中国台湾地区植物Hippophae rhamnoides subsp. sinensis与Hippophae gyantsensis多糖含量及抗氧化活性的比较研究

本研究比较了中国沙棘（Hippophae rhamnoides sub. sinensis）与贡山沙棘（Hippophae gyantsensis）之间的多糖含量及抗氧化活性，以阐明二者差异。该研究方法学严谨，填补了文献中关于不同物种多糖特性差异的研究空白。

本研究的结果对于质量评估及潜在的药物应用具有重要意义。首先，将五克沙棘样品粉末转移至250毫升圆底烧瓶中。然后加入50毫升无水乙醇，在25摄氏度的室温下浸泡24小时。

第二天，使用布氏漏斗过滤浸泡过的样品粉末，以获得滤渣。用50毫升去离子水将滤渣洗涤三次。然后，将脱脂后的滤渣转移至一个干燥的250毫升圆底烧瓶中。

按固液比1:30克/毫升加入150毫升去离子水。在80摄氏度水浴中回流提取两次，每次2小时。然后使用旋转蒸发仪浓缩提取物。

将浓缩溶液在4 °C冰箱中保存以备后续使用。接下来，按1:4的体积比将Sevag试剂加入粗多糖溶液中，并置于磁力搅拌器上搅拌。然后将混合液转移至50 mL离心管中。

将悬浮液在 4,000 g 离心 15 分钟，收集上清液。为在去除蛋白质后浓缩多糖提取物，按 1:3 的体积比加入无水乙醇以沉淀多糖。将混合物置于 4 摄氏度环境中过夜。

第二天，移除上层乙醇。将混合物转移至50毫升离心管中，按之前方法进行离心。冷冻干燥沉淀物，得到总多糖。

将三克苯酚转移至棕色容量瓶中。加入50毫升去离子水以溶解苯酚。振荡至溶液均匀，然后贴标签并储存备用。

接下来，将10毫克无水葡萄糖转移至10毫升容量瓶中。加入去离子水并充分振荡混合。然后对容量瓶进行标记。

取五毫克冻干沙棘多糖，置于容量瓶中，用于制备测试样品溶液。加入去离子水定容至50毫升。将各混合物超声处理20分钟，直至完全溶解。

用去离子水将标准葡萄糖溶液稀释至 0.1 毫克/毫升。然后使用微量移液器分别吸取 200、300、400、500、600 和 700 微升，加入六支洁净的试管中。每管加入纯水至总体积为 1 毫升，并轻轻混匀各溶液，确保稀释均匀。

向每支试管中加入1毫升6%苯酚溶液和5毫升硫酸，充分混匀。将样品转移至比色皿中。以纯水作为空白对照，在紫外-可见分光光度计中于490纳米处测定吸光度，每组设三个重复。

进行精密度测试时，制备待测溶液。采用苯酚-硫酸比色法测定。测定吸光度并重复六次，计算相对标准偏差。

进行稳定性测试时，制备待测溶液。在配制后的0、2、4、6、8和10小时进行比色测定。在上述各时间点测定吸光度，以计算相对标准偏差。

进行重复性试验时，制备六份样品的平行重复样。采用苯酚-硫酸比色法，按照既定步骤测定吸光度。为进行回收率试验，制备九份待测溶液的平行重复样。

加入相当于多糖总含量80%、100%和120%的对照体积。然后进行苯酚-硫酸比色法测定。为进行含量测定，需制备样品溶液。

按照既定方法进行苯酚-硫酸比色法，然后测定吸光度。称取2.7毫克DPPH，加入一个空的50毫升容量瓶中。

加入50毫升无水乙醇溶解DPPH，配制储备液。接着，将5毫克维生素C溶解于10毫升去离子水中，配制成0.5毫克/毫升的溶液。依次稀释该溶液，以制备维生素C测试溶液。

将每种沙棘多糖样品各5毫克溶解于10毫升去离子水中，配制成0.5毫克/毫升的溶液。将这些溶液依次稀释，得到不同测试浓度。以DPPH溶液作为底物，在96孔板中配制各测试组。

对于阴性对照组 A0，加入 150 微升水和 50 微升 DPPH。对于样品组 A1，加入 150 微升样品或维生素 C 溶液以及 50 微升 DPPH。对于样品对照组 A2，加入 150 微升样品和 50 微升无水乙醇。避光反应 30 分钟后，于 517 纳米处测定吸光度。

葡萄糖标准曲线在 0.02 至 0.07 毫克/毫升浓度范围内，吸光度与浓度之间呈现出良好的线性关系。西藏沙棘的平均多糖得率显著高于中国沙棘亚种中华沙棘。精密度试验在六次测量中吸光度变异极小，相对标准偏差（RSD）为 0.21%，表明仪器具有较高的精密度。

稳定性试验结果显示，在10小时内吸光度值保持一致，相对标准偏差（RSD）为0.45%，证实样品溶液具有良好的稳定性。重复性试验在六次重复测定中获得一致的吸光度值，RSD为0.5%，验证了该方法的重复性。葡萄糖含量的加标回收试验平均回收率为99.18%，证实了该方法的准确性。

中国台湾沙棘亚种 sinensis 的平均多糖含量显著高于中国台湾吉隆沙棘。在所有测试浓度下，中国台湾吉隆沙棘的抗氧化活性均略高于中国台湾沙棘亚种 sinensis。在 0.5 毫克/毫升时，中国台湾吉隆沙棘的 DPPH 清除率达到 81.93%，而中国台湾沙棘亚种 sinensis 达到 75.17%。