小鼠动脉止血的简便有效操作步骤

本研究开发了一种在保持血流的同时封闭动脉穿刺孔的方法。研究探讨了脂肪包裹是否能够预防动脉穿刺后发生的缺血。该操作中的一个关键实验挑战是在实现动脉穿刺后有效止血的同时，避免造成动脉闭塞。

首先，将麻醉后的小鼠置于手术台上。确认麻醉成功后，使用脱毛剂去除颈部和颅部区域的毛发。用聚维酮碘对暴露的皮肤进行消毒，随后使用75%乙醇去除残留物。

将小鼠置于设定为37摄氏度的加热垫上，并在整个实验过程中保持在此处。将小鼠重新摆放在加热垫上呈仰卧位。沿颈部正中线做切口后，切取一块3×3×1毫米的皮下脂肪组织移植物以备后续使用。

钝性分离下颌下腺、胸骨舌骨肌和胸锁乳突肌，以暴露双侧颈总动脉。然后仔细游离颈总动脉，暴露其分支颈内动脉和颈外动脉。在颈总动脉的远端放置第一个血管夹，随后在动脉的近端放置第二个血管夹。

接着，使用23号针头在两个夹钳之间的颈总动脉处穿刺。拔出针头后，用先前取下的脂肪垫的切割面或非浆膜侧包裹穿刺部位的颈总动脉。在脂肪包裹的动脉下方放置一根4-0缝线。

在脂肪表面轻轻打一个单结以施加压力，确保脂肪垫与血管壁之间紧密接触。然后逐渐调整结扎线的松紧度，以平衡压力并实现止血。使用湿润的棉签抬起远端颈总动脉。

松开血管夹一，并缓慢撤出棉签，以允许血流逐渐恢复至穿刺部位。现在检查穿刺部位的血流情况。如果观察到活动性出血，需重新在远端颈总动脉处夹上血管夹一。

一分钟后，缓慢松开第一个血管夹。如果出血持续，重新调整脂肪垫的位置或略微收紧结扎线以增加压力，直至完全止血。使用湿润的棉签抬起近端的颈总动脉。

接下来，松开第二把血管夹，缓慢撤出棉签，以允许血液受控地流向穿刺部位。如果发生出血，需重新在远端颈总动脉处夹上第二把血管夹。此时，轻轻拉紧缝线的单结以增加压力，并等待一分钟。

然后抬高近端颈总动脉，并通过将湿润的棉签缓慢向穿刺点滚动，松开第二个血管夹。使用相同的缝线再打一个结，形成双结，覆盖最初的结，以增强脂肪垫的固定并促进均衡的止血。确认脂肪垫两侧的颈总动脉均充盈且血管直径保持一致，表明血流已成功恢复。

最后，缝合颈部切口，并在伤口部位涂抹消毒剂。对假手术组和手术组小鼠进行术前和术后激光散斑对比成像及灌注单位测量，结果显示无显著变化，证实该动脉止血技术未影响脑血流。对术后7天、14天和28天的手术组及假手术组小鼠脑组织进行苏木精-伊红染色的组织学检查，显示皮层、海马和丘脑的组织结构完整，无病理性改变。

尼氏染色显示所有组别和时间点均呈现有序的神经元排列、正常的细胞结构以及完整的尼氏体，表明动脉闭合未造成结构损伤。本方法旨在手术后封闭穿刺部位，同时维持正常的血流，从而预防术后缺血。