Fly Climbing Assay: Eine Methode zum Testen der allgemeinen Fortbewegung bei Drosophila melanogaster

Zusammenfassung

Quelle: Gevedon, O., et al. In Vivo Forward Genetic Screen zur Identifizierung neuer neuroprotektiver Gene in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Dieses Video beschreibt eine einfache Methode zur Quantifizierung der Fortbewegung von Fliegen und zeigt den durchgeführten Kletter-Assay. Der Fly-Climbing-Assay ist ein allgemeiner Test der motorischen Funktion, der auf einer negativen Geotaxis-Reaktion beruht.

Protokoll

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp.(2019).

>1. Kletter-Assay (Adaptiert von Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Validieren Sie den Kletter-Assay. In dieser Studie wurde der Kletterassay basierend auf der zuvor beschriebenen Methodik von Ali et al. getestet, wobei Elav^C155>UAS-Tau^R406W (mit niedrigeren Steigdurchgangsraten) und Elav^C155>UAS-GFP (Kontrolle) und Elav^C155>UAS-mCherry (Kontrolle) Fliegen verwendet wurden.
2. Drehen Sie die Fliegen in eine Testkammer, einen Strich nach dem anderen (verwenden Sie keine CO₂ -Anästhesie) und lassen Sie sie 5 Minuten lang erholen. Wenn der Test an verschiedenen Tagen durchgeführt wird, führen Sie den Test zur gleichen Tageszeit durch. In dieser Studie wurden alle Kletterassays am Nachmittag durchgeführt, um zirkadiane Effekte auf die Fortbewegung zu kontrollieren.
   HINWEIS Vermeiden Sie es, die Fliegen beim Testen direktem Sonnenlicht auszusetzen; Dies beeinträchtigt ihre Fähigkeit zu klettern.
3. Tippen Sie 3 Mal gewaltsam auf die Kammer (mit der markierten Seite nach unten) auf ein Mauspad, das auf einer festen Oberfläche platziert ist, damit alle Fliegen den Assay unten beginnen. Beobachten Sie die Fortbewegung der Fliege über einen Zeitraum von 10 s.
4. Notieren Sie die Anzahl der Fliegen, die innerhalb dieser Zeit die 5-cm-Linie erreichen oder passieren, sowie die Gesamtzahl der getesteten Fliegen. Wiederholen Sie das Protokoll und warten Sie zwischen den einzelnen Versuchen 1 Minute für mindestens 3 Versuchswiederholungen pro Zeile.
   > der vorliegenden Studie enthielt jedes Fläschchen zwischen 2 und 19 Fliegen für das erste Screening (männliche Fliegen) und zwischen 6 und 21 Fliegen für die Mutantenmangelanalyse gekreuzter weiblicher Linien.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
VWR® Drosophila Fläschchen; Schmal	VWR	75813-160
VWR® Allzweck-Labor-Beschriftungsband	VWR	Tel.: 89097-912
Standard-Mauspad
Stereoskop	Motic		Modell SMZ-168
Drosophila Inkubator	VWR	Artikel-Nr.: 89510-750
R Softwarepaket