Experimentelle Metastase Assay

Summary

Dieser Artikel beschreibt die Verfahren der experimentellen Metastasierung Assay, mit denen die metastatische Potential von humanen Krebszelllinien zu bestimmen.

Abstract

Metastasierung ist die häufigste Todesursache bei Krebspatienten. Um zu verstehen, den Mechanismus der Metastasierung, war eine experimentelle Metastasierung Assay etabliert mit immundefizienten Mäusen. Dieser Artikel umreißt die Verfahren in diesem Test beteiligt, inklusive Probenvorbereitung, intravenöse Injektion, und Kultivieren von Zellen aus der Lunge Metastasen. Kurz gesagt, wurden einer vorher festgelegten Anzahl von menschlichen Krebszellen vorbereitet

Protocol

1. Probenvorbereitung

1. Wachsen Zellen auf ~ 70% konfluent in ihren spezifischen Medien mit Wachstumsfaktoren oder FBS (zB DMEM mit 10% FBS für MC-1-Zellen). Saugen Sie Medien aus Platte und vorsichtig waschen mehrmals mit 1 x PBS (8 g / l NaCl, 0,2 g / l KCl, 1,15 g / L Na ₂ HPO ₄ .7 H ₂ O, 0,2 g / l KH ₂ PO _4, pH 7,3).
2. Absaugen PBS und 2 mL von 0,05% Trypsin in Versen (0,014 g / L von Phenolrot und 0,2 g / L EDTA-Na in 1 x PBS, pH 7,2). Schütteln Platte Zellablösung von Platte zu erleichtern. Beachten Sie die Zellen unter dem Mikroskop. Es dauert in der Regel 2-5 Minuten für die Zellen zu lös....

Discussion

Metastasierung ist die häufigste Todesursache bei Krebspatienten. Es umfasst vier wesentliche Schritte: Ablösung von Krebszellen aus ihrem primären loci, die Einfahrt in den Verkehr (intravasation), deren Ausfahrt aus dem Verkehr (Extravasation), und das Überleben und Wachstum in einem entfernten Organ. Metastase in der menschlichen gilt als ein langsamer Prozess und oft nach Jahren der Latenz manifestiert. Zur Untersuchung ihrer Progression rechtzeitig wurde die oben relativ schnell Versuchsansatz in immundefizienten M.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
DMEM	Invitrogen	10313-021
FBS	Hyclone	SH30088.03
HBSS	Invitrogen	14175-095
NaCl	Sigma-Aldrich	S9888
KCl	Mallinckrodt Baker Inc.	6838-04
Na2 HPO4.7H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	7896-04
KH2PO4	Mallinckrodt Baker Inc.	7100-12
Phenolrot	Sigma-Aldrich	P3532
EDTA-Na	EMD Millipore	4010
Trypanblau	Invitrogen	15250-061
Trypsin 2,5%	Invitrogen	15090-046
Ethanol	Ultrapure	200-CSGP
50 ml Falcon Tube	VWR international	89039-656
Mikrozentrifugenröhrchen	Axygen Scientific	MCT-175-C
Falcon 70μ m Cell Strainer	BD Biosciences	352350
5ml Falcon Culture Tube	VWR international	60818-576
Hämazytometer	Hausser Scientific	15170-208
1 ml Spritze	BD Biosciences	329650
30 ½ Gauge Nadel	BD Biosciences	305106
Mouse Reshem	Plas Labs Inc.	551-BSRR
Chirurgische Schere	Fisher Scientific	08-940
Pinzette	Fisher Scientific	08-902
Präpariermikroskop	Nikon Instruments	SMZ1500
Tischzentrifuge	Thermo Fisher Scientific, Inc.