Darmdissektion bei adulten Zebrafischen: Eine Technik zur Analyse der Absorption von Verbindungen

Zusammenfassung

Quelle: Jie J. et. al., Orale Intubation von adulten Zebrafischen: Ein Modell zur Bewertung der intestinalen Aufnahme von bioaktiven Verbindungen. J. Vis. Exp. (2018).

Dieses Video beschreibt die Technik der Isolierung des Darms, um die Aufnahme von bioaktiven Verbindungen im Darm zu bewerten. In dieser Probe werden wir den Darm eines erwachsenen Zebrafisches isolieren, um die Aufnahme von Immunstimulanzien zu analysieren.

Protokoll

1. Zebrafisch-Darm-Dissektion

1. Nach einer bestimmten Zeit nach der Intubation (z. B. 5 h und/oder 24 h) wird der Fisch mit einem Netz in eine 300 mg/l Ethyl-3-aminobenzoat-Methansulfonat-Lösung (MS-222) zur Euthanasie gelegt. Stellen Sie sicher, dass sich das Operculum nicht mehr bewegt und kein Schwanzklemmreflex vorhanden ist. Fünf Minuten sind in der Regel ausreichend.
2. Heben Sie das eingeschläferte Tier mit einem Netz auf und legen Sie es auf ein Filterpapier.
   Anmerkung: Das Filterpapier ist sehr nützlich, um das anhaftende Gewebe entlang des Darms zu entfernen.
3. Machen Sie mit einer scharfen Präparierschere einen halbkreisförmigen Schnitt vom Anus bis zum Operculum und öffnen Sie den Schnitt mit einer feinen Pinzette. Schneiden Sie beide Enden des Darms ab, nehmen Sie alle inneren Organe heraus und legen Sie sie auf das Filterpapier.
   Vorsicht: Reduzieren Sie schnell den Zellstoffwechsel und den Zelltod.
   Anmerkung: Alternativ können Sie das Klebegewebe in PBS und auf Eis entfernen.
4. Trennen Sie den Darm von den inneren Organen, achten Sie darauf, dass er seine Ausrichtung (vom vorderen zum hinteren Darmsegment) beibehält und ihn ausstreckt. Normalerweise ist das vordere Darmsegment breiter als das hintere Segment. Achten Sie darauf, dass beim Präparieren der gesamte Darm erhalten wird.
   Anmerkung: Das hintere Ende ist bei kleinen Fischen recht fein und zerbrechlich und kann abbrechen, insbesondere bei Tieren <0,7 g.
5. Rollen Sie den Darm mit einer Pinzette auf das Filterpapier, um das Klebegewebe vom Darm zu lösen.
6. Fahren Sie fort, um den Darm für verschiedene nachgelagerte Analysen vorzubereiten

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Nr. MS-222	Sigma Aldrich	Nr. E10521	Pulver
10x PBS	Sigma Aldrich	Nr. P5493
Filterpapier	Filter-Labor	RM14034252