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Abstract

Quelle: Trannoy, S., et al. Ein neuer Ansatz, der das Handling zur Untersuchung von Aggression und dem “Verlierer”-Effekt bei Drosophila melanogaster eliminiert. J. Vis. Exp. (2015).

Aggression ist ein angeborenes Verhalten und frühere Kampferfahrungen beeinflussen die Kampfstrategie und den Ausgang späterer Wettkämpfe in Fliegen. Dieses Video beschreibt einen Assay, der zur Untersuchung des aggressiven Verhaltens von Drosophila verwendet wird. Das Beispielprotokoll zeigt den Assay in einem Setup, das den Umgang mit Fliegen eliminiert und somit den Stress für die Tiere reduziert, der sich sonst auf die Leistung der Probanden auswirken würde.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Trannoy et al., A New Approach that Elimination Handling for Studying Aggression and the “Loser” Effect in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2015).

1. Verhaltens-Experiment

1. Führen Sie die Verhaltensexperimente mit 6-7 Tage alten männlichen Fliegen durch.
2. Setze Plastiktrennwände in jede Kampfkammer ein.
3. Entfernen Sie den Wattestopfen vom Isolationsschlauch und positionieren Sie den Schlauch unter einem offenen Loch an der Seite des Geräts.
4. Lassen Sie die Fliege durch negative Geotaxis in die Kampfkammer eindringen, in der Regel innerhalb weniger Sekunden.
5. Schließen Sie die Schiebewand, nachdem die Fliege das Rohr verlassen und in die Kammer eingedrungen ist.
6. Wiederholen Sie den Vorgang, um die zweite Fliege in die Kampfkammer auf der anderen Seite des Geräts einzuführen.
7. Bringen Sie das Gerät wieder in die Position der beleuchteten Videoaufnahme.
8. Starten Sie die Videoaufzeichnung und entfernen Sie die Plastiktrennwand, damit die Fliegen interagieren können.
   1. Für Aggressionsexperimente:
      1. In diesen Experimenten werden Kämpfe mindestens 20 Minuten lang aufgezeichnet, um die Bildung starker Dominanzbeziehungen zu gewährleisten.
      2. Stoppen Sie nach der gewünschten Zeit die Videoaufnahme.
      3. Entfernen Sie Fliegen aus den Kampfkammern, indem Sie das oben beschriebene Verfahren umkehren.
      4. Waschen Sie das Verhaltensgerät nach jedem Gebrauch gründlich mit mildem Reinigungsmittel und Wasser und spülen Sie es aus.
   2. Für “Verlierer”-Effekt-Experimente:
      HINWEIS: In diesen Experimenten werden die ersten Kämpfe als Konditionierungsphase und die zweiten Kämpfe als Testphase betrachtet. Die Ruhezeit zwischen den Kämpfen kann unterschiedlich sein, aber 10 Minuten ermöglichen die Bildung eines starken “Verlierer”-Effekts.
      1. Befolgen Sie das oben beschriebene Verfahren, um einen ersten Kampf durchzuführen.
      2. KRITISCHER SCHRITT: Um die Bildung einer “Verlierer”-Mentalität zu induzieren, stellen Sie sicher, dass die ersten Kämpfe mindestens 20 Minuten lang sind, um starke Dominanzbeziehungen aufzubauen. Setzen Sie nach 20 Minuten die Kunststofftrennwand wieder in die Kampfkammern ein, um die Fliegen zu trennen.
      3. Entfernen Sie nach einer 10-minütigen Ruhephase vorsichtig die Plastiktrennwand, damit die Fliegen für zweite Kämpfe interagieren können.
      4. Am Ende des zweiten 20-minütigen Kampfes stoppst du die Videoaufnahme.
      5. Entfernen Sie Fliegen aus Verhaltenskammern wie oben.
      6. Reinigen Sie den Verhaltensapparat noch einmal gründlich.

Materials

Behavioral chambers	Mike machine		Fabricated in-house. Directly contact the company for more information.
Borosilicate glass vials	VWR International	47729-576	16 x 10 mm
Cotton	Fisherbrand	22-456-881	Any brand can be used
Srew cap tube	VWR International	10011-394	15 mm diameter, 10 mm height
Plastic slices	Electron Microscopy Sciences	70329-40	22 x 40 x 0.25 mm Thickness
Light source (bulb)	VWR International	500003-418	Any brand can be used
Timer	VWR International	62344-641	Any brand can be used
Binocular	Nikon	SMZ-745	Any brand can be used
Camera (SONY Handycam HDR-CX330)	B&H	SOHDRCX330B	Any brand can be used