Name: 华夏马亚种与江铃马多糖含量及抗氧化活性的比较研究 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-15T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: 了解两种沙棘亚种多糖含量与抗氧化活性的比较研究方法。本研究采用热水提取和苯酚-硫酸比色法分析Hippophae rhamnoides sub. sinensis与Hippophae gyantsensis的差异，为药用品质评价提供科学依据。

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本工作受到国家自然科学基金（编号 82374145）、四川省自然科学基金（编号 2025ZNSFSC0608）和国家自然科学基金（编号 U23A20520）的资助

1. 样品与材料
<ol>
	<li>从青藏高原采集不同种Hippophae的沙棘样品。 
	注：样品由成都中医药大学副教授Yue Liu鉴定。凭证标本保存于成都中医药大学民族医药学院。采样信息见表1。本研究中所用试剂与设备的详细信息列于材料表中。</li>
	<li>将样品置于40 °C烘箱中干燥72 h。</li>
	<li>将每种沙棘样品各取20 g研磨成粉末，过3号筛。每份样品设三个平行重复。对未能通过筛网的样品继续粉碎，再行过筛，直至全部通过。</li>
	<li>将样品于−20 °C保存，用于后续研究。</li>
</ol>
2. 沙棘多糖的提取
注意：本研究采用先前已建立的沙棘多糖提取方法，并稍作修改以获取多糖30。
<ol>
	<li>称取5.0 g沙棘样品粉末，置于250 mL圆底烧瓶中。加入50 mL无水乙醇至粉末中，在室温（RT；25 °C）下浸泡24 h，以去除脂溶性成分。每个样品设置三个平行重复。</li>
	<li>使用布氏漏斗过滤已浸泡过夜的样品粉末，弃去滤液，收集滤渣。用50 mL去离子水洗涤滤渣三次，并在40 °C下干燥至恒重。</li>
	<li>将脱脂后的滤渣转移至已干燥的250 mL圆底烧瓶中，按固液比1:30（g/mL）加入150 mL去离子水，在80 °C水浴中回流提取两次，每次2 h。分离滤液，得到粗沙棘多糖溶液。</li>
	<li>使用旋转蒸发仪在50 °C下浓缩提取液1.5 h。将浓缩后的溶液于4 °C冰箱中保存备用。</li>
	<li>按Sevage试剂与粗多糖溶液体积比1:4的比例，向粗多糖溶液中加入Sevage试剂（CHCl3:C4H9OH = 4:1, v:v），在转速为1050 rpm的磁力搅拌器上搅拌20 min。</li>
	<li>将液体转移至50 mL离心管中，在4000 × g下离心15 min，收集上清液。重复上述操作三次，直至两相界面处不再出现白色絮状沉淀为止。</li>
	<li>对去除蛋白后的沙棘多糖提取液进行浓缩，按1:3的体积比加入无水乙醇进行醇沉，并于4 °C下静置过夜。</li>
	<li>弃去上层无水乙醇，将混合物转移至50 mL离心管中，在4000 × g下离心15 min，收集沉淀。将沉淀冷冻干燥，得到总多糖。</li>
	<li>使用下方公式（1）计算总多糖得率： 
	<img alt="多糖得率计算公式：m/M × 100%；用于科学分析的方程。" src="/files/ftp_upload/68855/68855eq01.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1762509930000" data-alt="公式 1"> 
	注：公式（1）中，m表示沙棘多糖的质量（g），M表示沙棘样品的质量（g）。</li>
</ol>
3. 多糖含量测定
<ol>
	<li>溶液制备
	<ol>
		<li>苯酚试剂溶液的制备
		<ol>
			<li>准确称取3 g苯酚，转移至棕色容量瓶中。加入50 mL去离子水溶解苯酚。</li>
			<li>充分振荡混合物至均匀。标记容量瓶并保存备用。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>葡萄糖标准溶液的制备
		<ol>
			<li>准确称取10 mg无水葡萄糖，转移至10 mL容量瓶中。加入去离子水溶解葡萄糖，并充分振荡混合。</li>
			<li>用去离子水稀释至刻度，得到葡萄糖标准溶液。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>待测样品溶液的制备
		<ol>
			<li>准确称取5 mg冻干沙棘多糖（ZG1-ZG5和JZ1-JZ5）至容量瓶中（n = 10）。向每个容量瓶中加入去离子水，定容至50 mL。</li>
			<li>超声处理20分钟，直至多糖完全溶解。每个样品设置三个平行重复。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>标准曲线的绘制 
	注意：在苯酚-硫酸法中，多糖与浓硫酸反应生成糠醛类衍生物，后者与苯酚缩合形成橙黄色化合物。该化合物的最大吸收波长约为490 nm。因此，本实验的检测波长设定为490 nm22。
	<ol>
		<li>用去离子水将葡萄糖标准溶液稀释至0.1 mg/mL。使用微量移液器，分别准确移取200、300、400、500、600和700 µL葡萄糖标准溶液至六个洁净的试管中。用纯水补足至总体积1.0 mL，轻轻混匀，确保稀释均匀。</li>
		<li>向上述试管中各加入1.0 mL 6%苯酚溶液和5.0 mL硫酸。充分混匀，冷却后于室温（RT）静置30分钟。 
		注意：苯酚为有毒化学品，浓硫酸具有强腐蚀性。配制苯酚和硫酸溶液时应佩戴手套，并在通风橱内操作。</li>
		<li>将上述样品转移至比色皿中，以纯水作为空白对照（代替样品），使用紫外-可见分光光度计在490 nm处测定吸光度，每个样品测定三次。</li>
		<li>以葡萄糖浓度为横坐标（x轴），吸光度值为纵坐标（y轴）绘制标准曲线。获得回归方程并计算相关系数（R²）。 
		注意：紫外-可见分光光度计必须提前预热半小时。本步骤测定时，吸光度值应控制在0.2～0.8之间，因此需对样品浓度进行定量调整。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>方法学研究
	<ol>
		<li>精密度试验：
		<ol>
			<li>取JZ2，按照步骤3.1.3所述方法制备供试品溶液。按照步骤3.2.2所述方法进行苯酚-硫酸比色法操作。</li>
			<li>随后，按照步骤3.2.3所述程序测定吸光度，重复操作六次，计算相对标准偏差（RSD）。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>稳定性试验：
		<ol>
			<li>按照步骤3.1.3所述方法制备JZ2样品溶液。在样品制备后0、2、4、6、8和10小时，按照步骤3.2.2规定的方法进行苯酚-硫酸比色法操作。</li>
			<li>然后，按照步骤3.2.3所述程序测定吸光度，并计算RSD。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>重复性试验：
		<ol>
			<li>按照步骤3.1.3所述方法制备JZ2样品溶液，平行制备六份。按照步骤3.2.2规定的方法进行苯酚-硫酸比色法操作。</li>
			<li>之后，按照步骤3.2.3所述程序测定吸光度，并计算RSD。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>加样回收率试验：
		<ol>
			<li>取JZ2，按照步骤3.1.3所述方法制备供试品溶液，平行制备九份。分别加入相当于样品中总多糖含量80%、100%和120%的对照品溶液，每种浓度制备三个平行样品。</li>
			<li>按照步骤3.2.2规定的方法进行苯酚-硫酸比色法操作。随后，按照步骤3.2.3所述程序测定吸光度，并利用公式（2）计算回收率。 
			<img alt="回收率计算公式：(C-A)/B × 100%；数学公式，效率计算。" src="/files/ftp_upload/68855/68855eq02.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1762509930000" data-alt="公式 2"> 
			注意：在公式（2）中，A 表示沙棘样品溶液中葡萄糖的含量，B 表示加入的葡萄糖量，C 表示含有葡萄糖和沙棘样品溶液的实测值。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>含量测定
	<ol>
		<li>按照步骤3.1.3所述方法制备样品溶液，并按照步骤3.2.2规定的方法进行苯酚-硫酸比色法操作。</li>
		<li>按照步骤3.2.3所述程序测定吸光度，利用标准曲线法计算多糖含量。每个样品平行操作三次。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. DPPH自由基清除活性31,32
<ol>
	<li>准确称取2.7 mg DPPH至一个空的50 mL容量瓶中，加入50 mL无水乙醇溶解，配制成浓度为0.054 mg/mL的DPPH储备液，并获得DPPH工作液。 
	注意：DPPH溶液应避光保存。</li>
	<li>准确称取5 mg维生素C（Vc）至一个空的10 mL容量瓶中，用10 mL去离子水溶解，配制成浓度为0.5 mg/mL的Vc溶液。依次稀释，得到浓度分别为0.5、0.125、0.03125、0.0078125和0.001953 mg/mL的Vc测试溶液。</li>
	<li>准确称取每种沙棘多糖（ZG1-ZG5和JZ1-JZ5）各5 mg，分别溶于10 mL去离子水中，配制成浓度为0.5 mg/mL的沙棘多糖样品溶液。将上述溶液依次稀释，得到浓度分别为0.5、0.125、0.03125、0.0078125和0.001953 mg/mL的沙棘多糖测试溶液。</li>
	<li>以DPPH溶液作为底物，在96孔板中设置以下组别：阴性对照组A0（150 µL水 + 50 µL DPPH溶液）、样品组A1（150 µL样品或Vc溶液 + 50 µL DPPH溶液）和样品对照组A2（150 µL样品 + 50 µL无水乙醇）。每组实验设三个重复。</li>
	<li>在避光条件下反应30分钟，随后在517 nm处测定吸光度。重复实验三次，使用公式（3）计算DPPH自由基清除率。 
	注意：DPPH溶液的吸光度应维持在0.7 ± 0.02范围内。过高或过低的浓度会导致吸光度读数不准确，从而影响最终实验结果。 
	<img alt="清除率公式，方程显示 \( \text{清除率} = 1 - \frac{A_1 - A_2}{A_0} \)。" src="/files/ftp_upload/68855/68855eq03.jpg" style="margin: auto;" data-altupdatedat="1762509930000" data-alt="公式3"> 
	在公式（3）中，A0为去离子水与DPPH溶液的吸光度，A1为样品或Vc与DPPH溶液的吸光度，A2为样品与无水乙醇的吸光度。</li>
	<li>半抑制浓度（IC50）的计算
	<ol>
		<li>建立一个条理清晰的数据表格，展示反应测试化合物浓度（0.5、0.125、0.03125、0.0078125和0.001953 mg/mL）与其对应反应百分率之间的相关性。</li>
		<li>采用非线性曲线拟合（使用GraphPad Prism软件）确定IC50值及其标准误差。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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</ol>

作者声明无利益冲突。

沙棘是一种传统藏药。多糖是沙棘的重要组成成分。目前已有大量关于沙棘多糖含量测定及其抗氧化活性的研究。21然而，仅有少数研究对不同多糖的含量及其抗氧化活性进行了比较 沙棘 物种，例如药用物种 H. rhamnoides 亚种 sinensis 和 H. gyantsensis因此，本研究测定了两种多糖的含量 Hippophae 通过苯酚-硫酸比色法测定多糖含量，并采用DPPH自由基清除实验评估其抗氧化活性。
本实验的关键步骤如下：首先，在使用苯酚-硫酸比色法测定多糖含量时，试剂的添加顺序不可颠倒。应先加入样品，然后加入苯酚，最后再加入浓硫酸。此外，采用 DPPH 法测定多糖的抗氧化活性时，新配制的 DPPH 溶液应立即用铝箔包裹或置于棕色瓶中，以防止光降解。最后，由于苯酚具有毒性，浓硫酸具有强腐蚀性，配制苯酚和硫酸溶液时应佩戴手套，并在通风橱内进行操作。
结果表明，多糖含量 H. rh...

沙棘是胡颓子科植物的干燥成熟果实。它在中国是一种常用的药食两用材料，因其具有健脾消食、止咳化痰、活血化瘀等功效，同时也是印度、俄罗斯、芬兰及其他欧洲国家膳食补充剂和保健品的重要来源1。沙棘含有丰富的生物活性成分，如黄酮类、酚类化合物、多糖、苷类和有机酸，在传统中医药中已有长期应用历史2,3。通常认为，黄酮类化合物是沙棘中最重要的生物活性成分。然而，近年来研究发现沙棘多糖也具有优良的生理和药理活性，因而受到科研人员的广泛关注。研究表明，沙棘多糖具有调节免疫系统、保肝、调节脂质代谢紊乱和肠道菌群的作用，同时还具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤和降血糖等效应4,5,6。沙棘多糖可作为天然抗氧化剂，有助于开发新型功能性食品和药物。同时，沙棘多糖也易被胃酸降解，有利于人体对营养物质的吸收与利用7,8。
热水提取法（HWE）、微波辅助提取法和超声辅助提取法是提取沙棘多糖的常用方法9不同提取方法获得的多糖结构存在差异10单糖组成、分子量（Mw）、支化度、糖醛酸含量、糖苷键类型及三螺旋构象11,12通常，高分子量多糖溶液具有较高的黏度和较低的溶解度，这可能影响其生物活性及应用13HWE 是实验室和工业环境中最常用的多糖提取技术，因其具有操作简便的优势。14,15此外，它也是提取沙棘多糖最常用的方法之一。9因此，在本研究中，采用热水提取法提取多糖。测定多糖含量的主要方法包括苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法。16,17,18,19苯酚-硫酸法因其检测步骤简单、稳定性好且灵敏度高而被广泛应用20文等人通过苯酚-硫酸法测定从沙棘中提取的多糖含量21因此，在本实验中采用苯酚-硫酸法测定多糖含量。苯酚-硫酸反应生成的橙色化合物溶液的深浅与多糖含量成正比，可在490 nm波长处进行测定。22.
天然多糖具有显著的抗氧化活性 体内 和 体外. 树莓多糖可能通过调节肠道菌群缓解高脂饮食模型中的氧化应激23多糖是主要的活性成分 Pueraria lobata 并表现出多种生物活性，包括抗氧化作用24. Dou 等人发现，黑莓多糖具有抗氧化等生理功能25多糖的抗氧化活性通常根据其清除多种自由基的能力进行评估，包括2,2-二苯基-1-苦基肼（DPPH）、羟基和超氧阴离子自由基，以及其对ABTS自由基阳离子的清除能力。26DPPH分析被广泛应用，因为它通过氢原子转移反应，检测抗氧化剂将紫色的DPPH自由基还原为淡黄色稳定分子的能力。27剩余的紫色DPPH自由基通过紫外-可见（UV-Vis）分光光度计在约515–520 nm处进行定量，以测定抗氧化活性28,29.
先前的研究已探讨了沙棘多糖的成分及其抗氧化活性21然而，绝大多数这些研究仅局限于 Hippophae rhamnoides 亚种 sinensis. 它是最常使用且分布最广的 沙棘属 中国记录的物种，并被正式收录于 中国药典. 关于 中国台湾沙棘，一种中国西藏特有的物种，常用于藏药，并在文献中有所记载 四川省藏药材目录，鲜有报道。此外，尚无研究比较过不同来源多糖的成分及其抗氧化活性 沙棘 物种，即， H. rhamnoides 亚种 sinensis 和 H. gyantsensis因此，本研究首先比较了多糖含量 H. rhamnoides 亚种. sinensis 和 H. gyantsensis 通过热水提取法提取，并采用苯酚-硫酸比色法进行定量。这两种多糖的抗氧化活性 沙棘 通过DPPH自由基清除实验进一步研究了这些物种。本研究有望为上述两种物种活性多糖组分的质量评价及深入开发提供科学依据 沙棘 物种

<table><tbody><tr><td>分析天平（精度为 0.0001 g）</td><td>Sartorius Scientific Instruments (Beijing) Co., Ltd.</td><td>BSA224S-CW</td><td></td></tr><tr><td>分析天平（精度为 0.00001 g）</td><td>Sartorius Scientific Instruments (Beijing) Co., Ltd.</td><td>CPA225D</td><td></td></tr><tr><td>台式低速离心机</td><td>上海智贵仪器有限公司</td><td>TD4K-Z</td><td></td></tr><tr><td>DPPH</td><td>上海源叶生物科技有限公司</td><td>CAS 1898-66-4</td><td></td></tr><tr><td>乙醇</td><td>成都科龙化工试剂有限公司</td><td>CAS 64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>EP 管</td><td>湖南百康控股有限公司</td><td>BS-20-M</td><td>2 mL</td></tr><tr><td>冷冻干燥机</td><td>Labconco Corporation</td><td>LABCONCO</td><td></td></tr><tr><td>无水葡萄糖</td><td>成都科龙化工试剂有限公司</td><td>CAS 50-99-7</td><td>对照标准品</td></tr><tr><td>GraphPad&amp;nbsp; Prim 9.5.0&amp;nbsp;</td><td>GraphPad Software</td><td>N/A</td><td>用于测定 IC50 值和 P 值。</td></tr><tr><td>热风循环干燥箱</td><td>上海一恒科技仪器有限公司</td><td>NB-DGG-9070A</td><td></td></tr><tr><td>L-抗坏血酸</td><td>北京莱博工科科技有限公司</td><td>CAS 50-81-7</td><td>阳性对照药物</td></tr><tr><td>酶标仪</td><td>上海山浦生物科技有限公司</td><td>Read Max 1500</td><td></td></tr><tr><td>96 孔板</td><td>北京莱博工科科技有限公司</td><td>11512</td><td></td></tr><tr><td>OriginPro 2025</td><td>OriginLab</td><td>N/A</td><td>绘制清除率折线图</td></tr><tr><td>移液器吸头</td><td>北京莱博工科科技有限公司</td><td>BS-200-T</td><td>200 &amp;mu;L</td></tr><tr><td>移液器吸头</td><td>北京莱博工科科技有限公司</td><td>T-1000-B</td><td>1000 &amp;mu;L</td></tr><tr><td>苯酚</td><td>成都科龙化工试剂有限公司</td><td>CAS 108-95-2</td><td></td></tr><tr><td>旋转蒸发仪</td><td>&amp;nbsp;BUCHI 实验室设备贸易（上海）有限公司</td><td>Buchi R-100</td><td></td></tr><tr><td>标准试剂型纯水系统</td><td>青岛弗隆科技有限公司</td><td>FBZ2001-up-p</td><td></td></tr><tr><td>恒温数显水浴锅</td><td>冠安科学仪器（浙江）有限公司</td><td>WB100-6F</td><td></td></tr><tr><td>紫外-可见分光光度计</td><td>上海元析仪器有限公司&amp;nbsp;</td><td>V-1100D</td><td></td></tr><tr><td>超声波清洗器</td><td>盛政超洁工业有限公司</td><td>CJ-060SD</td><td>超声波清洗器 360 W 50 Hz</td></tr></tbody></table>

中国台湾地区植物hippophae rhamnoides subsp. sinensis与hippophae gyantsensis多糖含量及抗氧化活性的比较研究

Comparative Study on the Polysaccharide Contents and Antioxidant Activities of Hippophae rhamnoides subsp. sinensis and Hippophae gyantsensis

本文报道了一项设计严谨且深入的比较研究，涉及两种多糖的得率、含量及抗氧化活性 沙棘 具有重要研究价值的物种，即 Hippophae rhamnoides 亚种. sinensis Rousi 和 Hippophae gyantsensis (Rousi)&#160;Y. S. Lian。总多糖的 H. rhamnoides 亚种 sinensis 和 H. gyantsensis 通过热水提取获得。比较了得率，并采用苯酚-硫酸比色法准确测定多糖含量并进行比较。同时，通过2,2-二苯基-1-苦基肼（DPPH）自由基清除法评估多糖的抗氧化活性。结果表明，多糖得率（粗提物占原料的质量百分比） H. rhamnoides 亚种 sinensis (1.18% ± 0.02%) 显著低于 H. gyantsensis (3.12% ± 0.06%) (P &#60; 0.01）。多糖含量（定义为提取物中的纯多糖） H. rhamnoides 亚种 sinensis (352.97±1.07 mg/g) 显著高于 H. gyantsensis (300.21 ± 1.49 mg/g) (P &#60; 0.01）。DPPH自由基清除活性的半抑制浓度 H. rhamnoides 亚种 sinensis 多糖（0.026 ± 0.004 mg/mL）略低于 H. gyantsensis 多糖（0.021 ± 0.004 mg/mL）。然而，两者之间未发现显著差异 沙棘 物种（P &#62; 0.05）。本实验阐明了多糖得率、含量及抗氧化活性之间的差异 H. rhamnoides 亚种 sinensis 和 H. gyantsensis本研究可为沙棘的质量评价及其多糖活性成分的深入开发提供科学依据。

粗多糖的得率 
采用热水提取法（HWE）提取多糖。水浴回流过程如补充图1所示。多糖提取液的浓缩情况见补充图2。脱蛋白后离心分层效果见补充图3。五个批次的H. rhamnoides subsp. sinensis多糖得率分别为0.89% ± 0.01%、0.78% ± 0.02%、1.63% ± 0.03%、1.50% ± 0.01%、1.12% ± 0.03%，平均得率为1.18% ± 0.02%（表2）。在步骤2.5中，五个批次的H. gyantsensis多糖得率分别为2.65% ± 0.07%、3.94% ± 0.06%、3.53% ± 0.05%、2.63% ± 0.08%和2.83% ± 0.05%，平均得率为3.12% ± 0.06%（表2）。t检验结果显示，两个物种间的多糖得率差异具有统计学显著性（P &lt; 0.01）。本研究结果表明，H. gyant...

本研究比较了多糖含量 Hippophae rhamnoides 亚种. sinensis 鲁西和 Hippophae gyantsensis (Rousi)&#160;Y. S. Lian 通过热水提取法获得，并采用苯酚-硫酸比色法进行定量。我们还研究了 体外 这两种多糖的抗氧化活性 沙棘 通过2,2-二苯基-1-苦基肼自由基清除实验测定物种的抗氧化活性。

中国台湾地区植物Hippophae rhamnoides subsp. sinensis与Hippophae gyantsensis多糖含量及抗氧化活性的比较研究

本文报道了一项设计严谨且深入的比较研究，涉及两种沙棘（Hippophae）多糖的得率、含量及其抗氧化活性。

本研究比较了中国沙棘（Hippophae rhamnoides sub. sinensis）与贡山沙棘（Hippophae gyantsensis）之间的多糖含量及抗氧化活性，以阐明二者差异。该研究方法学严谨，填补了文献中关于不同物种多糖特性差异的研究空白。本研究的结果对于质量评估及潜在的药物应用具有重要意义。首先，将五克沙棘样品粉末转移至250毫升圆底烧瓶中。然后加入50毫升无水乙醇，在25摄氏度的室温下浸泡24小时。第二天，使用布氏漏斗过滤浸泡过的样品粉末，以获得滤渣。用50毫升去离子水将滤渣洗涤三次。然后，将脱脂后的滤渣转移至一个干燥的250毫升圆底烧瓶中。按固液比1:30克/毫升加入150毫升去离子水。在80摄氏度水浴中回流提取两次，每次2小时。然后使用旋转蒸发仪浓缩提取物。将浓缩溶液在4 °C冰箱中保存以备后续使用。接下来，按1:4的体积比将Sevag试剂加入粗多糖溶液中，并置于磁力搅拌器上搅拌。然后将混合液转移至50 mL离心管中。将悬浮液在 4,000 g 离心 15 分钟，收集上清液。为在去除蛋白质后浓缩多糖提取物，按 1:3 的体积比加入无水乙醇以沉淀多糖。将混合物置于 4 摄氏度环境中过夜。第二天，移除上层乙醇。将混合物转移至50毫升离心管中，按之前方法进行离心。冷冻干燥沉淀物，得到总多糖。将三克苯酚转移至棕色容量瓶中。加入50毫升去离子水以溶解苯酚。振荡至溶液均匀，然后贴标签并储存备用。接下来，将10毫克无水葡萄糖转移至10毫升容量瓶中。加入去离子水并充分振荡混合。然后对容量瓶进行标记。取五毫克冻干沙棘多糖，置于容量瓶中，用于制备测试样品溶液。加入去离子水定容至50毫升。将各混合物超声处理20分钟，直至完全溶解。用去离子水将标准葡萄糖溶液稀释至 0.1 毫克/毫升。然后使用微量移液器分别吸取 200、300、400、500、600 和 700 微升，加入六支洁净的试管中。每管加入纯水至总体积为 1 毫升，并轻轻混匀各溶液，确保稀释均匀。向每支试管中加入1毫升6%苯酚溶液和5毫升硫酸，充分混匀。将样品转移至比色皿中。以纯水作为空白对照，在紫外-可见分光光度计中于490纳米处测定吸光度，每组设三个重复。进行精密度测试时，制备待测溶液。采用苯酚-硫酸比色法测定。测定吸光度并重复六次，计算相对标准偏差。进行稳定性测试时，制备待测溶液。在配制后的0、2、4、6、8和10小时进行比色测定。在上述各时间点测定吸光度，以计算相对标准偏差。进行重复性试验时，制备六份样品的平行重复样。采用苯酚-硫酸比色法，按照既定步骤测定吸光度。为进行回收率试验，制备九份待测溶液的平行重复样。加入相当于多糖总含量80%、100%和120%的对照体积。然后进行苯酚-硫酸比色法测定。为进行含量测定，需制备样品溶液。按照既定方法进行苯酚-硫酸比色法，然后测定吸光度。称取2.7毫克DPPH，加入一个空的50毫升容量瓶中。加入50毫升无水乙醇溶解DPPH，配制储备液。接着，将5毫克维生素C溶解于10毫升去离子水中，配制成0.5毫克/毫升的溶液。依次稀释该溶液，以制备维生素C测试溶液。将每种沙棘多糖样品各5毫克溶解于10毫升去离子水中，配制成0.5毫克/毫升的溶液。将这些溶液依次稀释，得到不同测试浓度。以DPPH溶液作为底物，在96孔板中配制各测试组。对于阴性对照组 A0，加入 150 微升水和 50 微升 DPPH。对于样品组 A1，加入 150 微升样品或维生素 C 溶液以及 50 微升 DPPH。对于样品对照组 A2，加入 150 微升样品和 50 微升无水乙醇。避光反应 30 分钟后，于 517 纳米处测定吸光度。葡萄糖标准曲线在 0.02 至 0.07 毫克/毫升浓度范围内，吸光度与浓度之间呈现出良好的线性关系。西藏沙棘的平均多糖得率显著高于中国沙棘亚种中华沙棘。精密度试验在六次测量中吸光度变异极小，相对标准偏差（RSD）为 0.21%，表明仪器具有较高的精密度。稳定性试验结果显示，在10小时内吸光度值保持一致，相对标准偏差（RSD）为0.45%，证实样品溶液具有良好的稳定性。重复性试验在六次重复测定中获得一致的吸光度值，RSD为0.5%，验证了该方法的重复性。葡萄糖含量的加标回收试验平均回收率为99.18%，证实了该方法的准确性。中国台湾沙棘亚种 sinensis 的平均多糖含量显著高于中国台湾吉隆沙棘。在所有测试浓度下，中国台湾吉隆沙棘的抗氧化活性均略高于中国台湾沙棘亚种 sinensis。在 0.5 毫克/毫升时，中国台湾吉隆沙棘的 DPPH 清除率达到 81.93%，而中国台湾沙棘亚种 sinensis 达到 75.17%。

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