小鼠双侧肾淋巴结切除术

我们研究免疫细胞从肾淋巴结向肾脏的迁移，以及肾脏抗原向引流淋巴结的转运。我们的手术方法具有独特优势，能够在耐受性良好的长期存活模型中选择性地破坏肾淋巴结，同时保持其他所有淋巴结完整。随着该模型的建立，我们能够进一步探究肾淋巴结在免疫应答中的作用，以及去除这些淋巴结如何影响免疫相关的肾脏损伤。

首先，将麻醉后的动物置于手术台上，并涂抹眼膏。用胶带将动物的左前肢固定于上方，尾部固定于下方，以形成放松但伸展的体位。剃除手术区域的毛发，并对术区进行三次消毒。

通过脚趾夹捏确认麻醉深度后，在脾脏下方约低于最后一根肋骨1厘米处的皮肤上做一个1厘米长的斜切口。使用钝性分离法将皮肤与腹壁和胸壁分开，并在腹腔内辨认出脾脏。随后，在脾脏下方约1厘米处的腹壁肌肉上做一长度为1厘米的切口，以进入腹膜腔。

将左肾识别为位于脾脏下方、紧贴腹膜后壁的一个光滑器官。使用两把有角度的镊子，钝性分离左肾后方，进入腹膜后间隙，并轻柔地将左肾向腹内侧方向牵开。找到包绕左肾淋巴结的脂肪组织垫，该淋巴结位于肾的后方、肾血管的上方。

辨认并避开位于上方的肾上腺、后方的主动脉以及前内侧的乳糜池。使用尖头镊子钝性分离淋巴结被膜，使其与邻近血管分开，同时用角度镊子施加轻柔的反向牵引力。使用尖头直镊将淋巴结向上牵拉。

然后使用尖头剪刀精确剪断后内侧的附着组织。检查该区域以确认止血完全。接下来，将肾脏复位至其正常的解剖位置。

使用6-0单丝聚丙烯缝线连续缝合关闭腹壁，然后缝合皮肤。涂抹无菌外科胶水以封闭伤口。可选地，为了更清晰地识别肾淋巴结，可在肾淋巴结切除术前向双侧后足垫注射10至20微升无菌过滤的5%伊文思蓝PBS溶液。

注射后五分钟内，染料经由髂淋巴管引流到达肾淋巴结。将动物重新置于左侧卧位，左侧朝下。用胶带将动物的右前肢固定于上方，尾部固定于下方，以保持其身体放松但伸长的姿势。

现在，在最后一根肋骨下方做一个一厘米长的斜行皮肤切口，该位置将略高于左侧。使用钝性分离技术，将皮肤与腹壁和胸壁分开。然后通过腹壁肌肉做一个一厘米的切口，以进入腹膜腔。

辨认右肾，该器官表面光滑，位于腹膜后壁，紧邻肝脏下方。使用两把有角度的镊子，钝性分离右肾后方，进入腹膜后间隙，并将右肾向腹内侧方向翻转。辨认包绕右肾淋巴结的脂肪组织垫，该淋巴结位于右肾后方、肾血管上方。

识别并避开位于淋巴结上方的肾上腺。现在使用尖头镊子，钝性分离淋巴结被膜周围组织，将其与邻近血管分离，同时用弯头镊子施加轻柔的反向牵引。然后，用尖头直镊将淋巴结向上牵拉，并用精细剪刀锐性切断其后内侧的附着结构。

检查手术区域以确保止血完全。最后，将右肾复位至其解剖位置。使用6-0单丝聚丙烯缝线连续缝合，分两层关闭腹壁和皮肤，并在切口处涂抹无菌外科胶水。

流式细胞术证实，所有五个左侧和五个右侧肾淋巴结清扫样本均成功提取了淋巴结，每个样本中CD45阳性活细胞比例均超过50%，而内脏脂肪对照组中该比例低于2%。CD45阳性细胞的定量结果显示，左侧和右侧肾淋巴结清扫样本与内脏脂肪组织之间存在极显著差异，但左侧与右侧之间无显著差异。