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Lee und Kang, Messung der Wirkung von Chemikalien auf das Wachstum und die Fortpflanzung von Caenorhabditis elegans, J. Vis. exp. (2017).
1. C. elegans Eiablage-Assay
- Die alterssynchronisierten Eier werden auf der NGM-Platte, die DMSO oder Etoposid enthält, 64 h (vor der ersten Geburt) bis zum Stadium des jungen Erwachsenen bei 20 °C inkubiert
HINWEIS: Es ist optional, die Würmer aus den Versuchen zur Wachstumsmessung zu verwenden. Es ist praktisch, die Wachstumsmessung und den Eiablage-Assay zusammen durchzuführen.
- 5 adulte Würmer werden ohne Chemikalien auf die neuen NGM-Platten (Bedingung 1, chemische Behandlung innerhalb eines bestimmten Zeitraums, vom Ei bis zum jungen Erwachsenenstadium) oder auf die neue NGM-Platte mit der gleichen chemischen Vorbehandlung (Bedingung 2, kontinuierliche Exposition gegenüber Chemikalien während des gesamten Versuchszeitraums) übertragen und dann für 24 h.
inkubiert
HINWEIS: Es wird empfohlen, für jede Behandlung Replikate mit 3-5 NGM-Platten zu erstellen. Diese Replikate können für statistische Analysen verwendet werden.
- Wie oben beschrieben auf die neue NGM-Platte umfüllen und die Anzahl der Eizellen jeden Tag zählen. Zähle die Würmer, die abgekrochen, gestorben und innerlich geschlüpft sind.
- Wiederholen Sie diese Schritte, bis die Würmer keine Eier mehr legen, normalerweise in 5 Tagen.
- Berechnen Sie die Anzahl der Eier, die pro Wurm von jeder Platte gelegt werden, und addieren Sie diese Werte jeden Tag für 5 Tage, um die Gesamtzahl der gelegten Eier zu bestimmen.
HINWEIS: Schließen Sie die Anzahl der Würmer, die abgekrochen und intern geschlüpft sind, aus der Berechnung aus.