Mikromanipulation von Hefezellen ist für meiotischen genetische Analyse oder diploiden Zygoten wählen erforderlich. Diese Mikromanipulationen werden mit dem Mikronadel einer Dissektionsmikroskop durchgeführt. Die Mikronadel wird verwendet, um Zellen zu verlagern und wird durch einen Mikromanipulator, die mit verschiedenen Graden der Automatisierung gesteuert werden.
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In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Hefe ist ein sehr praktische Zwecke geeigneten Modells, das verwendet werden, um viele verschiedene zelluläre Prozesse zu studieren. Das gemeinsame Labor-Stamm
Protokoll
Bau der diploiden Stämme
Protokoll für die Herstellung von Diploiden durch Paarung
- Die ersten Stämme sollte auf YPD oder selektiven Medium getroffen werden, wenn nötig, einzelne Kolonien zu produzieren. Die beiden haploiden Stämmen sollte der entgegengesetzten Paarungstyps (dh Mata und MATα) werden.
- Mit einer sterilen Impföse holen einen kleinen Teil einer Kolonie von einer der beiden haploiden Stämmen. Auf einer neuen YPD Platte Streifen die Schleife einmal in einer geraden Linie über die Platte. Markieren Sie die Richtung der Streifen mit einem Pfeil an der Unterseite der Platte.
- Wiederholen Sie dies für den zweiten Stamm auf d....
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Diskussion
Hefe Dissektion ist ein nützliches Werkzeug, um neue Sorten mit den gewünschten Marker auszuwählen. Bei der Ermittlung des theoretischen Wachstumsmuster von vier Ascosporen ist es wichtig, bei der Genotyp des vegetativen Zelle aussehen. Wenn ein Plasmid vorhanden ist, muss man wissen, wenn es einzelne, niedrige oder hohe Kopie ist, da dies Auswirkungen auf die Ascosporen (s) das Plasmid erhalten und wird Prognosen und Schlussfolgerungen in Bezug auf die Stämme manipuliert zu beeinflussen.
Be.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Danksagungen
Arbeiten in Laboratorium des Autors wird von der Canadian Institutes of Health Research, der Canada Foundation for Innovation, der Natural Sciences and Engineering Research Council und der Concordia University gefördert.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare | |
|---|---|---|---|---|
| Singer MSM System 200 | Mikroskop | Singer Instruments | NA | |
| D-Sorbitol | Reagenz | BioShop Canada | SOR508 | |
| Tris | Reagenz | BioShop Canada | TRS001 | |
| Zymolyase 100T | Reagenz | Seikagaku Corporation | 120493 | |
| Hefeextrakt | Reagenz | BioShop Canada | YEX401 | |
| Pepton | Reagenz | BioShop Canada | PEP 403 | |
| D-Glukose | Reagenz | BioShop Canada | GLU501 | |
| Hefenitrogenbase | Reagenz | BioShop Canada | YNB406 | |
| Bio-Trypton | Reagenz | BioShop Canada | TRP402 | |
| Natriumchlorid | Reagenz | BioShop Canada | SOD002 | |
| Kaliumacetat | Reagenz | BioShop Canada | POA 301 | |
| Agar | Reagenz | BioShop Canada | AGR003 | |
| Adeninsulfat | Reagenz | BioShop Canada | ADS201 | |
| L-Uracil | Reagenz | BioShop Canada | URA 241 | |
| L-Tryptophan | Reagenz | BioShop Canada | TRP 100 | |
| L-Histidin | Reagenz | BioShop Canada | HIS 200 | |
| L-Arginin | Reagenz | Amresco | 0877-100G | |
| L-Methionin | Reagenz | BioShop Canada | MET 222 | |
| L-Tyrosin | Reagenz | BioShop Canada | TYR 333 | |
| L-Isoleucin | Reagenz | BioShop Canada | ISO 910 | |
| L-Valin | Reagenz | BioShop Canada | VAL 201 | |
| L-Lysin | Reagenz | BioShop Canada | LYS 101 | |
| L-Phenylalanin | Reagenz | BioShop Canada | PHA 302 | |
| L-Glutaminsäure | Reagenz | BioShop Canada | GLU 202 | |
| L-Threonin | Reagenz | BioShop Canada | THR002 | |
| L-Leucin | Reagenz | BioShop Canada | LEU 222 |
Referenzen
- Sherman, F., Hicks, J. Micromanipulation and Dissection of Asci. Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology. Guthrie, C., Fink, G. R. , Academic Press. San Diego. 21-37 (1991).
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Nachdrucke und Genehmigungen
