Name: Trypsinizing和传代的哺乳动物细胞 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:28:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: 学习哺乳动物细胞的胰酶消化和传代技术，掌握贴壁细胞和悬浮细胞的传代方法，确保细胞健康生长和活力。本视频提供详细的实验操作指导，帮助研究人员维持细胞系的长期培养。

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本实验方法的完整文字方案可在<a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">《细胞生物学实验指南》</a>中获取。

作者无任何利益冲突需要披露。

胰蛋白酶消化与哺乳动物细胞传代培养

Trypsinizing and Subculturing Mammalian Cells

当细胞达到汇合状态时，必须进行传代培养。若不及时传代已汇合的细胞，将导致有丝分裂指数下降，并最终引起细胞死亡。传代的第一步是通过胰酶消化或机械方法使细胞从原代培养容器表面脱落。随后将所得的细胞悬液分装或重新接种至新的培养体系中。继代培养的细胞需定期观察生长情况并更换培养基，还可进一步传代以获得三级培养。细胞传代的间隔时间因细胞系不同而异，主要取决于细胞的生长速率。

当细胞达到汇合状态时，必须进行传代培养。本视频将演示贴壁细胞和悬浮细胞的传代培养操作步骤。

当细胞达到汇合状态时，必须进行传代培养。若不及时传代已汇合的细胞，将导致有丝分裂指数下降，并最终引发……

组织培养技术已在细胞生物学领域得到广泛应用。然而，培养的细胞需要定期维护以保持其健康状态。当细胞达到汇合状态时，必须对其进行传代培养或传代处理。若不这样做，将导致生长减缓，最终引起细胞死亡。在本视频中，我们将演示如何培养贴壁细胞和悬浮细胞系的组织培养细胞。大家好，我是Ricky，来自美国田纳西州东部分子病理学实验室网络Dr.LAN实验室。今天我将向您展示两种用于传代悬浮细胞和贴壁细胞的技术。要传代培养一皿细胞，我们应从一个在60毫米培养皿或25平方厘米组织培养瓶中生长至汇合的原代培养物开始，其中含有5 mL组织培养基。首先，使用无菌移液管将原代培养中的所有培养基移除。然后，用少量37摄氏度、不含钙和镁的HBSS溶液对贴壁细胞单层洗涤一次或两次，以去除可能抑制下一步中将要加入的胰蛋白酶活性的残留胎牛血清。接下来，向培养物中加入足量的温热胰蛋白酶EDTA溶液，使其完全覆盖贴壁细胞层。然后将培养板置于37摄氏度的加热板上孵育1至2分钟。孵育结束后，在平坦的表面上轻敲培养板底部，以使细胞脱落。使用倒置显微镜检查培养物，确保细胞呈圆形，这表明细胞已从表面脱离。如果细胞脱离不充分，将培养板放回预热托盘中继续孵育额外一到两分钟。观察显微镜后，用完全培养基冲洗培养皿，并将悬液转移至含有2 mL完全培养基的15 mL锥形管中。离心细胞使其沉淀，并将沉淀重悬于完全培养基中。随后，将等体积的细胞悬液加入已做好相应标记的新的培养板中。或者，也可使用血细胞计数板对细胞进行计数，并调整至所需密度，以便向每孔加入特定数量的细胞。务必用传代日期和传代次数标记每一块培养板。加入细胞悬液后，向每个新培养物中加入1毫升新鲜培养基。随后将培养板置于37摄氏度、5% CO2的湿化培养箱中孵育。在将细胞孵育过夜后，向培养板中加入新鲜培养基，并将其放回37摄氏度培养箱中。当培养板中的细胞生长至汇合状态时，可重复上述步骤再次传代，并根据需要持续进行传代。接下来，我们将向您展示如何对悬浮培养的细胞进行传代。悬浮培养细胞的传代比贴壁细胞更简单。在传代悬浮培养细胞前，需每两到三天换液一次，持续培养至细胞达到汇合状态，即细胞在悬浮液中聚集成团，培养基变得浑浊。此时轻轻旋转培养瓶即可观察到该现象。为此，从37摄氏度、5% CO2的培养箱中取出悬浮细胞培养瓶，注意不要扰动已沉降的细胞。在无菌条件下，弃去约三分之一的培养基，并加入等体积的37摄氏度预热培养基。更换培养基后，轻轻摇匀培养瓶，并将其放回37摄氏度、5% CO2的培养箱中。如果培养液体积少于15毫升，则将培养瓶平放培养，以增强细胞与培养基的接触。否则，在无需换液的培养日可将培养瓶垂直放置。通过轻柔旋转培养瓶使细胞重新悬浮，以进行观察检查。务必观察培养基中指示良好代谢生长的颜色变化。当细胞培养物达到融合状态（每毫升约250万个细胞）时，即可进行传代。再次说明，我们刚刚向您展示了如何对贴壁培养和悬浮培养的细胞进行传代。以上就是全部内容。感谢观看，祝您的所有实验顺利成功。

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Trypsinizing和传代的哺乳动物细胞

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胰蛋白酶消化与哺乳动物细胞传代培养

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