Methodenartikel

Experimentelle Metastase Assay

DOI:

10.3791/1942

⸱

24. August 2010

 , 
1Department of Biomedical Genetics, University of Rochester Medical Center, 2Department of Dermatology, University of Rochester Medical Center

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Dieser Artikel beschreibt die Verfahren der experimentellen Metastasierung Assay, mit denen die metastatische Potential von humanen Krebszelllinien zu bestimmen.

Zusammenfassung

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Metastasierung ist die häufigste Todesursache bei Krebspatienten. Um zu verstehen, den Mechanismus der Metastasierung, war eine experimentelle Metastasierung Assay etabliert mit immundefizienten Mäusen. Dieser Artikel umreißt die Verfahren in diesem Test beteiligt, inklusive Probenvorbereitung, intravenöse Injektion, und Kultivieren von Zellen aus der Lunge Metastasen. Kurz gesagt, wurden einer vorher festgelegten Anzahl von menschlichen Krebszellen vorbereitet

Protokoll

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1. Probenvorbereitung

  1. Wachsen Zellen auf ~ 70% konfluent in ihren spezifischen Medien mit Wachstumsfaktoren oder FBS (zB DMEM mit 10% FBS für MC-1-Zellen). Saugen Sie Medien aus Platte und vorsichtig waschen mehrmals mit 1 x PBS (8 g / l NaCl, 0,2 g / l KCl, 1,15 g / L Na 2 HPO 4 .7 H 2 O, 0,2 g / l KH 2 PO 4, pH 7,3).
  2. Absaugen PBS und 2 mL von 0,05% Trypsin in Versen (0,014 g / L von Phenolrot und 0,2 g / L EDTA-Na in 1 x PBS, pH 7,2). Schütteln Platte Zellablösung von Platte zu erleichtern. Beachten Sie die Zellen unter dem Mikroskop. Es dauert in der Regel 2-5 Minuten für die Zellen zu lös....

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Diskussion

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Metastasierung ist die häufigste Todesursache bei Krebspatienten. Es umfasst vier wesentliche Schritte: Ablösung von Krebszellen aus ihrem primären loci, die Einfahrt in den Verkehr (intravasation), deren Ausfahrt aus dem Verkehr (Extravasation), und das Überleben und Wachstum in einem entfernten Organ. Metastase in der menschlichen gilt als ein langsamer Prozess und oft nach Jahren der Latenz manifestiert. Zur Untersuchung ihrer Progression rechtzeitig wurde die oben relativ schnell Versuchsansatz in immundefizienten M.......

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Danksagungen

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Dieses Protokoll wurde getestet und zunächst im Labor von Dr. Richard Hynes (MIT) optimiert. Die Finanzierung erfolgt durch die NYSTEM IDEA Award (für LX) und Ruth L. Kirschstein National Research Service Award (für LX) zur Verfügung gestellt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
DMEMInvitrogen10313-021
FBSHycloneSH30088.03
HBSSInvitrogen14175-095
NaClSigma-AldrichS9888
KClMallinckrodt Baker Inc.6838-04
Na2 HPO4.7H2OMallinckrodt Baker Inc.7896-04
KH2PO4Mallinckrodt Baker Inc.7100-12
PhenolrotSigma-AldrichP3532
EDTA-NaEMD Millipore4010
TrypanblauInvitrogen15250-061
Trypsin 2,5%Invitrogen15090-046
EthanolUltrapure200-CSGP
50 ml Falcon TubeVWR international89039-656
MikrozentrifugenröhrchenAxygen ScientificMCT-175-C
Falcon 70μ m Cell StrainerBD Biosciences352350
5ml Falcon Culture TubeVWR international60818-576
HämazytometerHausser Scientific15170-208
1 ml SpritzeBD Biosciences329650
30 ½ Gauge NadelBD Biosciences305106
Mouse ReshemPlas Labs Inc. 551-BSRR
Chirurgische SchereFisher Scientific08-940
PinzetteFisher Scientific08-902
PräpariermikroskopNikon InstrumentsSMZ1500
TischzentrifugeThermo Fisher Scientific, Inc.
75003491

Referenzen

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  1. Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
  2. Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis r....

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Schlagwörter

Experimental Metastasis AssayTail Vein InjectionImmunodeficient MiceLung MetastasesCell CultureCell ViabilityDissecting MicroscopeMetastatic AbilityCancer Cell LinesMetastasis Quantification

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