Name: LncRNA敲低骨肉瘤细胞增殖能力检测的集落形成检测 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-16T13:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 13 s
Description: 学习使用集落形成实验检测lncRNA敲低对骨肉瘤细胞增殖的影响。本方案采用143B细胞系进行转染和长期培养，通过荧光显微镜和RT-qPCR验证敲低效率，为癌症生物学研究提供可靠的技术框架。

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本工作获得了国家自然科学基金（82174408、82374477、82474535 和&#160;82205145）的资助。

所用试剂和设备列于材料表中。
1. 质粒转染
<ol>
	<li>将143B细胞以每10 cm培养皿5 × 105个细胞的密度接种（共两皿），在37 °C、5% CO2的培养箱中，使用完全培养基（DMEM + 10% FBS）进行培养。</li>
	<li>24小时后准备转染试剂，包括质粒（shNC和shSNHG6）、PEI以及Opti-MEM。 
	注意：使用前需涡旋混匀，并确保所有试剂均已平衡至室温。</li>
	<li>取出四个1.5 mL微量离心管，用记号笔标记质粒管（shNC和shSNHG6）以及PEI管（两管）。</li>
	<li>向每根离心管中加入500 µL Opti-MEM。</li>
	<li>向质粒管（shNC或shSNHG6）中加入10 µg质粒，向每根PEI管中加入30 µL PEI（1 µg/µL）。</li>
	<li>轻轻上下混匀，室温孵育5分钟。</li>
	<li>将质粒管与PEI管中的液体合并，轻轻混匀后，室温孵育20分钟。</li>
	<li>从培养箱中取出143B细胞，轻柔吸除培养基，每皿加入7 mL无血清培养基。标记培养皿以标明将要加入的质粒类型（143B shNC或143B shSNHG6）。</li>
	<li>将预先制备的转染混合物逐滴加入对应的培养皿中。 
	注意：应缓慢滴加，使用移液器以环形轨迹从培养皿外缘向中心均匀分布。随后在37 °C、含5% CO2的培养箱中孵育。</li>
	<li>8–12小时后弃去上清液，每10 cm培养皿中加入10 mL完全DMEM培养基。将细胞置于37 °C、5% CO2培养箱中继续培养。</li>
	<li>在弃去上清液并更换为完全DMEM培养基72小时后，于荧光显微镜下观察细胞。</li>
</ol>
2. 克隆形成实验
<ol>
	<li>从10 cm培养皿（shNC和shSNHG6）中移除培养基，加入1.5 mL胰蛋白酶-EDTA消化细胞，轻轻吹打使细胞脱落，然后加入5 mL完全培养基终止消化。</li>
	<li>将细胞悬液转移至15 mL离心管中。</li>
	<li>取20 µL细胞悬液进行细胞计数。 
	注意：必须多次进行细胞计数，以确保shNC组与shSNHG6组的细胞数量一致。此处收集3 × 105个细胞用于RT-PCR验证SNHG6基因敲低效率。</li>
	<li>在6孔板中每孔接种2 × 103个细胞，加入完全DMEM培养基至终体积2 mL，并在37 °C、5% CO2培养箱中培养。 
	注意：每隔一天更换一次新鲜的完全DMEM培养基。</li>
	<li>每日观察克隆形成情况。 
	注意：当对照组（shNC）中大多数克隆包含≥50个细胞时，或培养10–14天后（以先到者为准），终止培养。</li>
	<li>从培养箱中取出细胞，弃去上清液。</li>
	<li>每孔用1 mL PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后弃去PBS。</li>
	<li>用1 mL 10%甲醛溶液固定细胞15分钟，然后弃去甲醛溶液。</li>
	<li>每孔用1 mL PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后弃去PBS。</li>
	<li>用1 mL 0.5%结晶紫染色液染色10–30分钟，然后弃去染色液。</li>
	<li>用流动的自来水轻轻冲洗细胞。</li>
	<li>室温下自然晾干细胞。</li>
	<li>用相机拍摄图像。</li>
</ol>

<ol><li>Chen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IAV+inhibits+the+host+antiviral+defense+mediated+by+LncRNA-LRIR+to+enhance+viral+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Macromol%22%5BJournal%5D)">IAV inhibits the host antiviral defense mediated by LncRNA-LRIR to enhance viral replication.</a> Int J Biol Macromol. 322 (Pt 1), 146665(2025).</li>
<li>Zhu, J., Mo, Y. Y., Peng, W. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+binding+protein-mediated+competing+endogenous+RNA+mechanism+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">RNA binding protein-mediated competing endogenous RNA mechanism in cancer.</a> Gene. 963, 149606(2025).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KIAA1429-mediated+ZFPM2-AS1+m%286%29A+modification+promotes+the+proliferation%2C+migration+and+invasion+of+osteosarcoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Lett%22%5BJournal%5D)">KIAA1429-mediated ZFPM2-AS1 m(6)A modification promotes the proliferation, migration and invasion of osteosarcoma cells.</a> Oncol Lett. 30 (4), 453(2025).</li>
<li>Oh, M., Kadam, R. N., Charania, Z. S., Somarowthu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LncRNA+SChLAP1+promotes+cancer+cell+proliferation+and+invasion+via+its+distinct+structural+domains+and+conserved+regions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">LncRNA SChLAP1 promotes cancer cell proliferation and invasion via its distinct structural domains and conserved regions.</a> J Mol Biol. 437 (19), 169350(2025).</li>
<li>Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TBX5-AS1+induces+ER+stress+and+suppresses+lung+cancer+growth+and+tumor+stemness+via+the+miR-494-3p%2FATF6+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stress+Chaperones%22%5BJournal%5D)">TBX5-AS1 induces ER stress and suppresses lung cancer growth and tumor stemness via the miR-494-3p/ATF6 axis.</a> Cell Stress Chaperones. 30 (6), 100113(2025).</li>
<li>Xu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((lncRNA+POU3F3+promotes+osteosarcoma+progression+through+GPX4-modulated+ferroptosis+by+interaction+with+IGF2BP2+to+facilitate+NRF2+mRNA+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dis%22%5BJournal%5D)">lncRNA POU3F3 promotes osteosarcoma progression through GPX4-modulated ferroptosis by interaction with IGF2BP2 to facilitate NRF2 mRNA stability.</a> Genes Dis. 12 (5), 101439(2025).</li>
<li>Li, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LncRNA+HOXA-AS3+promotes+cell+proliferation+and+invasion+via+targeting+miR-218-5p%2FFOXP1+axis+in+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">LncRNA HOXA-AS3 promotes cell proliferation and invasion via targeting miR-218-5p/FOXP1 axis in osteosarcoma.</a> Sci Rep. 14 (1), 16581(2024).</li>
<li>Ghasemi, M., Turnbull, T., Sebastian, S., Kempson, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+MTT+assay%3A+Utility%2C+Limitations%2C+pitfalls%2C+and+interpretation+in+bulk+and+single-cell+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">The MTT assay: Utility, Limitations, pitfalls, and interpretation in bulk and single-cell analysis.</a> Int J Mol Sci. 22 (23), (2021).</li>
<li>Harris, L., Zalucki, O., Piper, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BrdU%2FEdU+dual+labeling+to+determine+the+cell-cycle+dynamics+of+defined+cellular+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Histol%22%5BJournal%5D)">BrdU/EdU dual labeling to determine the cell-cycle dynamics of defined cellular subpopulations.</a> J Mol Histol. 49 (3), 229-234 (2018).</li>
<li>Romar, G. A., Kupper, T. S., Divito, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+techniques+made+simple%3A+Techniques+to+assess+cell+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Research techniques made simple: Techniques to assess cell proliferation.</a> J Invest Dermatol. 136 (1), e1-e7 (2016).</li>
<li>Stefanowicz-Hajduk, J., Ochocka, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+cell+analysis+system+in+cytotoxicity+applications%3A+Usefulness+and+comparison+with+tetrazolium+salt+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Rep%22%5BJournal%5D)">Real-time cell analysis system in cytotoxicity applications: Usefulness and comparison with tetrazolium salt assays.</a> Toxicol Rep. 7, 335-344 (2020).</li>
<li>Franken, N. A., Rodermond, H. M., Stap, J., Haveman, J., van Bree, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonogenic+assay+of+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Clonogenic assay of cells in vitro.</a> Nat Protoc. 1 (5), 2315-2319 (2006).</li>
<li>Brix, N., Samaga, D., Belka, C., Zitzelsberger, H., Lauber, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+clonogenic+growth+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Analysis of clonogenic growth in vitro.</a> Nat Protoc. 16 (11), 4963-4991 (2021).</li>
<li>Rajendran, V., Jain, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+tumorigenic+assay%3A+Colony+forming+assay+for+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In vitro tumorigenic assay: Colony forming assay for cancer stem cells.</a> Methods Mol Biol. 1692, 89-95 (2018).</li>
<li>Guzman, C., Bagga, M., Kaur, A., Westermarck, J., Abankwa, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ColonyArea%3A+An+ImageJ+plugin+to+automatically+quantify+colony+formation+in+clonogenic+assays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">ColonyArea: An ImageJ plugin to automatically quantify colony formation in clonogenic assays.</a> PLoS One. 9 (3), e92444(2014).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

除了利用癌症相关长链非编码RNA（lncRNA）作为生物标志物的诊断价值外，以治疗为目的靶向这些lncRNA正成为癌症管理中的一种新兴策略。明确lncRNA在骨肉瘤发病机制中的作用，对于推动骨肉瘤的诊断、治疗和预后评估至关重要。
为确保本实验的成功，必须遵循以下关键步骤。首先，建立单细胞悬液是进行可靠克隆实验的绝对前提，因为细胞聚集体的存在可能导致假性克隆形成，从而影响结果的准确性12。为获得可靠的单细胞悬液，应使用胰蛋白酶-EDTA进行细胞解离，随后通过轻柔吹打去除细胞团块。重复轻柔吹打操作可确保在接种前完成充分的单细胞解离12,13。其次，接种密度的优化也至关重要。密度过高可能导致克隆过早融合，难以区分单个克隆；而密度过低则可能因旁分泌因子分泌不足而抑制克隆形成。因此，在正式实验前，必须通过预实验确定最佳接种密度13。第三，在早期培养阶段（前5–7天），应尽量减少培养...

长链非编码RNA（lncRNA）是指长度超过200个核苷酸且无蛋白质编码潜能的转录本，近年来已被确认为调控多种生物学过程的重要分子1,2。它们在包括骨肉瘤、前列腺癌和肺癌在内的多种癌症的发生和发展中发挥关键作用3,4,5。在骨肉瘤中，越来越多的证据表明，lncRNA表达异常对细胞增殖具有显著影响。例如，沉默lncRNA POU3F3可显著抑制骨肉瘤细胞（MG63和U2OS）的增殖，并促进其凋亡6。类似地，敲低lncRNA HOXA-AS3可减少U2OS和SW1353细胞的克隆形成并抑制其生长7。鉴于不受控制的细胞增殖是癌症生物学的标志性特征，也是决定治疗策略的主要因素，阐明lncRNA调控的肿瘤细胞增殖机制，尤其是在骨肉瘤中的作用，仍具有重要的科学意义和必要性。
尽管已有多种方法可用于评估细胞增殖，但每种方法均存在固有的局限性。比色法或代谢法检测（如CCK-8和MTT）操作简便、快速，通量高，但主要提供短期读数，易受细胞代谢波动干扰，且所用试剂可能产生光学或光化学干扰风险8。基于DNA合成的方法（包括BrdU和EdU掺入）特异性更高，但仅能反映S期进入的瞬时状态，无法体现长期增殖结果9,10。类似地，针对增殖标志物（如Ki-67）的免疫染色仅能指示细胞周期的瞬时活性，无法预测克隆形成能力10。实时监测系统（如RTCA）可实现高重复性的连续生长曲线分析，但其成本高昂，且仅适用于短期或中期评估，实用性受限11。相比之下，克隆形成实验能够独特地捕捉单个细胞无限增殖并形成可见克隆的能力，从而直接反映其最终命运。尽管该方法耗时且劳动强度大，克隆形成实验仍是评估长期增殖潜能的金标准，其所提供的信息是短期或替代性检测方法无法获得的12。
本文包含长链非编码RNA（lncRNA）敲低及克隆形成实验的详细检测方案，并以143B骨肉瘤细胞中SNHG6的敲低为例进行说明。该方法不仅适用于骨肉瘤研究，也可作为研究其他肿瘤中lncRNA介导的细胞增殖的可行工具。

<table><tbody><tr><td>1.5 mL 离心管</td><td>Merck</td><td>AXYMCT150C</td><td></td></tr><tr><td>10% 中性缓冲福尔马林</td><td>VICTREX</td><td>5205000</td><td></td></tr><tr><td>100 - 1000 &amp;mu;L 带刻度蓝色延长吸头</td><td>上海生物科技有限公司</td><td>BS10401ML</td><td></td></tr><tr><td>100 mm 细胞培养皿</td><td>无锡耐思生命科技有限公司</td><td>704001</td><td></td></tr><tr><td>143B</td><td>ATCC</td><td>ATCC CRL-8303TM</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 离心管</td><td>上海生物科技有限公司</td><td>BL2002150</td><td></td></tr><tr><td>6 孔细胞培养板</td><td>无锡耐思生命科技有限公司</td><td>703001</td><td></td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 培养箱</td><td>赛默飞世尔科技（中国）有限公司</td><td>300583057</td><td></td></tr><tr><td>结晶紫</td><td>梯希爱（上海）化成工业发展有限公司</td><td>C0428</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 培养基</td><td>WISENT 公司</td><td>319-005-CL</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus</td><td>Eppendorf</td><td>3123000233</td><td></td></tr><tr><td>FBS - 优质</td><td>WISENT 公司</td><td>086-150</td><td></td></tr><tr><td>记号笔</td><td>斑马贸易（深圳）有限公司&amp;nbsp;</td><td>YYST5</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM</td><td>Gibco</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>巴斯德吸管</td><td>Labgic</td><td>BS-XG-O3L</td><td></td></tr><tr><td>PBS 缓冲液（干粉）</td><td>Labgic</td><td>BL601A</td><td></td></tr><tr><td>PEI</td><td>Polysciences</td><td>24765</td><td></td></tr><tr><td>移液器吸头</td><td>Merck</td><td>AXYT200Y</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express 酶</td><td>Gibco</td><td>12604021</td><td></td></tr><tr><td>胰蛋白酶/EDTA</td><td>Gibco</td><td>R001100</td><td></td></tr></tbody></table>

长链非编码rna敲低骨肉瘤细胞增殖能力的克隆形成实验检测

Colony Formation Assay Detecting the Proliferative Capacity of LncRNA-knockdown Osteosarcoma Cells

异常表达的长链非编码RNA（lncRNA）对骨肉瘤细胞的细胞增殖具有显著影响，提示其可能作为潜在的治疗靶点。然而，目前对lncRNA的功能研究仍主要停留在理论层面，且仅限于少数验证性实验。集落形成实验能够特异性地反映单个细胞最终的增殖命运，被公认为评估长期增殖潜能的金标准。本文建立了一种基于lncRNA敲低细胞的集落形成实验的可靠实验方案，用于评价lncRNA对骨肉瘤细胞增殖能力的影响。该实验方案提供了一种稳定、经济且高效的检测方法，可用于评估lncRNA对骨肉瘤细胞增殖的调控作用。该方法不仅适用于骨肉瘤细胞的研究，也可作为研究其他肿瘤中lncRNA调控细胞增殖能力的可行工具。本研究包含lncRNA敲低及集落形成实验的详细检测流程，并以小核仁RNA宿主基因6（SNHG6）在骨肉瘤细胞（143B）中的敲低为例进行了演示。实验结果证实，SNHG6的表达被有效抑制，同时集落的数量和大小均显著减少。这些发现表明，SNHG6对维持骨肉瘤细胞（143B）的长期增殖潜能具有重要作用。

为评估lncRNA SNHG6对骨肉瘤细胞增殖能力的影响，我们成功构建了质粒介导的基因敲低系统，并进行了克隆形成实验。实验流程包括对143B细胞进行质粒转染及克隆形成实验（图1）。
转染72小时后，通过荧光显微镜检测确认了143B细胞的转染效率（图2）。结果显示，对照组（shNC）与SNHG6敲低组（shSNHG6）中143B细胞的荧光强度一致，表明对照组和敲低组的质粒均已成功转染至143B细胞中。
RT-qPCR 分析证实，在转染 shSNHG6 质粒的 143B 细胞中，SNHG6 成功实现了敲低。与 shNC 组相比，shSNHG6 组中 SNHG6 的表达水平显著降低（p &lt; 0.001），表明敲低效率较高（图 3）。该结果验证了转染系统的有效性，为后续研究 SNHG6 在骨肉瘤细胞增殖中作用的功能实验提供了可靠的分子...

本实验方案提供了一种稳定、经济且高效的方法，将长链非编码RNA敲低与集落形成实验相结合，以定量分析长链非编码RNA对骨肉瘤细胞增殖的影响。

长链非编码RNA敲低骨肉瘤细胞增殖能力的克隆形成实验检测

异常的长链非编码RNA（lncRNA）表达对骨肉瘤细胞的细胞增殖具有显著影响，提示其可能作为……

我的研究聚焦于骨肉瘤，旨在通过克隆形成实验探究长链非编码RNA（LncRNA）敲低对细胞长期增殖能力的影响。首先，将5 × 10⁵个143B骨肉瘤细胞接种至两个直径10厘米的培养皿中。在37°C、5% CO₂的培养箱中，使用添加了10%胎牛血清的完全DMEM培养基培养细胞。24小时后准备转染试剂，包括质粒、聚乙烯亚胺和OptiMinium基础培养基。将每种试剂涡旋混匀，并在使用前使其平衡至室温。现在，使用记号笔标记四个1.5毫升微量离心管，分别用于盛装质粒和聚乙烯亚胺。向每支试管中加入500微升OptiMinium基础培养基。然后向对应的质粒管中加入10微克质粒，并向每支聚乙烯亚胺管中加入30微升聚乙烯亚胺。轻轻吹打混匀各管，然后孵育。将每个质粒管与其对应的聚乙烯亚胺管混合。轻轻混匀，并在室温下孵育20分钟。轻轻吸去含有143B细胞的培养皿中的培养基。向每块培养皿中加入 7 mL 无血清培养基，并根据将要添加的质粒标记培养皿。将制备好的转染混合物逐滴加入对应的培养皿中。从培养皿的外缘向中心缓慢地以环形方式加入混合物。将细胞置于37摄氏度、5%二氧化碳的培养箱中孵育。8至12小时后弃去上清液。然后向培养皿中加入10毫升完全DMEM，并继续孵育。更换培养基72小时后，在荧光显微镜下观察细胞，从培养皿中移除培养基。加入1.5毫升胰蛋白酶-EDTA溶液消化细胞。轻轻吹打使细胞脱落。然后加入 5 毫升完全培养基以终止消化。将细胞悬液转移至 15 毫升离心管中。随后用移液器吸取 20 微升细胞悬液加入血细胞计数板，进行细胞计数。收集 3 × 10⁵ 个细胞用于核糖核酸提取，以验证基因敲低效率。现在将每孔 2 × 10³ 个细胞接种至六孔板中。用移液器加入完全 DMEM，使终体积为 2 毫升。将细胞在37摄氏度、5%二氧化碳的培养箱中进行培养。每天观察集落形成情况。当对照组中大多数集落包含至少50个细胞，或培养达到10至14天时，终止培养。弃去上清液后，每孔加入一毫升磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤细胞两次，每次洗涤后弃去溶液。用一毫升10%福尔马林溶液固定细胞15分钟。弃去固定液，再用磷酸盐缓冲液（PBS）每孔一毫升洗涤细胞两次。用1毫升0.5%结晶紫溶液染色细胞10至30分钟。然后用缓慢流动的自来水轻轻冲洗平板。在室温下将细胞风干。使用相机拍摄菌落图像。转染后72小时，通过荧光显微镜确认143B细胞的转染效率，结果表明两种条件下质粒递送均有效。RT-qPCR反应分析显示，与shNC组相比，转染shSNHG6的143B细胞中SNHG6表达显著降低。克隆形成实验显示，与对照组相比，SNHG6 沉默组的克隆数量和大小均显著减少。该实验方案用于评估单细胞的长期增殖能力，相较于基于短期代谢的增殖检测方法，具有更高的生物学相关性和更明确的结果。未来的研究将把该方案拓展至其他长链非编码 RNA（LncRNA）和肿瘤模型，以系统性地探索调控癌细胞增殖潜能的机制。

colony-formation-assay-detecting-proliferative-capacity-lncrna

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LncRNA敲低骨肉瘤细胞增殖能力检测的集落形成检测

本视频介绍了集落形成实验，该实验有助于确定肺癌细胞无限增殖并形成独立集落的能力。通过分析所形成集落的数量和/或大小的变化，我们可以评估抗癌药物对集落形成细胞的影响。...

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软琼脂集落形成实验

最近研究发现，骨肉瘤中的肿瘤干细胞（CSCs）与其发病机制相关。本文介绍了从常规骨肉瘤（OS）患者活检组织获得的原代细胞培养物中分离CSCs的方法，该方法基于CSCs在非黏附条件下生长的能力。...

建立人传统型骨肉瘤的肿瘤干细胞培养

本文旨在详细描述肺转移检测（PuMA）实验方案。该模型允许研究人员利用宽场荧光显微镜或共聚焦激光扫描显微镜，在肺组织中研究转移性骨肉瘤（OS）细胞的生长情况。...

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利用定量相位成像技术对静息态和活跃态癌细胞表型进行表征。将细胞增殖、迁移和形态学检测整合于一种简便的方法中进行分析。...

一种基于延时、无标记、定量相位成像的休眠与活跃人癌细胞研究

本文介绍了一种从李-佛美尼综合征（Li-Fraumeni Syndrome, LFS）患者来源的成纤维细胞诱导生成诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells, iPSCs），通过间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）将iPSCs分化为成骨细胞，并建立疾病模型的方法 体内 使用LFS患者来源的成骨细胞研究肿瘤发生。...

利用Li-Fraumeni综合征患者来源的诱导性多能干细胞建立骨肉瘤模型

本实验方案描述了通过胫骨内注射骨肉瘤细胞，建立携带原位骨肉瘤及肺转移病灶的小鼠模型。...

胫骨内骨肉瘤细胞注射法建立原位骨肉瘤及肺转移小鼠模型

本实验方案描述了一种RNA荧光原位杂交方法，用于定位人骨肉瘤细胞中的长链非编码RNA（lncRNA）。...

RNA 荧光 原位 杂交法用于长链非编码 RNA 在人骨肉瘤细胞中的定位

本方案可用于评估光动力疗法（PDT）在细胞系中的疗效，并在将该疗法应用于动物模型之前优化PDT的实验条件。...

体外光动力疗法对骨肉瘤细胞的细胞毒性疗效 In Vitro

焦点形成实验提供了一种简单直接的方法，用于评估候选癌基因的转化潜能。...

焦点形成：一种基于细胞的检测基因致癌潜能的实验方法

学习使用集落形成实验检测lncRNA敲低对骨肉瘤细胞增殖的影响。本方案采用143B细胞系进行转染和长期培养，通过荧光显微镜和RT-qPCR验证敲低效率，为癌症生物学研究提供可靠的技术框架。

长链非编码RNA敲低骨肉瘤细胞增殖能力的克隆形成实验检测

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