL，并排除所有气泡。 
	注意：通常注射体积为 200 µL，每次注射含 2 × 106 个细胞。</li>
	<li>在固定动物的同时，将针头松散地滑回保护帽中，操作过程中避免接触针头或保护帽。</li>
</ol>
7. 皮下肿瘤诱导
<ol>
	<li>小鼠麻醉后将其从麻醉舱中取出，并将其鼻部置于提供相同麻醉气体的出口中。 
	注：在本实验中，出口是用一只手套制成的。</li>
	<li>将动物右侧卧于平坦表面上。用非优势手的指尖轻轻捏起并提起其左下腹区域的皮肤。</li>
	<li>注射前应先回抽，以确认针头位置正确。用优势手持针，针尖斜面向上，将针头三分之二插入提起的皮肤内，与动物身体平行，操作时需格外小心，避免刺伤手指或穿透双层手套。 
	注：正确进针应产生负压，且针座内无回吸液体。</li>
	<li>将注射器内的液体（200 µL）注入提起的皮肤内，位于两指之间。拔针前稍作停留，然后缓慢退出针头。皮下注射完成后取出针头，并安全弃置于锐器盒中。 
	注：注射前应使用70%酒精或等效皮肤消毒剂对注射部位进行消毒。</li>
</ol>
8. D-荧光素的腹腔注射
<ol>
	<li>在将动物放回麻醉室之前，使用15 mg/mL的储存液，通过30 G胰岛素注射器以150 mg/kg体重的剂量腹腔内（IP）注射D-荧光素酶底物（每20 g动物注射200 µL）。 
	注意：最多0.5 mL的注射量均可良好耐受。</li>
	<li>手动固定动物，使其呈背侧卧位（腹部朝上），并将动物头部一端朝下倾斜，以便肠道内容物向下移动。</li>
	<li>保持针头斜面朝上，并以15–20°轻微倾斜角度将针头推入腹腔，使针尖刚好穿透动物左下腹象限的腹壁。 
	注意：注射前应使用70%酒精或等效皮肤消毒剂对注射部位进行消毒。</li>
	<li>缓慢将D-荧光素酶底物注入腹腔内，拔出针头后安全丢弃。</li>
	<li>将小鼠放入麻醉室，使其稳定约5分钟。15分钟后，开始进行in vivo成像。 
	注意：针对每种新的动物模型应构建D-荧光素酶动力学曲线以确定信号峰值时间。在本实验中，in vivo成像的光信号在约15分钟时达到峰值。</li>
</ol>
9. 在体 成像分析
<ol>
	<li>将完全麻醉的动物置于成像系统的腔室内，侧卧于右侧。确保动物与相机和光源对齐，以准确捕获肿瘤区域。</li>
	<li>打开连接的软件，选择可视或摄影成像模式以确认动物的位置。保存数据并更改文件夹名称。</li>
	<li>选择生物发光成像模式，并将其设置为自动模式。采集生物发光图像，并在计算机屏幕上监测肿瘤发出的光信号。</li>
	<li>成像完成后，将动物放回笼中，并观察是否存在任何并发症。</li>
	<li>进行后期处理，首先调整生物发光信号的标度，使所有小鼠的肿瘤显示相同的标度，通常介于1e6至1e8之间。</li>
	<li>在肿瘤周围设置感兴趣区域（ROI）用于分析，并复制该区域以供后续分析使用。测量ROI内的光信号强度，并导出结果用于进一步分析。对于后续的肿瘤，粘贴先前创建并复制的相同大小的ROI。</li>
	<li>根据制造商的说明关闭系统，并清洁成像室。关闭抽气装置、麻醉泵以及氧气气流。</li>
</ol>
10. 肿瘤体积测量
<ol>
	<li>使用异氟烷对动物进行麻醉以测量肿瘤。将动物置于稳定位置并遮盖其头部，迅速固定动物。</li>
	<li>使用校准的数字卡尺测量肿瘤的长度、宽度和深度。 
	注意：操作应迅速完成，因为动物在离开麻醉舱约1分钟后即开始苏醒。</li>
	<li>重复测量并计算平均值。</li>
	<li>根据球形或椭球形肿瘤的公式计算体积： 
	对于球形肿瘤 7<img alt="肿瘤体积方程，\( V = \frac{1}{2} \times \text{长度} \times \text{宽度}^2 \times \frac{1}{1000} \)。" src="/files/ftp_upload/68525/68525eq01.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1780372819000" data-alt="方程 1">    (1) 
	对于椭球形肿瘤 8 <img alt="肿瘤体积计算公式，用于立方厘米的三维测量方程。" src="/files/ftp_upload/68525/68525eq02.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1780372819000" data-alt="方程 2">    (2) 
	注意：为尽量减少测量偏差，研究中的所有肿瘤测量应由同一操作者完成。此外需注意，在肿瘤诱导当天，由于肿瘤组织尚未完全固化，准确测量通常较为困难。</li>
</ol>

<ol><li>Brough, D., Amos, H., Turley, K., Murkin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+subcutaneous+tumour+height+and+impact+on+measurement+accuracy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Inform%22%5BJournal%5D)">Trends in subcutaneous tumour height and impact on measurement accuracy.</a> Cancer Inform. 22, 11769351231165181(2023).</li>
<li>Hossain, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+cancer%3A+A+review+of+carcinogenesis%2C+global+epidemiology%2C+current+challenges%2C+risk+factors%2C+preventive+and+treatment+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Colorectal cancer: A review of carcinogenesis, global epidemiology, current challenges, risk factors, preventive and treatment strategies.</a> Cancers. 14 (7), 1732(2022).</li>
<li>Evans, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+orthotopic+syngeneic+murine+model+of+colorectal+cancer+for+use+in+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Development of an orthotopic syngeneic murine model of colorectal cancer for use in translational research.</a> Lab Anim. 53 (6), 598-609 (2019).</li>
<li>Song, W. -J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+cancer+mouse+metastasis+model+combining+bioluminescent+and+micro-computed+tomography+imaging+for+monitoring+the+effects+of+5-fluorouracil+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Colorectal cancer mouse metastasis model combining bioluminescent and micro-computed tomography imaging for monitoring the effects of 5-fluorouracil treatment.</a> Transl Cancer Res. 12 (10), 2572-2581 (2023).</li>
<li>Francescone, R. A., Faibish 3rd, M., Shao, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Matrigel-based+tube+formation+assay+to+assess+the+vasculogenic+activity+of+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Matrigel-based tube formation assay to assess the vasculogenic activity of tumor cells.</a> J Vis Exp. (55), e3040(2011).</li>
<li>Li, C., Lau, H. C. -H., Zhang, X., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+application+in+colorectal+cancer%3A+Understanding+the+pathogenesis+and+relevance+to+the+human+condition%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Mouse models for application in colorectal cancer: Understanding the pathogenesis and relevance to the human condition.</a> Biomedicines. 10 (7), 1710(2022).</li>
<li>Jensen, M. M., Jørgensen, J. T., Binderup, T., Kjær, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+volume+in+subcutaneous+mouse+xenografts+measured+by+microCT+is+more+accurate+and+reproducible+than+determined+by+18F-FDG-microPET+or+external+caliper%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Med+Imaging%22%5BJournal%5D)">Tumor volume in subcutaneous mouse xenografts measured by microCT is more accurate and reproducible than determined by 18F-FDG-microPET or external caliper.</a> BMC Med Imaging. 8, 16(2008).</li>
<li>Faustino-Rocha, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+rat+mammary+tumor+volume+using+caliper+and+ultrasonography+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Estimation of rat mammary tumor volume using caliper and ultrasonography measurements.</a> Lab Anim. 42 (6), 217-224 (2013).</li>
<li>Jensen, M. M., Jørgensen, J. T., Binderup, T., Kjaer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+volume+in+subcutaneous+mouse+xenografts+measured+by+microCT+is+more+accurate+and+reproducible+than+determined+by+18F-FDG-microPET+or+external+caliper%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Med+Imaging%22%5BJournal%5D)">Tumor volume in subcutaneous mouse xenografts measured by microCT is more accurate and reproducible than determined by 18F-FDG-microPET or external caliper.</a> BMC Med Imaging. 8, 16(2008).</li>
<li>Vedder, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Corynebacterium+bovis+on+engraftment+of+patient-derived+chronic-myelomonocytic+leukemia+cells+in+NSGS+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Effects of Corynebacterium bovis on engraftment of patient-derived chronic-myelomonocytic leukemia cells in NSGS mice.</a> Comp Med. 69 (4), 276-282 (2019).</li>
<li>Evans, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synthetic+luciferin+improves+bioluminescence+imaging+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A synthetic luciferin improves bioluminescence imaging in live mice.</a> Nat Methods. 11 (4), 393-395 (2014).</li>
<li>Jain, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+model+for+designing+a+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Kinetic model for designing a cancer therapy.</a> Cancer Cell Int. 2 (1), 13(2002).</li>
<li>Chiu, W. -C., Ou, D. -L., Tan, C. -T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+immune+checkpoint+blockade+therapeutic+research+in+oral+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse models for immune checkpoint blockade therapeutic research in oral cancer.</a> Int J Mol Sci. 23 (16), 9195(2022).</li>
<li>Peyton, S. R., Platt, M. O., Cukierman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+and+opportunities+in+modeling+the+dynamic+tumor+matrisome%5BTitle%5D)+AND+%22BME+Front%22%5BJournal%5D)">Challenges and opportunities in modeling the dynamic tumor matrisome.</a> BME Front. 4, 0006(2023).</li>
<li>Ravoori, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+and+bioluminescence+imaging+for+evaluating+tumor+burden+in+orthotopic+colon+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging and bioluminescence imaging for evaluating tumor burden in orthotopic colon cancer.</a> Sci Rep. 9 (1), 6100(2019).</li>
</ol>

作者声明，他们不存在任何已知的可能影响本研究工作的竞争性财务利益或个人关系。

在无胸腺裸鼠模型中通过皮下接种发光结直肠癌细胞的实验方案，提供了一种标准化且可重复的肿瘤形成及实时监测方法。首先需要明确的是，此类研究通常持续28天，发光信号检测在肿瘤接种当天进行，之后每周检测一次。相反，由于细胞悬液尚未形成包块，因此在第一天不进行游标卡尺测量肿瘤体积；肿瘤体积测量从第一周开始，之后每周进行一次。从皮下注射当天起，通过游标卡尺测量监测肿瘤生长，直至肿瘤体积达到约300 mm³，该数值依据既往研究中描述的公式计算得出9。
该方法中最关键的步骤之一是将肿瘤细胞悬浮液制备在细胞外基质（ECM）中，这可通过提供类似ECM的环境来支持细胞存活和增殖，从而提高肿瘤成瘤率。此外，在注射前确保发光细胞经过适当培养和传代，对于维持细胞活力以及在各实验组间获得一致的肿瘤形成至关重要。故障排查措施包括确保细胞处于最佳传代次数，以维持其活力和致瘤性。
由于使用了免疫缺陷小鼠，我们建议进行病原体检测 Corynebacterium bovis, 棒状杆菌属菌种<...

结直肠癌（CRC）是全球主要的健康负担之一，在最常见且致命的恶性肿瘤中位居前列1建立可靠的临床前模型对于评估新的治疗策略至关重要，因为传统的 体外 检测方法无法充分反映活体系统中肿瘤生长和药物反应的复杂性。 在体 模型，尤其是小鼠模型，已被用于深入揭示肿瘤生物学特性，使研究人员能够在受控环境中评估潜在治疗方法的有效性。
在小鼠模型中使用发光的结直肠癌（CRC）细胞代表了临床前研究的重要进展，能够实现对肿瘤进展的实时、无创监测2。本研究旨在建立一种标准化的皮下肿瘤诱导及IVIS成像方案，以动态追踪肿瘤生长。选择皮下注射模型是因为其技术操作简便、可重复性强，并且便于进行长期的肿瘤监测。通过利用生物发光成像，研究人员可以获得关于肿瘤发育及治疗反应的精确且可量化的数据，而无需在多个时间点处死动物3。
IVIS 成像系统是一种评估肿瘤负荷的强有力工具，具有高灵敏度和特异性，可提高体内研究的可重复性和准确性。本研究将为未来的治疗评估奠定基础，为结直肠癌治疗的临床前药物测试提供一种标准化且高效的方案。通过优化肿瘤诱导方法并应用先进的成像技术，该研究有助于弥合肿瘤学领域临床前研究与临床应用之间的差距4。

<table><tbody><tr><td>1 mL 不透明白色微量离心管</td><td>Eppendorf</td><td>30125215</td><td>D-荧光素储存</td></tr><tr><td>15 mL 锥形离心管</td><td>Falcon, Thermo Fisher Scientific</td><td>11507411</td><td>细胞培养材料</td></tr><tr><td>高级改良杜尔贝科必需氨基酸培养基（Advanced Dulbecco&amp;rsquo;s Modified Eagle Medium, DMEM）</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1152046</td><td>细胞培养试剂</td></tr><tr><td>裸鼠（Athymic Nude Mouse）</td><td>Charles River</td><td>Crl:NU(NCr)-Foxn1nu</td><td>免疫缺陷型裸鼠</td></tr><tr><td>生物发光人结肠癌细胞 HCT116</td><td>ATCC</td><td>CCL-247-LUC2</td><td>HCT 116-Luc2 适用于活体生物发光实验</td></tr><tr><td>D-荧光素 Pierce</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15215733</td><td>用于生物发光检测</td></tr><tr><td>细胞外基质（Extracellular Matrix, ECM）</td><td>Corning</td><td>356231</td><td>Matrigel 基质用于细胞侵袭实验&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10500064</td><td>细胞培养试剂</td></tr><tr><td>滤芯吸头</td><td>Finntip, Thermo Fisher Scientific</td><td>94056710</td><td>避免产生气泡</td></tr><tr><td>胰岛素注射器 25 G 1 mL</td><td>Iberomed</td><td>JERINRAYS29</td><td>用于 HCT-116 细胞系的移植</td></tr><tr><td>胰岛素注射器 30 G 0.5 mL</td><td>DH Material medico</td><td>9.41652E+15</td><td>用于 D-荧光素给药</td></tr><tr><td>IVIS 活体成像系统（含 Living Image 软件）</td><td>PerkinElmer/Revvity</td><td>128201</td><td>生物发光与荧光成像扫描仪</td></tr><tr><td>Sterican 肝素化针头</td><td>VWR</td><td>612-0153 10</td><td>用于 D-荧光素给药及 HCT-116 移植</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline, PBS）</td><td>VWR</td><td>392-0042P</td><td>用于 HCT-116 细胞的悬浮、解离与移植</td></tr><tr><td>胰蛋白酶-EDTA 溶液</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11590626</td><td>细胞培养试剂</td></tr><tr><td>T-75 培养瓶，组织培养处理型</td><td>STARLAB</td><td>CC7682-41</td><td>细胞培养材料</td></tr></tbody></table>

皮下注射人结直肠癌细胞至裸鼠以评估抗肿瘤疗效

Subcutaneous Injection of Human Colorectal Cancer Cells in Athymic Nude Mice to Evaluate Antitumor Efficacy

结直肠癌（CRC）是全球癌症相关死亡的主要原因之一，凸显了迫切需要改进的临床前模型以评估潜在疗法。动物模型对于阐明肿瘤生物学特性及评估新型治疗干预措施至关重要。相较于现有模型，小鼠模型具有多项关键优势，包括可进行遗传操作、繁殖速度快、成本效益高，以及拥有免疫健全和免疫缺陷品系，能够精确模拟人类癌症。
本实验方案重点介绍在免疫缺陷型小鼠模型中皮下接种生物发光的结直肠癌细胞系HCT-116，随后利用IVIS系统和游标卡尺进行非侵入性生物发光成像，以监测肿瘤的进展和生长情况。使用发光细胞可实现实时、可定量地追踪肿瘤发育及其对治疗干预的反应，从而减少对侵入性操作的需求。肿瘤细胞接种需要一组小鼠（n = 12），通过测量发光强度建立标准化的治疗测试模型。肿瘤体积通常仅根据长度和宽度测量值或宽度计算得出。
当前方法可在最小化的同时确保肿瘤建立的一致性&#176; 变异性，最终提高临床前评估的可靠性。本研究的结果将有助于优化用于药物测试的肿瘤模型，并提升临床前研究在临床应用中的转化潜力。通过采用先进的成像技术和可重复的实验设计，本研究旨在提高评估的准确性和效率 体内 结直肠癌治疗药物评估

该方案允许将人源细胞引入免疫缺陷小鼠模型，从而促进这些肿瘤细胞的生长 体内，这总是比生理学上更相关 体外必须确保实验条件尽可能具有可重复性，肿瘤中所含的活细胞数量相近，且移植位置具有可比性并能持续稳定地进行观察。
检测生物发光HCT-116细胞系的敏感性 体内, 2 × 106 将细胞皮下注射至裸鼠（n = 12）。优化后的方案有助于均匀注射具有活性的细胞数量，无论是在发光强度还是肿瘤体积方面（P &gt; 0.05) (图1 和 图2生物发光成像能够实现对微小肿瘤病灶的高灵敏度实时成像（图1A）具有均一信号（图1B). 生物发光检测结果也显示信号强度与肿瘤体积之间存在线性相关性（R = 0.81，P = 0.0013）（图1C<...

本研究聚焦于在小鼠模型中对发光的结直肠癌细胞进行体内皮下诱导，并利用成像系统进行后续的发光检测。该实验方案旨在建立一种可重复的肿瘤生长模型，用于实时监测及治疗效果评估。

结直肠癌（CRC）是全球癌症相关死亡的主要原因之一，凸显了迫切需要改进的临床前模型以……

本研究提出了一种可重复的临床前实验方案，采用皮下结直肠癌小鼠模型评估生物活性化合物的抗肿瘤作用。近期的技术进展包括优化的异种移植技术、改进的动物操作方法以及先进的成像技术，这些均有助于提升临床前癌症研究中肿瘤监测的准确性和实验的可重复性。首先，将D-荧光素钾盐生物发光底物的工作液通过0.2微米的注射器滤器过滤，以实现无菌化处理。将细胞外基质置于冰上，使用预冷的 P1000 移液器，将 200 微升细胞外基质分装至无菌离心管中。小心吸除培养基，避免扰动贴壁的 HCT 116 生物发光细胞。随后，用 8 毫升在 30 摄氏度预热的无菌 PBS 洗涤细胞，以去除残留血清。每瓶中加入 2 毫升含 0.05% EDTA 的温热胰蛋白酶溶液，于 37 摄氏度孵育 4 至 5 分钟。在倒置显微镜下观察细胞脱落情况。随后，加入 10 毫升含有胎牛血清的完全培养基以中和胰蛋白酶。然后，使用10毫升移液管将细胞转移至15毫升锥形管中。接着，在室温下以200×g离心5分钟。小心吸除上清液，避免扰动细胞沉淀。轻轻将细胞沉淀重悬于三毫升接种培养基中，以获得均匀的悬浮液。取10微升细胞悬液与10微升台盼蓝混合，通过倒置显微镜计数活细胞，以测定细胞活力。将细胞在无菌PBS中重悬后，分装成每份200微升的等分试样。在生物安全柜内，将200微升制备好的生物发光结直肠癌细胞等分试样与200微升细胞外基质在冻存管中混合。使用P1000移液器轻轻吹打，避免产生气泡和细胞解离。将混合液转移至1毫升注射器中，去除气泡，并立即进行注射。小鼠麻醉后将其从麻醉舱中取出，并将动物的鼻部置于提供相同麻醉气体的输出口。将小鼠右侧卧于平坦的表面上。用非优势手的指尖轻轻捏住并提起小鼠左下腹区域的皮肤。将针头斜面向上，平行于身体方向刺入提起的皮肤约三分之二深度。将注射器内液体注入两指之间提起的皮肤正中部位。稍作停留后，缓慢拔出针头。用手将小鼠固定于仰卧位，腹部朝上，使动物头部朝下，以利于肠道内容物向下移动。保持针头斜面向上，与皮肤呈15至20度角，将针头推入腹腔，使针尖刚好穿透左下腹象限的腹壁。缓慢将D-荧光素注入腹膜腔，然后拔出针头。将麻醉后的动物放入成像系统腔室，并确保正确对齐以捕获肿瘤区域后，打开连接的软件。选择可视或摄影成像模式以确认动物的位置。保存数据并更改文件夹名称。在肿瘤周围设置一个用于分析的兴趣区域，并复制该区域以供进一步分析。测量兴趣区域的光信号强度并导出结果，随后将先前创建并复制的相同大小的兴趣区域粘贴至其他肿瘤进行后续分析。使用经过校准的数字卡尺测量肿瘤的长度、宽度和深度。然后，使用球形或椭球形肿瘤的公式计算体积。生物发光成像能够对具有均一信号的小肿瘤病灶进行高灵敏度的实时成像。肿瘤体积与总光通量之间观察到线性相关性，证实生物发光可准确反映肿瘤大小。使用公式1计算的肿瘤体积估计值与公式2相比，显著

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癌症研究

在无胸腺裸鼠中皮下注射人结直肠癌细胞以评估抗肿瘤疗效

建立该模型可采用两种技术：将癌细胞悬液注射至盲肠壁，或将皮下肿瘤组织块移植到盲肠。该模型可用于研究结直肠癌的自然进展过程，以及评估针对结直肠癌的新型治疗药物。...

结直肠癌小鼠原位模型

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建立结直肠癌PDOX小鼠模型：在小鼠模型中研究结直肠癌的进展

结直肠癌, PDOX模型, 小鼠模型, 肿瘤异种移植, 癌症进展, 原位移植, 患者来源的异种移植, 肿瘤微环境, 转移, 预临床模型

该视频介绍了将癌细胞进行盲肠内注射以建立具有高度均一性肿瘤的原位小鼠模型的技术。因此，这种原位小鼠模型能够真实模拟转移过程，为研究肿瘤生长和扩散过程中的表型变化提供了有价值的工具。...

盲肠内肿瘤细胞注射：一种用于建立原位结直肠癌小鼠模型的癌细胞递送技术

我们介绍了利用刚性内窥镜对小鼠结肠疾病治疗疗效进行纵向监测的方法。该方案可直接用于活体小鼠中单个肿瘤治疗反应的表征，也可用于监测潜在的疾病复发。...

利用活体小鼠连续内窥镜成像无创评估新型肠道疾病治疗药物的疗效

我们描述了通过将肿瘤细胞或类器官注射到小鼠盲肠中建立原位结直肠肿瘤模型，并从此模型中后续分离循环肿瘤细胞（CTCs）的方法。...

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本文介绍一种简单、微创且易于操作的方法，将乳腺癌细胞植入小鼠乳腺脂肪垫中。该小鼠原位乳腺癌模型具有适当的乳腺脂肪垫微环境，可用于研究癌症的多个方面。...

将乳腺癌细胞原位注射至小鼠乳腺脂肪垫

结直肠癌（CRC）类器官的门静脉注射可产生富含间质的肝转移灶。该结直肠癌肝转移小鼠模型是研究肿瘤与间质相互作用的有力工具，也可用于开发新型靶向间质的治疗策略，例如腺相关病毒介导的基因治疗。...

通过门静脉注射结直肠癌类器官研究肝转移微环境

本文描述了一种标准方案，用于在头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）同源小鼠模型中研究IL-1α的抗肿瘤活性及其相关毒性。...

评估 体内 聚酸酐IL-1α纳米颗粒的抗肿瘤活性

本方案概述了用于免疫肿瘤学研究的人源化免疫系统（HIS）小鼠的构建方法。本文介绍了在此模型中移植人源肿瘤并用于测试人源免疫治疗药物的操作步骤和注意事项，重点在于表征人源免疫系统对肿瘤的应答反应。...

在携带人源肿瘤的人源化小鼠模型中测试癌症免疫治疗药物

本方案描述了将患者来源的癌细胞原位植入免疫缺陷小鼠盲肠壁的操作。该模型可重现晚期结直肠癌的转移性疾病，能够在具有临床相关性的肺转移和肝转移场景中评估新型治疗药物。...

原位移植患者来源的癌细胞可模拟晚期结直肠癌

随着人们对肿瘤内免疫治疗的兴趣日益增加，选择易于操作且实用的肿瘤模型至关重要。皮下肿瘤虽然易于建立，但难以观察和操作。在本方案中，我们描述了建立皮内肿瘤的方法，该方法可提供更佳的可见性和可及性。...

皮内肿瘤移植作为小鼠肿瘤内免疫治疗研究的稳健模型

学习建立皮下结直肠癌小鼠模型的方法，使用生物发光HCT-116细胞在免疫缺陷裸鼠中进行非侵入性肿瘤监测。该方案通过IVIS成像和数字卡尺测量，为临床前抗肿瘤药物评估提供可重复、标准化的平台。

皮下注射人结直肠癌细胞至裸鼠以评估抗肿瘤疗效

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