Temperaturgradienten-Assay: Eine Methode zum Testen der Temperaturpräferenz bei Drosophila-Larven

Abstract

Quelle: Liu, J., et al. Ein Temperaturgradienten-Assay zur Bestimmung der thermischen Präferenzen von Drosophila-Larven. J. Vis. Exp. (2018).

Drosophila-Fruchtfliegen können kleine Temperaturänderungen erkennen und daher Umgebungen mit günstigen thermischen Bedingungen auswählen. Dieses Video beschreibt einen Verhaltensassay, der die Temperaturpräferenz von Drosophila-Larven auf einem linearen thermischen Gradienten testet.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Liu et al. Ein Temperaturgradienten-Assay zur Bestimmung der thermischen Präferenzen von Drosophila-Larven, J. Vis. Exp. (2018).

1. Einstellung des Temperaturgradienten

1. Vorbereiten eines unidirektionalen Gradienten
   1. Um während der Assays eine feuchte Umgebung zu schaffen, legen Sie die beiden Aluminiumblöcke, die mit zwei Wasserbädern verbunden sind, im Abstand von 10 cm auf feuchte Papiertücher (Abbildung 1A).
   2. Schalten Sie die beiden Wasserbäder ~2 h vor Beginn des Assays ein, um genügend Zeit zu h....

Results

Abbildung 1: Ein- und bidirektionale Gradienten-Assay-Setups. (A) Aufbau eines unidirektionalen Gradienten mit zwei Aluminium-Assay-Platten auf zwei Aluminiumblöcken. Die Temperaturen der Aluminiumblöcke werden durch zirkulierendes Wasser aus zwei Wasserbädern gesteuert. (B) Die Anordnung der drei Aluminiumblöcke, Wasserbäder und einer Aluminiumplatte (250 x 220 mm) für ein bidirektio.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Gradienten-Assay-Gerät
PolyScience 9106, Gekühltes/beheiztes 6L Umwälzbad	Thomas Wissenschaftlich	9106	Dieses Modell wird nicht mehr hergestellt. Zu den aktualisierten Ersatzmodellen gehören: 1186R00 und 1197U04 für 120 V, 60 Hz oder 1184L08 und 1197U04 für 240 V, 50 Hz.
Aluminium-Assay-Platte (für einen einseitigen Gradienten)			Außenmaße: 14 x 10,1 x 0,9 cm, Innenmaße: 12,9 x 8,7 x 0,8 cm, schwarz eloxiert.
Aluminiumplatte (für bidirektionales Gefälle)			25 x 22 x 0,2 cm, schwarz eloxiert.
Aluminium-Block			Außenmaße: 25,5 x 5 x 1,4 cm, die Parameter der Innenkanäle sind in Abbildung 1D dargestellt.
Verbinder für Aluminiumblöcke und -schläuche	McMaster-Carr	Artikel-Nr.: 91355K82
Tygon Sanitär-Silikonschlauch	Tygon	Artikel-Nr.: 57296	1/4" ID x 3/8" AD x 1/16" Wand
Name	Firma	Katalognummer	Kommentare
Artikel und Reagenzien für den Assay
Stößel	USA Wissenschaftlich	Nr. 17361	Stößel für 1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen
Thermometer	Fluke	51II
Thermoelement	Fluke	Typ K
Universeller Mikrotiterplatten-Deckel	Corning	Artikel-Nr.: 6980A77
35 mm Schüssel	Corning	9380D40
Beschriftungsband (für bidirektionalen Gradienten)	Fisher Scientific	Nr. 15-951	Fisherbrand Beschriftungsband 2 Zoll x 14 Meter
Agarose	Invitrogen	16500500	Bereiten Sie eine 1%ige Lösung vor
Saccharose	Sigma	Nr. S0389-5KG	Bereiten Sie eine 18%ige Lösung direkt vor Beginn des Assays
Pinsel	Fisher Scientific	Nr. 11860
50 mL Zentrifugenröhrchen	Denville	C1062-P
Scoopula	Fisher Scientific	14-357Q
500 mL runde Weithalsflasche	Pyrex	Nr. 1395-500
Zellsieb (300 mm Pore)	PluriSelect	Tel.: 43-50300	Optionaler Artikel zum Waschen der Larven
Karton (Fläschchenschale)	Genesee Scientific	FS32-124