Entfernung von Insektenpuppen: Eine Methode zur Untersuchung von Puppen

Zusammenfassung

Quelle: Fukutomi, Y., et al. Methoden zur Inszenierung von Puppenperioden und Messung der Flügelpigmentierung von Drosophila guttifera.J. Vis. Exp. (2018).

Dieser Artikel beschreibt eine Technik, um die Puppe eines Insekts zu entfernen, während die innere Puppe intakt bleibt und daher für weitere Untersuchungen geeignet bleibt. Das Beispielprotokoll zeigt die Vorgehensweise mit Drosophila guttifera; Diese Technik ist jedoch auch auf andere Drosophila-Arten anwendbar.

Protokoll

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Fukutomi et al., Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera, J. Vis. Exp. (2018).

>1. Entfernen von Puppen

HINWEIS Puppen von Drosophila sind von einer Struktur bedeckt, die Puparium genannt wird. Ein Insekt von Muscomorpha (Fliegen) wirft seine Larvenkutikula bei der Verpuppung nicht ab; Stattdessen härtet es die Nagelhaut nach der Apolyse aus und verwendet sie als Schutzhülle der Puppe, des Pupariums. Eine Puppe, die sich in einer Puppe befindet, hat eine echte Puppenkutikula, die sehr weich und zerbrechlich ist. Bevor die Apolyse um P4(ii) herum stattfindet, werden Epithelien und Puppen miteinander verbunden, und daher ist es sehr schwierig, das Puppe ohne Beschädigung zu entfernen. Nach P5 ist die Entfernung des Pupariums mühsam, aber nützlich für die morphologische Beobachtung und Definition der Puppenstadien. Der Prozess wird wie folgt durchgeführt.

1. Kleben Sie ein Stück doppelseitiges Klebeband auf ein Stück Papiertuch.
2. Legen Sie eine Puppe mit der Bauchseite nach oben auf das doppelseitige Klebeband (Abbildung 1A).
3. Lokalisieren Sie den Raum zwischen der vorderen Seite des Pupariums und der inneren Puppe. Fassen und entfernen Sie das Puparium um diesen Spalt herum mit einer Pinzette und legen Sie die vordere Seite des Kopfes der Puppe frei.
4. Führen Sie die Spitze einer Pinzette ein, indem Sie sie parallel zur vorder-hinteren Achse bewegen. Hebe die Spitze der Pinzette an, um das Puppenholz lokal zu brechen. Wiederholen Sie diesen Vorgang, bis der Bruch den hinteren Teil des Pupariums erreicht. Stellen Sie sicher, dass auch zwischen dem Puppenbein und den Puppenbeinen ein Spalt gebildet wird, und brechen Sie die ventrale Seite des Puppes auf, um die Schädigung der inneren Puppe zu minimieren (Abbildung 1B).
5. Nachdem Sie die Puppe so weit wie möglich zerbrochen haben, nehmen Sie die Puppe mit einem feinen Pinsel (#5/0) heraus (Abbildung 1C).
6. Legen Sie die Puppe auf ein mit ddH₂O angefeuchtetes Stück Seidenpapier und legen Sie sie in eine Petrischale aus Kunststoff (Durchmesser 60 mm x Höhe 15 mm). Fotografieren Sie so schnell wie möglich, da die freiliegende Puppe verletzlich ist und leicht austrocknet.
    

Ergebnisse

Abbildung 1. Illustration der Entnahme von Puparium.(A) Legen Sie eine Puppe mit der Bauchseite nach oben auf ein Stück doppelseitiges Klebeband. Entfernen Sie den vorderen Teil des Pupariums. (B) Brechen Sie das Puparium mit einer Pinzette von der ventralen Seit...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Drosophila guttifera	Das Drosophila Species Stock Center an der U.C. San Diego	Nr. 15130-1971.10	Drosophila guttifera, eine Fruchtfliegenart, die in diesem Artikel verwendet wird
NICETACK doppelseitiges Klebeband	Nichiban	NW-15SF	Doppelseitiges Klebeband, zum Entfernen von Puppen
Dumont #5 Pinzette	Werkzeuge für die Feinwissenschaft	Nr. 11252-20	Pinzette, zum Entfernen von Puppen
Van Gogh VISUAL Pinsel	Talens Japan	GWVR-#5/0	Pinsel, zum Entfernen von Puppen
stereomikroskop	Olymp	SZX16	Stereomikroskop, für die morphologische Beobachtung
Digitalkamera	Olymp	DSE-330-A	Digitalkamera, für Bildgebung
Falcon Standard-Gewebekulturschale	Corning	353002	Petrischale aus Kunststoff (Durchmesser 60 mm x Höhe 15 mm)