Name: 一个现场的固定化酵母细胞可视化的快速技术 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 54 s
Description: 了解固定化酵母细胞快速可视化技术，利用荧光报告基因监测HML和HMR沉默交配位点的表观遗传状态变化。该方法通过琼脂块固定细胞，适用于短期和长期显微观察实验。

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我们感谢 Pete Houston 和 Eugenia Xu 提供的全部帮助。

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<li>用于时间序列落射荧光显微镜观察的固定细胞。请注意，此方案仅在显微镜的物镜位于显微镜载物台下方时适用。 </li>
<li>将细胞以所需浓度置于液体培养基中，并滴加到长盖玻片（约 24×50 mm）上。 </li>
<li>从合成培养基平板上切取适当大小的琼脂块（此类平板自发荧光较低），并将其覆盖在细胞上。请将未用镊子夹取过的一侧琼脂面与细胞接触。 </li>
<li>对于较短时间的观察（不超过 3 小时），上述设置已足够。若在显微镜下观察到细胞移动，可减少细胞体积或增大琼脂块面积。 </li>
<li>对于较长时间的观察，可在琼脂块顶部滴加一滴新鲜液体培养基，并在琼脂块上方放置一片载玻片。该载玻片可减少琼脂块顶部的蒸发。如有需要，可用凡士林密封琼脂块与盖玻片接触的边缘，以进一步减少水分流失。我曾使用此装置连续成像长达 9 小时，期间细胞以野生型速率正常分裂。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

这是一种能够固定酵母细胞同时仍允许其生长的快速技术。我们已连续观察酵母生长长达十小时，酵母在整个实验过程中表现出野生型的分裂速率。请注意，此装置要求物镜位于显微镜载物台下方。

一种快速可视化活体固定酵母细胞的技术

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

我们在此介绍一种简单、快速且极为灵活的技术，用于通过落射荧光显微镜对生长中的酵母细胞进行固定和观察。该技术同样适用于静态酵母群体的观察，或长达十小时的时间序列实验。本研究利用显微镜技术探究酿酒酵母（S. cerevisiae）中沉默交配位点的表观遗传遗传。酿酒酵母有两个沉默交配位点HML和HMR，通常由于被包裹在异染色质中而不表达。在sir1突变背景下，沉默作用被削弱，使得每个位点可处于表达或沉默的表观遗传状态，因此在整个细胞群体中，HML和HMR均存在不同表观遗传状态的细胞混合。显微观察结果表明，在单个细胞中，HML与HMR的表观遗传状态之间无关联性。sir1细胞会随机地在不同表观遗传状态之间转换，即在先前表达的位点建立沉默，或激活先前沉默的位点。通过时间序列显微观察，追踪单个sir1细胞及其子代，以统计四种可能的表观遗传转换发生的频率，从而评估sir1细胞中各表观遗传状态的稳定性。另见Xu et al., Mol. Cell 2006。

一种用于可视化固定化酵母细胞生长的快速技术，此处应用于沉默交配位点 HML 和 HMR 的荧光报告系统

我们在此介绍一种简单、快速且极具灵活性的技术，通过落射荧光显微镜对生长中的酵母细胞进行固定和可视化观察。

本实验的目的是能够在显微镜下持续观察一群提供 sir1 细胞的群体，以便观察表观遗传状态在细胞每次连续分裂过程中发生变化的频率。取一张长形盖玻片，吸取约 7 µL 细胞，滴加在长形盖玻片上，并使用一种合成培养基平板。取一片刀片，在琼脂上进行切割，取一块琼脂块，将其提起并覆盖在细胞上。对于短期实验，最长可达三小时，仅此方法即可。而对于长期实验，我需要对细胞进行固定，此时会在琼脂垫的上方加入液体培养基，然后在整个装置的上方覆盖一块盖玻片。培养基将在两者之间起到密封作用。载玻片的作用仅仅是防止琼脂块顶部的蒸发。通过这种设置，琼脂块将保持湿润，细胞可继续分裂长达八小时，至少可达八小时。

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一个现场的固定化酵母细胞可视化的快速技术

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一种快速可视化活体固定酵母细胞的技术

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