Dieser Artikel beschreibt die Verfahren der experimentellen Metastasierung Assay, mit denen die metastatische Potential von humanen Krebszelllinien zu bestimmen.
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In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Metastasierung ist die häufigste Todesursache bei Krebspatienten. Um zu verstehen, den Mechanismus der Metastasierung, war eine experimentelle Metastasierung Assay etabliert mit immundefizienten Mäusen. Dieser Artikel umreißt die Verfahren in diesem Test beteiligt, inklusive Probenvorbereitung, intravenöse Injektion, und Kultivieren von Zellen aus der Lunge Metastasen. Kurz gesagt, wurden einer vorher festgelegten Anzahl von menschlichen Krebszellen vorbereitet
Protokoll
1. Probenvorbereitung
- Wachsen Zellen auf ~ 70% konfluent in ihren spezifischen Medien mit Wachstumsfaktoren oder FBS (zB DMEM mit 10% FBS für MC-1-Zellen). Saugen Sie Medien aus Platte und vorsichtig waschen mehrmals mit 1 x PBS (8 g / l NaCl, 0,2 g / l KCl, 1,15 g / L Na 2 HPO 4 .7 H 2 O, 0,2 g / l KH 2 PO 4, pH 7,3).
- Absaugen PBS und 2 mL von 0,05% Trypsin in Versen (0,014 g / L von Phenolrot und 0,2 g / L EDTA-Na in 1 x PBS, pH 7,2). Schütteln Platte Zellablösung von Platte zu erleichtern. Beachten Sie die Zellen unter dem Mikroskop. Es dauert in der Regel 2-5 Minuten für die Zellen zu lös....
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Diskussion
Metastasierung ist die häufigste Todesursache bei Krebspatienten. Es umfasst vier wesentliche Schritte: Ablösung von Krebszellen aus ihrem primären loci, die Einfahrt in den Verkehr (intravasation), deren Ausfahrt aus dem Verkehr (Extravasation), und das Überleben und Wachstum in einem entfernten Organ. Metastase in der menschlichen gilt als ein langsamer Prozess und oft nach Jahren der Latenz manifestiert. Zur Untersuchung ihrer Progression rechtzeitig wurde die oben relativ schnell Versuchsansatz in immundefizienten M.......
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Danksagungen
Dieses Protokoll wurde getestet und zunächst im Labor von Dr. Richard Hynes (MIT) optimiert. Die Finanzierung erfolgt durch die NYSTEM IDEA Award (für LX) und Ruth L. Kirschstein National Research Service Award (für LX) zur Verfügung gestellt.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | |
| FBS | Hyclone | SH30088.03 | |
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | |
| KCl | Mallinckrodt Baker Inc. | 6838-04 | |
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 7896-04 | |
| KH2PO4 | Mallinckrodt Baker Inc. | 7100-12 | |
| Phenolrot | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| EDTA-Na | EMD Millipore | 4010 | |
| Trypanblau | Invitrogen | 15250-061 | |
| Trypsin 2,5 % | Invitrogen | 15090-046 | |
| Äthanol | Ultrapure | 200-CSGP | |
| 50-ml-Falcon-Röhrchen | VWR international | 89039-656 | |
| Mikrozentrifugenröhrchen | Axygen Scientific | MCT-175-C | |
| Falcon 70μm-Zellfilter | BD Biosciences | 352350 | |
| 5-ml-Falcon-Kulturröhrchen | VWR international | 60818-576 | |
| Hämozytometer | Hausser Scientific | 15170-208 | |
| 1-ml-Spritze | BD Biosciences | 329650 | |
| 30 ½-Gauge-Nadel | BD Biosciences | 305106 | |
| Mausfixierungsgerät | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | |
| Chirurgische Schere | Fisher Scientific | 08-940 | |
| Pinzette | Fisher Scientific | 08-902 | |
| Präparationsmikroskop | Nikon Instruments | SMZ1500 | |
| Tischzentrifuge | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 75003491 |
Referenzen
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis r....
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Nachdrucke und Genehmigungen
