Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) ist ein wirksames Instrument zur mRNA-Spiegel in verschiedenen Insekten-Geweben und Entwicklungsstadien zu diagnostizieren. In diesem Bericht zeigen wir die Verwendung von qRT-PCR, um festzustellen mRNA-Spiegel in verschiedenen Larvenstadien Geweben und Entwicklungsstadien der invasiven Insektenarten, Smaragd Asche borer.
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Methodenartikel
Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer ( Agrilus planipennis) Mittels quantitativer Real Time-PCR
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Smaragd Asche borer (EAB,
Protokoll
Die vollständige Protokoll mit den unterschiedlichen Schritten in dem Flussdiagramm in Abbildung 1 dargestellt. Einzelne Schritte bilden Dissektion, sind RNA-Extraktion, First Strand cDNA-Synthese und qRT-PCR weiter unten beschrieben.
I. Larven Dissection
- Vor Beginn des Verfahrens, Ort Smaragd Asche borer oder EAB, Larven auf feuchten Papiertüchern bis Dissektionen durchgeführt werden. Halten Sie frisch zubereiteten 1X Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung oder PBS, auf Eis, um den Puffer Kälte während der Zerlegung zu halten.
- Um zu beginnen, fixieren die EAB Larven auf die Zerlegung Platte mit feinen Sezierung Pins. Da....
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Diskussion
Der Schwellenwert-Zyklen (Ct)-Wert für jede Probe in der qRT-PCR-Platte erhalten. Zur Herstellung der Standardkurve wurde die Ct-Wert für jede Verdünnung erhalten gegen den log der Konzentration aufgetragen. Die Ct-Werte für die experimentellen Proben wurden dann auf dieser Verdünnungsreihe Standardkurve aufgetragen. Ziel Mengen wurden aus separaten Standard-Kurven für jedes Experiment dh Gewebe-und Entwicklungs-Ausdruck erzeugt werden berechnet. Die relative Expression Werte (Umdrehungen) wurden dann durch Division der.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Wir erkennen die Hilfe von Lourdes Delta Arrueta Antequera (Abteilung Entomologie, Ohio State University / OARDC, Wooster, OH) in den Aufbau der Experimente zur Verfügung gestellt. Wir danken Dr. Therese Polen (USDA, Forest Services, NRS) für Sende-EAB Larven Proben. Hilfe zur Verfügung gestellt von Dr. Luis A Canas und Nuris M Acosta mit dem Mikroskop Setup geschätzt wird. Die Finanzierung für dieses Projekt wurde von Staats-und Bundesmittel angeeignet, die Ohio Agricultural Research and Development Center, The Ohio State University zur Verfügung gestellt.
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Referenzen
- Lehane, M. J. Peritrophic matrix structure and function. Annu Rev Entomol. 42, 525-550 (1997).
- Mittapalli, O., Sardesai, N., Shukle, R. H. cDNA cloning and transcriptional expression of a peritrophin-like gene in the Hessian fly, Mayetiola dest....
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Nachdrucke und Genehmigungen
