Intraduktale Injektion: Abgabe der Injektionsmischung in die Kanäle der Brustdrüse der Maus

Zusammenfassung

Quelle: Xiang, D., et al. Modellierung von Brustkrebs durch eine intraduktale Injektion von Cre-exprimierendem Adenovirus in die Brustdrüse der Maus. J. Vis. Exp (2019).

Dieses Video beschreibt eine intraduktale Injektionstechnik, bei der wir Injektionsmischung in die Kanäle der Brustdrüsen von Mäusen einbringen.

Protokoll

1. Intraduktale Injektion

1. Verwenden Sie während des gesamten chirurgischen Eingriffs aseptische Techniken.
2. Machen Sie eine Schnittstelle auf der Haut in einer Länge von ~1 cm zwischen den beiden vierten Leisten-MGs (Abbildung 1). Trennen Sie vorsichtig den Hautlappen (mit dem MG) vom parietalen Peritoneum, um den Milchgangbaum sichtbar zu machen.
3. Halten Sie den Nippel vorsichtig mit der Pinzette des Uhrmachers fest und entfernen Sie den äußeren Nippel, ohne die Haut in der Nähe zu schneiden, mit einer Mikrodissektionsschere.
4. Laden Sie ~3–5 μl Ad-Cre-Injektionsgemisch in eine 25-μl-Hamilton-Spritze mit einer 33-G-Metallnabennadel. Schätzen Sie das Volumen der Injektionsmischung in der Spritze auf der Grundlage des in der Mischung enthaltenen blauen Farbstoffs.
   Anmerkung: Verwenden Sie ein kleineres Volumen (z. B. 3 μl), wenn Sie in MGs von 3–4 Wochen alten Frauen injizieren, und ein größeres Volumen (z. B. 10 μl), wenn Sie in MGs von stillenden Frauen injizieren.
5. Halten Sie den Rand des Hautlappens vorsichtig mit einer fein gebogenen Pinzette fest und injizieren Sie die Ad-Cre-Injektionsmischung langsam in die Brustwarze, während Sie die Ausbreitung des blauen Farbstoffs in den Milchgangbaum überwachen. Halten Sie die Injektionsrate so gering wie möglich, um eine Schädigung des duktalen Lumens zu vermeiden.
   Anmerkung: Injizierte Flüssigkeit (wie durch den enthaltenen Bromphenolblau-Farbstoff dargestellt), die sich über den gesamten duktalen Baum verteilt, ohne in das Stromakompartiment einzudringen, deutet auf eine erfolgreiche intraduktale Injektion hin.
6. Ziehen Sie die Nadel vorsichtig aus dem Nippel zurück, um ein Auslaufen der eingespritzten Flüssigkeit zu vermeiden.
7. Untersuchen Sie die distale Seite (d. h. von der Brustwarze weg) des MG oder den umgebenden Bereich der injizierten Brustwarze. Beachten Sie, dass ein anschwellender blauer Farbstoff (d. h. Farbstoff, der in das nahe gelegene Stroma diffundiert) eher auf eine Injektion von Brustfettpolstern als auf eine erfolgreiche intraduktale Injektion hinweist.
8. Die Operationswunden (ab 1.2) in der Haut mit Wundklammern verschließen.

2. Postoperative Versorgung

1. Nehmen Sie die Maus aus der Anästhesie und legen Sie sie zur Genesung auf ein Heizkissen in einem sauberen Käfig.
2. Meloxicam erneut subkutan in einer Dosierung von 5 mg/kg 24 h nach der Operation verabreichen.
3. Überwachen Sie den allgemeinen Zustand des Tieres und suchen Sie 5 Tage lang nach Anzeichen einer Infektion an der Inzisionsstelle.
4. Die Wundclips werden ~7-10 Tage nach der Operation entfernt.

Ergebnisse

Abbildung 1: Schematische Darstellung der intraduktalen Injektion des Ad-Cre-Virus in ein MG.(A) Inzisionsstelle in der Mittellinie zwischen den beiden vierten MGs. (B) Intraduktale Injektion von Ad-Cre mit einem blauen Farbstoff (zur besseren Visualisierung) in eines der vierten MGs. (C) Verschluss des Schnittes in der Haut durch Wundklammern

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
33-Gauge-Nadel	Hamilton	Artikel-Nr.: 7803-05	Spitze Style 3 stumpf
7mm Reflex Clip	Braintree Wissenschaftlich	RF7 CS
Adenovirus, Ad-K5-Cre	Viraler Vektorkern der Universität von Iowa	AD5-BK5-CRE (VVC-Berns-1547)
Adenovirus, Ad-K8-Cre	Viraler Vektorkern der Universität von Iowa	Ad5mK8-nlsCre
Bromphenol Blau	Sigma-Aldrich	B0126-25G
Hamilton Spritze	Hamilton	Artikel-Nr.: 7636-01	0,025 mL
Mikro-Präparierschere	Pentair	9M	Pinzette des Uhrmachers
Mikro-Präparierpinzette	Dumont	M5

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