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Methodenartikel

Mechanische Entfernung der Chorion- und Vitellinmembran: Eine Methode zur Vorbereitung von Drosophila-Eizellen für die direkte Beobachtung

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30. April 2023

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Perkins, A. T., Bickel, S. E. Verwendung von Fluoreszenz-In-situ-Hybridisierung (FISH) zur Überwachung des Zustands der Armkohäsion in Prometaphase- und Metaphase-I-Drosophila-Oozyten. J. Vis. Exp. (2017).

Dieses Video beschreibt eine Methode zur mechanischen Entfernung der Chorion- und Vitellinmembranen von zuvor fixierten reifen Drosophila-Eizellen. Das vorgestellte Protokoll zeigt eine detaillierte Demonstration des Verfahrens, das Eizellen liefert, die mit fluoreszierenden In-situ-Hybridisierungsassays kompatibel sind.

Protokoll

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Perkins und Bickel, Using Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) to monitor the state of arm cohesion in Prometaphase and Metaphase I Drosophila Oocytes, J. Vis. Exp. (2017).

1. Entfernung von Chorionen und Vitellinmembranen

HINWEIS: Siehe Abbildung 1 für benötigte Werkzeuge.

  1. Separieren Sie Eizellen im Spätstadium
    1. Geben Sie 1 ml PBSBTx in eine flache Präparierschale. Verwenden Sie einen P200 mit einer BSA-beschichteten Spitze, um fixierte Eierstöcke....

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Zytologie-Werkzeuge. Im Protokoll verwendete Werkzeuge: (1) Paar Pinzetten (#5 Dumont); (2) Wolframnadel; (3) Tiefbrunnenschale mit Deckel; (4) Sezierschale aus flachem Glas; (5) gezogene Pasteur-Pipette. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Rinderserumalbumin (BSA)Fisher ScientificArtikel-Nr.: BP1600-100Bereiten Sie 10% Stock
vor Aliquots einfrieren
10% Triton X-100Thermo ScientificArtikel-Nr.: 28314Surfact-Verstärker
PBSBTx1X PBS, 0,5 % BSA, 0,1 % Trition X-100
ZangeDumont#5 INOX, Biologie
9" Einweg-Pasteur-Pipetten aus GlasFischer13-678-20CAutoklav zum Sterilisieren
Sezierschale aus flachem GlasSonderanfertigung
Tiefbrunnen-Schale (3 Vertiefungen)Pyrex7223-34
Wolfram-Nadelselbstgemacht
Objektträger aus Milchglas, 25 x 75 mmVWR ScientificArtikel-Nr.: 48312-002
15 mL konische Röhrchenverschieden
500 μl Mikrofugenröhrchenverschieden
KimwipesverschiedenEinweg-Tücher

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