Drosophila Dissektion der Imaginalscheibe der Larva: Eine Methode zur Beobachtung der Entwicklung von Epithelien

Zusammenfassung

Quelle: Morimoto, K. und Tamori, Y. Induktion und Diagnose von Tumoren bei Drosophila Imaginal Disc Epithelien. J. Vis. Exp. (2017).

Bei der Färbung von Drosophila-Imaginalscheiben wird oft eine grobe Dissektion durchgeführt, bei der die Scheiben freigelegt werden, aber am Körper haften. Nach dem Färben werden die interessierenden Discs isoliert und montiert. Das Beispielprotokoll demonstriert ein Verfahren zum Disparieren und Montieren von Flügel-Imaginalscheiben.

Protokoll

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Morimoto und Tamori, Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia, J. Vis. Exp. (2017).

>1. Zerlegung von Larven

1. Sammeln Sie wandernde Larven des dritten Stadiums mit einem Holzstab oder einer stumpfen Pinzette, genotypisieren Sie sie mit geeigneten Fluoreszenzmarkern (z. B. EGFP) unter einem stereoskopischen Fluoreszenzmikroskop und legen Sie sie in eine Sezierschale mit PBS (phosphatgepufferte Kochsalzlösung).
2. Waschen Sie die Larven in PBS, indem Sie sie mit 2-ml-Kunststoffpipetten pipettieren.
3. Mit eine....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
reagenzien
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)	Wako	Nr. 162-19321
TritonX-100	Wako	Nr. 168-11805
Formaldehyd	Wako	Tel.: 064-00406
Serumalbumin für Rinder	Sigma	Nr. A7906
Normales Ziegenserum	Sigma	Nr. G6767
Eindeckmedium, Vectashield	Vector Laboratorien	H-1000
DAPI	Sigma	Nr. D9542
Maus-Anti-Dlg 4F3	Entwicklungsstudien Hybridom-Bank	4F3 Anti-Discs groß, RRID:AB_528203	in PBTG verdünnen, 1:40
Anti-MMP1 für Maus	Entwicklungsstudien Hybridom-Bank	3A6B4, RRID:AB_579780	3 gemischt 1:1:1 und verdünnt in PBTG, 1:40
Anti-MMP1 für Maus	Entwicklungsstudien Hybridom-Bank	3B8D12, RRID:AB_579781	3 gemischt 1:1:1 und verdünnt in PBTG, 1:40
Anti-MMP1 für Maus	Entwicklungsstudien Hybridom-Bank	5H7B11, RRID:AB_579779	3 gemischt 1:1:1 und verdünnt in PBTG, 1:40
Anti-Atubulin für Maus	Entwicklungsstudien Hybridom-Bank	AA4.3, RRID:AB_579793	verdünnt in PBTG, 1:100
Alexa Fluor 546 Phalloidin	Molekulare Sonden	Nr. A22283	in PBS verdünnen, 1:40
Anti-Maus-IgG-Antikörper für Ziegen, Alexa Fluor 546	Molekulare Sonden	Nr. A11030	verdünnt in PBTG, 1:400
Fliegen-Stämme
sd-Gal4	Bloomington Drosophila Stock Center	#8609	rekombiniert mit UAS-EGFP
upd-Gal4	Bloomington Drosophila Stock Center	#26796	rekombiniert mit UAS-EGFP
UAS-lgl-RNAi	Wiener Drosophila RNAi-Zentrum	#51247
UAS-scrib-RNAi	Wiener Drosophila RNAi-Zentrum	#105412
UAS-RasV12	Bloomington Drosophila Stock Center	#64196
Fachhochschule Yki3SA	Bloomington Drosophila Stock Center	#28817
hsFLP	Bloomington Drosophila Stock Center	#6
Act>CD2>GAL4 (ausklappbares GAL4)	Bloomington Drosophila Stock Center	#4780	rekombiniert mit UAS-EGFP
UAS-EGFP	Bloomington Drosophila Stock Center	#5428	X-chromosom
UAS-EGFP	Bloomington Drosophila Stock Center	#6658	drittes Chromosom
UAS-Dicer2	Bloomington Drosophila Stock Center	#24650	zweites Chromosom
UAS-Dicer2	Bloomington Drosophila Stock Center	#24651	drittes Chromosom
vkg-GFP	Morin et al. 2001		GFP-Proteinfalle