C. elegans Blastomer-Dissektion: Eine Methode zur Entfernung der Eierschale und zur Dissoziation embryonaler Zellen

Abstract

Quelle: Hsu, C. R., et al. In vitro Rekonstitution von räumlichen Zellkontaktmustern mit isolierten Caenorhabditis elegans, Embryo-Blastomeren und selbstklebenden Polystyrol-Kügelchen.J. Vis. Exp.(2019).

Dieses Video stellt eine Methode vor, mit der C. elegans-Blastomere aus frühen Embryonen isoliert werden können. Die resultierenden Zellen eignen sich für Zellkultur- oder ex vivo-Experimente.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Hsu et al., In Vitro Reconstitution of Spatial Cell Contact Patterns with Isolated Caenorhabditis elegans Embryo Blastomere and Adhesive Polystyren Beads, J. Vis.(2019).

1. Isolierung von embryonalem Blastomer
2. Tragen Sie Handschuhe und einen Laborkittel, um Schnitte und Kontakt mit der Bleichlösung zu vermeiden.
   1. Halten Sie jedes Ende einer Mikrokapillare (Kapazität; 10 μl) mit der rechten und linken Hand fest.
   2. Ziehe....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aspirator-Rohr-Baugruppe	Drummond	21-180-13	Für die Blastomerisolierung.
Caenorhabditis elegans Stamm: N2, Wildtyp	Caenorhabditis Genetik Zentrum	N2	In dieser Studie verwendeter Stamm
Caenorhabditis elegans Stamm: KSG5, Genotyp: zuIs45; itIs37	im Haus	KSG5	In dieser Studie verwendeter Stamm
kalibrierte Mikropipetten, 10 μL	Drummond	Artikel-Nr.: 21-180-13	Für die Blastomer-Isolierung
CD Lipid Konzentrat	Lebenstechnologien	11905031	Für die Blastomer-Isolierung. Arbeiten in der Gewebekulturhaube.
Clorox	Clorox	N. A.	Für die Blastomer-Isolierung. Öffnen Sie eine neue Flasche, wenn die Hypochlorit-Behandlung nicht gut wirkt.
Deckglashalter	Im Haus	N.A.	Für die Blastomer-Isolierung.
Präpariermikroskop: Zeiss Stemi 508 mit M-Stativ. Die Lichtquelle ist die eingebaute LED. Die Vergrößerung des Okulars beträgt 10X.	Carl Zeiss	Stemi 508	Für die Blastomer-Isolierung.
Fötales Rinderserum, Qualified One Shot, Herkunft aus Kanada	Gibco	A3160701	Für die Blastomer-Isolierung. Arbeiten in der Gewebekulturhaube.
Injektionsnadeln für den allgemeinen Gebrauch und Präzisionsgleiten, 25 Gauge	Bd	Nr. 14-826AA	Für die Blastomer-Isolierung
Inulin	Alfa Aesar	AAA1842509	Für die Blastomer-Isolierung
MEM Vitaminlösung (100x)	Gibco	11120052	Für die Blastomer-Isolierung.
Multitest Slide 10 Well	MP Biomedizin	ICN6041805	Für die Blastomer-Isolierung
Penicillin-Streptomycin (10.000 U/ml)	Gibco	15140148	Für die Blastomer-Isolierung.
Polyvinylpyrrolidon	Fisher BioReagenzien	Nr. BP431-100	Für die Blastomer-Isolierung
Kaliumchlorid	Bioladen	POC888	Für die Blastomer-Isolierung
Schneider's Drosophila Sterilmedium	Gibco	21720024	Für die Blastomer-Isolierung. Arbeiten in der Gewebekulturhaube.
Natriumchlorid	Bioladen	SOD001	Für die Blastomer-Isolierung
Natronlauge, 10 N	Fisher Chemical	SS255-1	Für die Blastomer-Isolierung
Spritzenvorsatzfilter, PTFE, unsteril	Basix	13100115	Für die Blastomer-Isolierung.
Tygon S3 Laborschlauch, Formulierung E-3603, Innendurchmesser 3.175 mm	Saint Gobain Performance Kunststoffe	Tel.: 89403-862	Für die Blastomer-Isolierung.
Tygon S3 Laborschlauch, Formulierung E-3603, Innendurchmesser 6,35 mm	Saint Gobain Performance Kunststoffe	Tel.: 89403-854	Für die Blastomer-Isolierung.