Egg Laying Assay: Eine Methode zur Quantifizierung des Eiablageverhaltens von C. elegans

Zusammenfassung

Quelle: Lee, S. Y. und Kang, K. Messung der Wirkung von Chemikalien auf das Wachstum und die Fortpflanzung von Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2017).

C. elegans Eiablageverhalten kann wichtige Informationen in Entwicklungs-, Reproduktions- und anatomischen Studien liefern. Dieses Video stellt die wichtigen Schritte eines Eiablageassays vor und zeigt ein Beispielexperiment, in dem ein Medikament auf Reproduktionstoxizität getestet wird.

Protokoll

Lee und Kang, Messung der Wirkung von Chemikalien auf das Wachstum und die Fortpflanzung von Caenorhabditis elegans, J. Vis. exp. (2017).

1. C. elegans Eiablage-Assay

1. Die alterssynchronisierten Eier werden auf der NGM-Platte, die DMSO oder Etoposid enthält, 64 h (vor der ersten Geburt) bis zum Stadium des jungen Erwachsenen bei 20 °C inkubiert
   HINWEIS: Es ist optional, die Würmer aus den Versuchen zur Wachstumsmessung zu verwenden. Es ist praktisch, die Wachstumsmessung und den Eiablage-Assay zusammen durchzuführen.
2. 5 adulte Würmer werden ohne Chemikalien auf die neuen NGM-Platten (Bedingung 1, chemische Behandlung innerhalb eines bestimmten Zeitraums, vom Ei bis zum jungen Erwachsenenstadium) oder auf die neue NGM-Platte mit der gleichen chemischen Vorbehandlung (Bedingung 2, kontinuierliche Exposition gegenüber Chemikalien während des gesamten Versuchszeitraums) übertragen und dann für 24 h.
   inkubiert HINWEIS: Es wird empfohlen, für jede Behandlung Replikate mit 3-5 NGM-Platten zu erstellen. Diese Replikate können für statistische Analysen verwendet werden.
3. Wie oben beschrieben auf die neue NGM-Platte umfüllen und die Anzahl der Eizellen jeden Tag zählen. Zähle die Würmer, die abgekrochen, gestorben und innerlich geschlüpft sind.
4. Wiederholen Sie diese Schritte, bis die Würmer keine Eier mehr legen, normalerweise in 5 Tagen.
5. Berechnen Sie die Anzahl der Eier, die pro Wurm von jeder Platte gelegt werden, und addieren Sie diese Werte jeden Tag für 5 Tage, um die Gesamtzahl der gelegten Eier zu bestimmen.
   HINWEIS: Schließen Sie die Anzahl der Würmer, die abgekrochen und intern geschlüpft sind, aus der Berechnung aus.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wildtype
Dimethylsulfoxid	Sigma, Vereinigte Staaten von Amerika	Nr. D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetikzentrum (CGC)
Etoposid	Sigma, Vereinigte Staaten von Amerika	Nr. E1383
35 × 10 mm Petrischale	SPL Life Sciences, Südkorea	Nr. 10035
Stereomikroskop	Nikon, Japan	SMZ800N